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Cry1I蛋白杀虫活性及作用机制的研究

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Cry1I蛋白杀虫活性及作用机制的研究
论文目录
 
中文摘要第1-7页
Abstract第7-10页
中英文缩略语表第10-17页
第一章 绪论第17-39页
  1.1 Cry 蛋白简介第17-18页
  1.2 Cry 蛋白的结构与功能第18-22页
    1.2.1 Domain I第20页
    1.2.2 Domain II第20-21页
    1.2.3 Domain III第21-22页
  1.3 Cry 蛋白在鳞翅目害虫中的作用机制第22-28页
    1.3.1 受体的结合第24-25页
    1.3.2 前孔洞的形成第25-26页
    1.3.3 毒素插入细胞膜第26-28页
  1.4 鳞翅目昆虫对 Bt 蛋白产生抗性机制第28-32页
    1.4.1 钙粘蛋白和类钙粘蛋白(CAD)的突变第30-31页
    1.4.2 APN 的突变第31页
    1.4.3 ALP 的突变第31页
    1.4.4 ABCC2 的突变第31-32页
  1.5 解决或延缓害虫抗性产生的方法第32-34页
  1.6 Cry 蛋白的结合分析第34-36页
    1.6.1 常见的结合分析方法第34-35页
    1.6.2 欧洲玉米螟的结合分析第35-36页
  1.7 cry1I 基因及其蛋白第36-37页
  1.8 本研究的目的和意义与立题依据第37-39页
第二章 cry1Ie2 基因的表达、纯化及生物活性测定第39-57页
  2.1 实验材料第39-41页
    2.1.1 菌株与质粒第39-40页
    2.1.2 试剂第40页
    2.1.3 供试昆虫第40页
    2.1.4 人工饲料第40-41页
    2.1.5 主要仪器设备第41页
  2.2 实验方法第41-45页
    2.2.1 标准菌株 T03B001 晶体形态学观察第41-42页
    2.2.2 T03B001 菌株基因组 DNA 序列的获取第42页
    2.2.3 序列分析第42页
    2.2.4 cry1Ie2 基因的表达及蛋白提取第42-43页
    2.2.5 Cry1Ie2 蛋白 SDS-PAGE 检测第43页
    2.2.6 亲和层析纯化 Cry1Ie2 蛋白第43页
    2.2.7 透析第43页
    2.2.8 Cry1Ie2 蛋白的活化第43-44页
    2.2.9 离子交换纯化 Cry1Ie2 蛋白第44页
    2.2.10 其它 Cry 蛋白的纯化第44页
    2.2.11 生物活性测定第44-45页
  2.3 结果第45-54页
    2.3.1 晶体形态观察第45页
    2.3.2 T03B001 菌株中基因类型第45-46页
    2.3.3 Cry1Ie2 蛋白的序列分析第46-47页
    2.3.4 cry1Ie2 基因在大肠杆菌中的表达第47-48页
    2.3.5 亲和层析纯化 Cry1Ie2 蛋白第48-49页
    2.3.6 Cry1Ie2 蛋白的活化第49-50页
    2.3.7 离子交换纯化 Cry1Ie2 蛋白第50-51页
    2.3.8 亚洲玉米螟,亚洲棉铃虫,甜菜夜蛾生物活性测定第51-52页
    2.3.9 欧洲玉米螟生物活性测定第52-53页
    2.3.10 秋粘虫,烟蚜夜蛾,美洲棉铃虫生物活性测定第53-54页
    2.3.11 黄粉虫生物活性测定第54页
  2.4 讨论第54-55页
  2.5 小结第55-57页
第三章 Cry 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 结合分析第57-73页
  3.1 材料第57-59页
    3.1.1 供试昆虫第57页
    3.1.2 常用试剂及材料第57-59页
    3.1.3 常用溶液与缓冲液第59页
    3.1.4 主要仪器设备第59页
  3.2 方法第59-63页
    3.2.1 中肠及 BBMV 的提取第59-60页
    3.2.2 Cry1Ab 蛋白的同位素(~125I)标记第60-61页
    3.2.3 同位素(~125I)标记结果的检测第61页
    3.2.4 Cry1Ie2 蛋白的生物素标记及 Western Blot 检测第61-62页
    3.2.5 ~125I-Cry1Ab 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 的饱和结合分析第62页
    3.2.6 ~125I-Cry1Ab 与 Cry1Ie2 蛋白的竞争结合分析第62-63页
    3.2.7 Bio-Cry1Ie2 与 Cry1Ab 或 Cry1Fa 蛋白的竞争结合分析第63页
  3.3 结果第63-71页
    3.3.1 BBMV 的提取第63-64页
    3.3.2 Cry1Ab 蛋白的同位素(~125I)标记第64-66页
    3.3.3 Western Blot 检测 Cry1Ie2 蛋白生物素标记结果第66页
    3.3.4 ~125I-Cry1Ab 蛋白与欧洲玉米螟 BBMV 饱和结合分析第66-68页
    3.3.5 ~125I-Cry1Ab 与 Cry1Ie 蛋白的竞争结合分析第68-69页
    3.3.6 Bio-Cry1Ie2 与 Cry1Ab 或 Cry1Fa 蛋白的竞争结合分析第69-71页
  3.4 讨论第71-72页
  3.5 小结第72-73页
第四章 欧洲玉米螟 BBMV 上 Cry1Ie 蛋白结合蛋白的鉴定第73-83页
  4.1 材料第73-74页
    4.1.1 供试昆虫第73页
    4.1.2 常用试剂及材料第73-74页
    4.1.3 主要仪器设备第74页
  4.2 方法第74-76页
    4.2.1 BBMV 的溶解第74页
    4.2.2 BBMV 的纯化第74页
    4.2.3 斑点杂交分析第74-75页
    4.2.4 亲和纯化鉴定 Cry1Ie2 结合蛋白第75-76页
    4.2.5 质谱分析 Cry1Ie2 结合蛋白第76页
  4.3 结果第76-80页
    4.3.1 BBMV 的纯化第76-77页
    4.3.2 斑点杂交分析第77-79页
    4.3.3 亲和纯化鉴定 Cry1Ie2 结合蛋白第79页
    4.3.4 质谱分析 Cry1Ie2 结合蛋白第79-80页
  4.4 讨论第80-81页
  4.5 小结第81-83页
第五章 新型 cry1Ia 基因的表达及生物活性测定第83-103页
  5.1 实验材料第83-86页
    5.1.1 菌株与质粒第83-84页
    5.1.2 引物及序列第84-85页
    5.1.3 试剂第85-86页
    5.1.4 主要仪器设备第86页
  5.2 实验方法第86-91页
    5.2.1 全长扩增 PCR 反应体系第86-87页
    5.2.2 DNA 回收第87页
    5.2.3 质粒酶切体系第87页
    5.2.4 DNA 片段连接第87-88页
    5.2.5 E. coil 感受态细胞的制备第88页
    5.2.6 E. coil 的热击转化第88页
    5.2.7 阳性克隆的 PCR 鉴定第88-89页
    5.2.8 E. coil 质粒 DNA 提取第89页
    5.2.9 序列测定及分析第89页
    5.2.10 cry1Ia 基因的表达及蛋白提取第89-90页
    5.2.11 Cry1Ia 蛋白 SDS-PAGE 检测第90页
    5.2.12 质谱分析第90-91页
    5.2.13 生物活性测试第91页
    5.2.14 Cry1Ia 蛋白氨基酸序列分析第91页
    5.2.15 Cry1Ia 蛋白三维结构的预测第91页
    5.2.16 进化分析第91页
  5.3 结果第91-100页
    5.3.1 cry1Ia 基因表达菌株的构建第91-93页
    5.3.2 Cry1Ia 蛋白的 SDS-PAGE 检测第93-94页
    5.3.3 Cry1Ia 蛋白的质谱分析第94页
    5.3.4 Cry1Ia 蛋白小菜蛾生物活性测试第94-95页
    5.3.5 Cry1Ia 蛋白玉米螟生物活性测试第95-96页
    5.3.6 Cry1Ia 蛋白氨基酸序列分析第96-99页
    5.3.7 Cry1Ia 蛋白的进化分析第99-100页
  5.4 讨论第100-101页
  5.5 小结第101-103页
结论第103-105页
参考文献第105-119页
作者简介及在学期间科研成果第119-121页
致谢第121-123页

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