论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-7页 |
| 英文摘要 | 第7-15页 |
| 第1部分 绪论 | 第15-35页 |
| 1 PCV 的病原学特征研究 | 第15-16页 |
| 1.1 PCV 的发现与分类地位 | 第15-16页 |
| 1.2 PCV 形态和理化特征 | 第16页 |
| 1.3 培养 | 第16页 |
| 2 PCV 分子生物学特性 | 第16-18页 |
| 2.1 基因组成特征 | 第16页 |
| 2.2 PCV2 基因型与基因重组 | 第16-17页 |
| 2.3 毒力与基因型相关性 | 第17页 |
| 2.4 PCV 主要编码蛋白 | 第17-18页 |
| 2.4.1 Rep 蛋白 | 第17-18页 |
| 2.4.2 Cap 蛋白 | 第18页 |
| 2.4.3 ORF3 编码蛋白 | 第18页 |
| 3 PCV2 流行病学研究 | 第18-19页 |
| 3.1 PCV2 流行地区 | 第18-19页 |
| 3.2 PCV2 流行病学特征 | 第19页 |
| 4 PCV2 感染与 PCVD 发生 | 第19-21页 |
| 4.1 PCV2 感染与免疫 | 第19-20页 |
| 4.2 断奶仔猪多系统衰歇综合征（PMWS） | 第20页 |
| 4.3 猪皮炎肾病综合征（PDNS） | 第20-21页 |
| 4.4 繁殖性障碍 | 第21页 |
| 4.5 呼吸道综合征（PRDC） | 第21页 |
| 4.6 PCV2 致病机理 | 第21页 |
| 5 PCV2 感染相关诊断技术 | 第21-27页 |
| 5.1 PCV2 病原学诊断技术 | 第22-25页 |
| 5.1.1 病毒细胞培养与鉴定 | 第22页 |
| 5.1.2 PCV2 基因诊断技术 | 第22-25页 |
| 5.1.3 间接免疫荧光试验（IFA） | 第25页 |
| 5.1.4 免疫组织化学（IHC） | 第25页 |
| 5.1.5 抗原捕获 ELISA | 第25页 |
| 5.2 血清抗体检测技术 | 第25-27页 |
| 5.2.1 免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA） | 第25-26页 |
| 5.2.2 酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第26页 |
| 5.2.3 胶体金检测技术 | 第26-27页 |
| 5.2.4 间接免疫荧光检测试剂（IFA） | 第27页 |
| 6 PCVD 综合防控研究 | 第27-28页 |
| 7 PCV2 疫苗研究进展 | 第28-33页 |
| 7.1 全病毒灭活疫苗 | 第28-29页 |
| 7.2 弱毒疫苗 | 第29页 |
| 7.3 亚单位疫苗 | 第29-30页 |
| 7.4 载体类活疫苗 | 第30-31页 |
| 7.5 DNA 重组弱毒疫苗 | 第31-32页 |
| 7.6 核酸疫苗 | 第32页 |
| 7.7 PCV2 新型标记疫苗 | 第32-33页 |
| 7.8 RNA 治疗性疫苗 | 第33页 |
| 8 本项目研究目的和意义 | 第33-35页 |
| 第2部分 试验研究部分 | 第35-98页 |
| 第1章 猪圆环病毒 2 型 PCR 检测方法建立及试剂盒研制 | 第35-44页 |
| 1.1 材料与方法 | 第35-38页 |
| 1.2 结果 | 第38-42页 |
| 1.3 讨论 | 第42-44页 |
| 第2章 猪圆环病毒 2 型实时荧光定量 PCR 检测方法建立及应用 | 第44-55页 |
| 2.1 材料与方法 | 第44-46页 |
| 2.2 结果与分析 | 第46-53页 |
| 2.3 讨论 | 第53-55页 |
| 第3章 山东地区 PCV2 流行毒株分子特征分析 | 第55-65页 |
| 3.1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 3.1.1 病料采集 | 第55页 |
| 3.1.2 标准毒株与细胞系 | 第55页 |
| 3.1.3 试剂 | 第55-56页 |
| 3.1.4 主要实验仪器 | 第56页 |
| 3.1.5 引物设计与合成 | 第56页 |
| 3.1.6 样品处理与 DNA 提取 | 第56-57页 |
| 3.1.7 PCV2 ORF2 基因扩增反应 | 第57页 |
| 3.1.8 PCR 产物回收、连接及序列测定 | 第57页 |
| 3.1.9 遗传变异分析 | 第57-58页 |
| 3.1.10 PCV2 基因型鉴别 PCR 检测方法建立 | 第58页 |
| 3.1.11 PCR 性能检测 | 第58页 |
| 3.1.12 临床样品 PCV2a 和 PCV2b 基因型鉴别检测 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-63页 |
| 3.2.1 ORF2 基因克隆和序列测定 | 第58-59页 |
| 3.2.2 分离毒株基因遗传变异与基因型鉴定 | 第59-61页 |
| 3.2.3 PCV2 基因型鉴别 PCR 检测方法建立 | 第61页 |
| 3.2.4 敏感性、特异性及重复性试验 | 第61-62页 |
| 3.2.5 基因型鉴别 PCR 检测方法应用 | 第62-63页 |
| 3.3 讨论 | 第63-65页 |
| 第4章 猪圆环病毒 2 型间接 ELISA 抗体检测试剂盒研制及应用 | 第65-85页 |
| 4.1 材料和方法 | 第65-71页 |
| 4.1.1 质粒和表达菌株 | 第65页 |
| 4.1.2 标准血清和血清样品 | 第65页 |
| 4.1.3 试验所需试剂 | 第65页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第65-66页 |
| 4.1.5 引物设计 | 第66页 |
| 4.1.6 PCV2 DNA 提取 | 第66页 |
| 4.1.7 PCV2 Cap 基因克隆及鉴定 | 第66-67页 |
| 4.1.8 重组表达载体构建与鉴定 | 第67-68页 |
| 4.1.9 Cap 重组蛋白表达 | 第68页 |
| 4.1.10 表达特性分析与 Cap 重组蛋白活性检测 | 第68页 |
| 4.1.11 包涵体提取与纯化 | 第68页 |
| 4.1.12 ELISA 方法建立 | 第68-70页 |
| 4.1.13 PCV2 间接 ELISA 检测试剂盒临床应用 | 第70页 |
| 4.1.14 PCV2 疫苗免疫后抗体水平监测 | 第70-71页 |
| 4.2 结果 | 第71-83页 |
| 4.2.1 PCR 扩增基因片段 | 第71页 |
| 4.2.2 重组表达载体构建与鉴定 | 第71-72页 |
| 4.2.3 Cap 重组蛋白表达情况 | 第72-73页 |
| 4.2.4 诱导表达蛋白可溶性鉴定及 Western-blot 分析 | 第73-74页 |
| 4.2.5 Cap 重组蛋白纯化 | 第74页 |
| 4.2.6 ELISA 方法的建立 | 第74-80页 |
| 4.2.7 ELISA 试剂盒的应用 | 第80-83页 |
| 4.2.8 PCV2 疫苗免疫后血清抗体测定 | 第83页 |
| 4.3 讨论 | 第83-85页 |
| 第5章 猪圆环病毒 2 型胶体金快速检测试纸条研制及应用 | 第85-98页 |
| 5.1 材料与方法 | 第85-89页 |
| 5.1.1 血清、菌株和载体 | 第85页 |
| 5.1.2 主要试验材料 | 第85页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第85页 |
| 5.1.4 PCV2 Cap 蛋白表达与纯化 | 第85-86页 |
| 5.1.5 器皿预处理 | 第86页 |
| 5.1.6 胶体金的制备 | 第86页 |
| 5.1.7 标记 SPA 预处理 | 第86页 |
| 5.1.8 标记最适 pH 值确定 | 第86页 |
| 5.1.9 标记最适蛋白浓度确定 | 第86-87页 |
| 5.1.10 胶体金标记 SPA 及其纯化 | 第87页 |
| 5.1.11 样品垫和金标垫处理 | 第87页 |
| 5.1.12 硝酸纤维素膜（NC 膜）制备 | 第87页 |
| 5.1.13 试纸条的组装 | 第87-88页 |
| 5.1.14 样品检测及判定标准 | 第88页 |
| 5.1.15 胶体金检测试纸性能检测 | 第88-89页 |
| 5.1.16 PCV2 胶体金检测试纸临床应用 | 第89页 |
| 5.2 结果 | 第89-95页 |
| 5.2.1 Cap 蛋白表达与纯化 | 第89-90页 |
| 5.2.2 胶体金的制备 | 第90页 |
| 5.2.3 标记最适 pH 值确定 | 第90-91页 |
| 5.2.4 标记最适 SPA 蛋白浓度确定 | 第91-92页 |
| 5.2.5 胶体金标记 SPA 的制备 | 第92页 |
| 5.2.6 PCV2 Cap 蛋白包被浓度确定 | 第92页 |
| 5.2.7 IgG 包被浓度确定 | 第92-93页 |
| 5.2.8 胶体金检测试纸组装及检测结果 | 第93页 |
| 5.2.9 敏感性、特异性和符合率 | 第93-94页 |
| 5.2.10 交叉反应试验 | 第94页 |
| 5.2.11 稳定性试验 | 第94-95页 |
| 5.2.12 保存期试验 | 第95页 |
| 5.2.13 胶体金检测试纸的应用 | 第95页 |
| 5.3 讨论 | 第95-98页 |
| 结论 | 第98-99页 |
| 参考文献 | 第99-119页 |
| 导师简介 | 第119-120页 |
| 作者简介 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
