论文目录 | |
| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略词 | 第7-11页 |
| 引言 | 第11-16页 |
| 第一章 棉花抗病性与其组织结构和漆酶的关系研究 | 第16-40页 |
| 1 材料与方法 | 第16-23页 |
| 1.1 试验材料 | 第16-17页 |
| 1.2 试验方法 | 第17-23页 |
| 1.2.1 棉苗的培育 | 第17页 |
| 1.2.2 黄萎病菌的培养及接菌处理 | 第17页 |
| 1.2.3 黄萎病菌侵染的棉苗根部组织显微观察 | 第17页 |
| 1.2.4 黄萎病菌侵染的棉苗石蜡切片制作与染色观察 | 第17-20页 |
| 1.2.5 田间病圃棉花组织材料的处理 | 第20页 |
| 1.2.6 细胞壁糖组分含量的测定 | 第20-21页 |
| 1.2.7 酸可溶性木质素含量的测定 | 第21页 |
| 1.2.8 酸不可溶性木质素含量的测定 | 第21页 |
| 1.2.9 棉花总 RNA 提取 | 第21-22页 |
| 1.2.10 cDNA 制备 | 第22页 |
| 1.2.11 棉花漆酶基因 GhLAC 的 Real-time PCR 分析 | 第22-23页 |
| 2 结果与分析 | 第23-36页 |
| 2.1 棉花通过抵御黄萎病菌进入根部组织来提高对黄萎病的抗性 | 第23-24页 |
| 2.2 细胞壁的木质化与棉花的抗病性一致 | 第24-25页 |
| 2.3 细胞壁酸不可溶木质素含量与棉花抗病性一致 | 第25-33页 |
| 2.3.1 细胞壁糖组分含量与棉花抗病性的关系分析 | 第25-31页 |
| 2.3.2 棉花酸可溶性木质素含量检测波长的选择 | 第31-32页 |
| 2.3.3 棉花酸可溶性木质素含量与棉花抗病性的关系分析 | 第32-33页 |
| 2.3.4 棉花酸不可溶性木质素含量与棉花抗病性的关系分析 | 第33页 |
| 2.4 病原菌侵染棉花后漆酶基因的表达量显著增加 | 第33-36页 |
| 3 讨论 | 第36-38页 |
| 4 小结 | 第38-40页 |
| 第二章 通用型植物表达载体 pCamE 载体的构建 | 第40-65页 |
| 1 材料与方法 | 第41-50页 |
| 1.1 试验材料 | 第41-42页 |
| 1.2 试验方法 | 第42-50页 |
| 1.2.1 碱裂解法提取质粒 | 第42页 |
| 1.2.2 热击法转化大肠杆菌 | 第42页 |
| 1.2.3 CaMV 35S 启动子基因 pro 的克隆 | 第42-43页 |
| 1.2.4 NOS 终止子基因 Ter 的克隆 | 第43页 |
| 1.2.5 植物表达载体 pCamE 的构建 | 第43-44页 |
| 1.2.6 植物表达载体 pCamE 拷贝数计算 | 第44-45页 |
| 1.2.7 植物表达载体 pCamE 的生物信息学分析及图谱绘制 | 第45页 |
| 1.2.8 绿色荧光蛋白基因 egfp 的克隆 | 第45页 |
| 1.2.9 原核表达载体 pETGFP 的构建 | 第45页 |
| 1.2.10 eGFP 在 E. Coli BL21 中的诱导表达 | 第45页 |
| 1.2.11 表达载体 pCamGFP 的构建 | 第45-46页 |
| 1.2.12 表达载体 pCamSalGFP 的构建 | 第46页 |
| 1.2.13 表达载体 pCamDHAPSGFP 的构建 | 第46页 |
| 1.2.14 洋葱表皮细胞的基因枪轰击 | 第46-48页 |
| 1.2.15 农杆菌感受态细胞的制备 | 第48页 |
| 1.2.16 冻融法转化农杆菌 | 第48页 |
| 1.2.17 拟南芥的种植 | 第48-49页 |
| 1.2.18 农杆菌转化拟南芥 | 第49页 |
| 1.2.19 转基因阳性植株的筛选 | 第49-50页 |
| 1.2.20 SDS 法提取拟南芥基因组 DNA | 第50页 |
| 1.2.21 转基因拟南芥的显微观察 | 第50页 |
| 2 结果与分析 | 第50-62页 |
| 2.1 植物表达载体 pCamE 的构建与验证 | 第50-54页 |
| 2.1.1 CaMV 35S 启动子基因 pro 的克隆 | 第50-51页 |
| 2.1.2 NOS 终止子基因 ter 的克隆 | 第51-52页 |
| 2.1.3 植物表达载体 pCamE 的构建 | 第52-54页 |
| 2.2 植物表达载体 pCamE 的序列分析与图谱绘制 | 第54-56页 |
| 2.2.1 植物表达载体 pCamE 拷贝数计算 | 第54页 |
| 2.2.2 载体 pCamE 序列组件和突变位点分析 | 第54-55页 |
| 2.2.3 植物表达载体 pCamE 的限制性内切酶位点信息分析 | 第55页 |
| 2.2.4 植物表达载体 pCamE 图谱 | 第55-56页 |
| 2.3 绿色荧光蛋白基因 egfp 的克隆与原核表达 | 第56-58页 |
| 2.3.1 绿色荧光蛋白基因 egfp 的克隆 | 第56-57页 |
| 2.3.2 原核表达载体 pETGFP 的构建 | 第57页 |
| 2.3.3 eGFP 在 E. Coli BL21 中的诱导表达 | 第57-58页 |
| 2.4 植物表达载体 pCamE 表达在洋葱表皮细胞内功能验证 | 第58-59页 |
| 2.4.1 植物表达载体 pCamGFP、pCamSalGFP 和 pCamDAHPSGFP 的构建 | 第58-59页 |
| 2.4.2 植物表达载体 pCamE 表达组件在洋葱表皮细胞内功能验证 | 第59页 |
| 2.5 植物表达载体 pCamE 在转基因拟南芥中功能验证 | 第59-62页 |
| 2.5.1 植物表达载体 pCamE 在转基因拟南芥中的遗传稳定性分析 | 第59-61页 |
| 2.5.2 植物表达载体 pCamE 在转基因拟南芥各组织细胞中的表达鉴定 | 第61-62页 |
| 3 讨论 | 第62-64页 |
| 4 小结 | 第64-65页 |
| 第三章 GhLAC 基因的克隆与功能验证 | 第65-106页 |
| 1 材料与方法 | 第66-72页 |
| 1.1 试验材料 | 第66-67页 |
| 1.2 试验方法 | 第67-72页 |
| 1.2.1 棉花总 RNA 提取和 cDNA 制备 | 第67页 |
| 1.2.2 GhLAC 的克隆 | 第67页 |
| 1.2.3 病毒介导的基因沉默（VIGS） | 第67-68页 |
| 1.2.4 CTAB 法提取棉花基因组 DNA | 第68页 |
| 1.2.5 GhLAC 基因组 DNA 的克隆 | 第68-69页 |
| 1.2.6 GhLAC 的生物信息学分析 | 第69页 |
| 1.2.7 GhLAC 超表达载体 pGNLac 的构建 | 第69页 |
| 1.2.8 GhLAC 融合表达载体 pCamLacGFP 的构建 | 第69页 |
| 1.2.9 GUS 序列的克隆 | 第69-70页 |
| 1.2.10 GhLAC RNAi 载体 ipCamLac 的构建 | 第70页 |
| 1.2.11 载体 pGNLac、ipCamLac 和 pCamLacGFP 的拟南芥转化 | 第70页 |
| 1.2.12 SDS 法提取拟南芥基因组 DNA | 第70页 |
| 1.2.13 融合蛋白 GhLacGFP 在拟南芥中的 Congforcal 观察 | 第70页 |
| 1.2.14 转基因拟南芥接菌试验 | 第70-71页 |
| 1.2.15 转基因拟南芥的表型特征统计 | 第71页 |
| 1.2.16 转基因拟南芥糖含量的检测 | 第71页 |
| 1.2.17 酸可溶性木质素含量的测定 | 第71页 |
| 1.2.18 酸不可溶性木质素含量的测定 | 第71页 |
| 1.2.19 转基因拟南芥木质素含量的检测 | 第71-72页 |
| 2 结果与分析 | 第72-101页 |
| 2.1 GhLAC 的克隆与生物信息学分析 | 第72-78页 |
| 2.1.1 GhLAC 的克隆 | 第72-73页 |
| 2.1.2 GhLAC 的信号肽分析 | 第73-74页 |
| 2.1.3 GhLAC 生物信息学亚细胞定位 | 第74页 |
| 2.1.4 GhLAC 基因跨膜结构域的分析 | 第74-75页 |
| 2.1.5 GhLAC 蛋白质序列的功能位点分析 | 第75-77页 |
| 2.1.6 GhLAC 钙调素结构域的分析 | 第77页 |
| 2.1.7 GhLAC 的 blastn 比对分析 | 第77-78页 |
| 2.1.8 GhLAC 与拟南芥漆酶基因的比对分析 | 第78页 |
| 2.2 GhLAC 基因组 DNA 的克隆与分析 | 第78-82页 |
| 2.2.1 GhLAC 基因组 DNA 的克隆 | 第78-80页 |
| 2.2.2 GhLAC 基因组 DNA 的序列分析 | 第80-81页 |
| 2.2.3 GhLAC 基因组 DNA 在雷蒙德氏棉基因组草图中的序列分析 | 第81-82页 |
| 2.3 GhLAC 载体构建及转化拟南芥 | 第82-85页 |
| 2.3.1 GhLAC 超表达载体 pGNLac 的构建 | 第82-83页 |
| 2.3.2 GhLAC 融合表达载体 pCamLacGFP 的构建 | 第83页 |
| 2.3.3 GUS 序列的克隆 | 第83-84页 |
| 2.3.4 GhLAC RNAi 载体 ipCamLac 的构建 | 第84-85页 |
| 2.3.5 拟南芥的转化和筛选 | 第85页 |
| 2.4 GhLAC 的功能分析 | 第85-101页 |
| 2.4.1 GhLAC VIGS 后增加了棉花对黄萎病菌的敏感 | 第85-87页 |
| 2.4.2 GhLAC 蛋白定位于细胞壁 | 第87-88页 |
| 2.4.3 转基因拟南芥对黄萎病菌抗性的统计分析 | 第88-91页 |
| 2.4.4 黄萎病菌侵染转基因拟南芥的显微观察 | 第91-92页 |
| 2.4.5 拟南芥酸可溶性木质素含量检测波长的选择 | 第92-93页 |
| 2.4.6 转基因拟南芥酸可溶性木质素含量与抗病性的关系分析 | 第93-95页 |
| 2.4.7 转基因拟南芥酸不可溶性木质素含量与抗病性的关系分析 | 第95-96页 |
| 2.4.8 转基因拟南芥细胞壁糖组分含量与抗病性的关系分析 | 第96-98页 |
| 2.4.9 转基因拟南芥木质素组分含量与抗病性的关系分析 | 第98-101页 |
| 3 讨论 | 第101-103页 |
| 4 小结 | 第103-106页 |
| 结论 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-114页 |
| 在读期间发表的学术论文 | 第114-115页 |
| 在读期间已获得发明专利 | 第115-116页 |
| 作者简历 | 第116-117页 |
| 致谢 | 第117-118页 |
