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萍乡红鲫卵母细胞组化及ZP(zona pellucida)基因的分子特征和表达分析

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萍乡红鲫卵母细胞组化及ZP(zona pellucida)基因的分子特征和表达分析
论文目录
 
摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
第一章 文献综述第10-20页
  1.1 鱼类与其它动物受精生物学第10-11页
  1.2 透明带 (zona pellucida) ZP 基因研究概况第11-18页
    1.2.1 透明带的组成与结构特征第11-17页
    1.2.2 ZP 基因功能研究进展第17-18页
  1.3 本研究的内容、目的及意义第18-20页
第二章 萍乡红鲫卵母细胞中蛋白、糖类和脂肪的组化分析第20-27页
  2.1 实验材料第20页
  2.2 实验方法第20-24页
    2.2.1 蛋白质的显色方法(DNFB 法)第20-21页
    2.2.2 糖原显色方法(PAS 反应)第21-22页
    2.2.3 脂类显色方法(溴-苏丹黑法)第22-24页
  2.3 实验结果第24-26页
    2.3.1 不同时相的卵母细胞 DNFB 染色第24页
    2.3.2 不同时相的卵母细胞中 PAS 染色第24-25页
    2.3.3 卵母细胞中溴-苏丹黑染色脂类第25-26页
  2.4 讨论第26-27页
第三章 萍乡红鲫 ZP 基因克隆及其基因组结构分析第27-57页
  3.1 实验材料第28页
  3.2 实验方法第28-37页
    3.2.1 萍乡红鲫卵壳蛋白的分离和纯化第28页
    3.2.2 RACE-PCR 引物设计第28-30页
    3.2.3 萍乡红鲫卵巢组织总 RNA 提取第30页
    3.2.4 RNA 反转录成 cDNA第30-31页
    3.2.5 萍乡红鲫 ZP2 基因 cDNA 全长克隆第31-32页
    3.2.6 萍乡红鲫四个基因组 DNA 文库的构建第32-34页
    3.2.7 GenomeWalker 法步移 ZP 基因组及其启动子序列第34-35页
    3.2.8 回收目的片段,与载体连接,感受态细胞制备以及转化测序第35-37页
  3.3 实验结果第37-54页
    3.3.1 萍乡红鲫卵壳蛋白的分离纯化第37-38页
    3.3.2 萍乡红鲫 ZP2 基因全长克隆和序列分析第38-44页
    3.3.3 萍乡红鲫 ZP3 基因 cDNA 以及 domain 结构域分析第44-47页
    3.3.4 萍乡红鲫四个基因组 DNA 文库的构建第47-48页
    3.3.5 步移 ZP2 基因启动子序列以及 ZP3.2 基因组序列第48-49页
    3.3.6 步移 ZP2 基因组序列以及 ZP3.1 基因组序列第49-50页
    3.3.7 萍乡红鲫 ZP3.1,ZP2 和 ZP3.2 基因组序列拼接和图示第50-51页
    3.3.8 分析 ZP2 和 ZP3.2 启动子序列第51-54页
  3.4 讨论第54-57页
    3.4.1 萍乡红鲫卵壳蛋白组分分析第54页
    3.4.2 萍乡红鲫 ZP2 和 ZP3 基因序列分析第54-55页
    3.4.3 萍乡红鲫基因组结构以及启动子序列分析第55-57页
第四章 萍乡红鲫 ZP 基因表达模式及其启动子活性分析第57-79页
  4.1 实验材料第58页
  4.2 实验方法第58-63页
    4.2.1 萍乡红鲫多个组织总 RNA 提取第58页
    4.2.2 RNA 反转录成 cDNA第58-59页
    4.2.3 荧光定量 PCR 检测萍乡红鲫 ZP 基因的表达第59页
    4.2.4 ZP2 基因原位杂交分析第59-60页
    4.2.5 构建萍乡红鲫 ZP3 和 ZP2 基因启动子与 GFP 的表达载体第60-62页
      4.2.6. 瞬时转染质粒进入 COS-7 细胞第62-63页
  4.3 结果第63-75页
    4.3.1 萍乡红鲫 ZP2 基因多个组织的差异性表达第63-66页
    4.3.2 萍乡红鲫卵母细胞不同发育时期 ZP2 和 ZP3 基因的表达第66-72页
    4.3.3 萍乡红鲫 ZP2 和 ZP3 基因启动子活性分析第72-75页
  4.4 讨论第75-79页
    4.4.1 萍乡红鲫多个组织 ZP2 基因差异性表达第75-76页
    4.4.2 萍乡红鲫卵母细胞不同发育时期 ZP2 和 ZP3 基因的表达分析第76-77页
    4.4.3 萍乡红鲫 ZP 基因启动子第77-79页
参考文献第79-87页
致谢第87-88页
攻读学位期间的研究成果第88页

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