论文目录 | |
摘要 | 第1-7页 |
Abstract | 第7-8页 |
缩略词表 | 第8-13页 |
第一章 前言 | 第13-27页 |
1.1 哺乳动物肝脏再生的生物学特征 | 第14-16页 |
1.2 哺乳动物肝脏再生与信号通路 | 第16-20页 |
1.2.1 启动阶段 | 第17-18页 |
1.2.2 增殖阶段 | 第18-19页 |
1.2.3 终止阶段 | 第19-20页 |
1.3 斑马鱼的肝脏结构与功能 | 第20-22页 |
1.4 斑马鱼肝脏再生及其研究进展 | 第22-24页 |
1.5 基因def及其研究进展 | 第24-26页 |
1.6 本研究的内容、目的与意义 | 第26-27页 |
第二章 材料与方法 | 第27-45页 |
2.1 斑马鱼品系及饲养 | 第27页 |
2.2 常规生化试剂及配方 | 第27-30页 |
2.3 DNA相关实验方法 | 第30-31页 |
2.3.1 基因的克隆 | 第30-31页 |
2.3.2 DNA测序 | 第31页 |
2.3.3 PCR鉴定转基因鱼及突变体 | 第31页 |
2.4 RNA相关实验方法 | 第31-35页 |
2.4.1 总RNA的提取 | 第32页 |
2.4.2 总RNA中基因组DNA的消化 | 第32页 |
2.4.3 两步法RT-PCR | 第32-33页 |
2.4.4 Northern杂交 | 第33-34页 |
2.4.5 转录组RNA测序(RNA seq) | 第34-35页 |
2.5 蛋白质相关实验方法 | 第35-37页 |
2.5.1 mu-Leg1多抗制备 | 第35-36页 |
2.5.2 蛋白质免疫印迹杂交(Western Blotting) | 第36页 |
2.5.3 抗体免疫荧光染色 | 第36-37页 |
2.6 组织原位杂交相关实验方法 | 第37-38页 |
2.6.1 肝脏组织切片的制备 | 第37页 |
2.6.2 Masson染色 | 第37页 |
2.6.3 HE染色 | 第37-38页 |
2.6.4 PAS染色 | 第38页 |
2.6.5 EdU(5-乙炔基-2’-脱氧尿苷)的标记及检测 | 第38页 |
2.7 斑马鱼的操作 | 第38-39页 |
2.7.1 肝脏部分切除手术(Partial Hepatectomy,PH) | 第38-39页 |
2.7.2 肝重/体重比值(Liver-to-Body Ratio,LBR)的测量 | 第39页 |
2.7.3 小分子药物的处理 | 第39页 |
2.8 斑马鱼显微注射 | 第39-40页 |
2.9 mu-leg1基因条件性剔除小鼠模型的建立 | 第40页 |
2.10 Western强度及荧光强度的定量 | 第40-41页 |
2.11 本研究涉及的列表 | 第41-45页 |
第三章 def~(hi429/+)突变体部分肝脏切除后切口处再生缺陷 | 第45-51页 |
3.1 def~(hi429/+)成年斑马鱼肝脏中Def单倍剂量表达不足 | 第45-46页 |
3.2 def~(hi429/+)突变体部分肝脏切除后切口处再生缺陷 | 第46-47页 |
3.3 def~(hi429/+)突变体部分肝脏切除后LBR值和肝组织结构未显异常 | 第47-51页 |
第四章 def~(hi429/+)突变体部分肝脏切除后伤口形成疤痕 | 第51-59页 |
4.1 def~(hi429/+)突变体术后早期细胞增殖或凋亡无异常 | 第51-53页 |
4.2 def~(hi429/+)突变体术后肝脏伤口无法正常重塑 | 第53-55页 |
4.3 def~(hi429/+)突变体术后伤口纤维化 | 第55-59页 |
第五章 def~(hi429/+)突变体术后伤口处结疤与异常的炎症反应有关 | 第59-73页 |
5.1 def~(hi429/+)突变体术后肝脏切口处TGFβ信号异常 | 第59-63页 |
5.2 def~(hi429/+)突变体肝脏伤口处胶原蛋白沉积与活性氧化物信号无关 | 第63-64页 |
5.3 def~(hi429/+)突变体肝脏术后伤口处TGFβ信号异常源于过度的炎症反应 | 第64-65页 |
5.4 def~(hi429/+)突变体肝脏内促炎症因子异常表达 | 第65-66页 |
5.5 def~(hi429/+)突变体肝脏术后炎症细胞行为紊乱 | 第66-73页 |
第六章 def~(hi429/+)突变体术后切口处结疤依赖于Def-p53信号通路 | 第73-83页 |
6.1 def~(hi429/+)突变体术后结疤源于肝细胞中Def单倍剂量表达不足 | 第73-79页 |
6.2 def~(hi429/+)突变体术后切口结疤依赖于p53信号通路的持续激活 | 第79-83页 |
第七章 def~(hi429/+)突变体术后结疤与HMGB1表达上调有关 | 第83-85页 |
7.1 def~(hi429/+)突变体肝脏中HMGB1表达上调 | 第83页 |
7.2 def~(hi429/+)突变体术后伤疤的形成依赖于HMGB1 | 第83-85页 |
第八章 肝脏再生细胞的来源 | 第85-95页 |
8.1 斑马鱼部分肝脏切除后切口处再生肝细胞具有肝前体细胞特性 | 第85-87页 |
8.2 斑马鱼部分肝脏切除后非切口处再生肝细胞的来源 | 第87-89页 |
8.3 Tg(fabp10a:CreER~(T2)转基因斑马鱼的构建及表达分析 | 第89-95页 |
第九章 斑马MJegl复系同源基因在小鼠中的表达谱分析及mu-legl基因敲除 | 第95-101页 |
9.1 小鼠mu-leg1基因克隆与序列分析 | 第95-96页 |
9.2 基因mu-leg1组织表达谱分析 | 第96-97页 |
9.3 mu-Leg1多抗的制备 | 第97页 |
9.4 mu-Leg1组织表达谱分析 | 第97-99页 |
9.5 mu-leg1基因条件性剔除小鼠模型的建立 | 第99-101页 |
第十章 结论与讨论 | 第101-107页 |
10.1 结论 | 第101-103页 |
10.2 讨论 | 第103-107页 |
参考文献 | 第107-116页 |
作者简介 | 第116-117页 |
致谢 | 第117-118页 |