论文目录 | |
| 致谢 | 第1-12页 |
| 缩略词 | 第12-16页 |
| 摘要 | 第16-18页 |
| Abstract | 第18-20页 |
| 前言 | 第20-22页 |
| 1 文献综述 | 第22-42页 |
| 1.1 花粉壁的发育和结构 | 第22-25页 |
| 1.1.1 孢粉素的代谢 | 第23-25页 |
| 1.1.2 纤维素的代谢 | 第25页 |
| 1.1.3 果胶的代谢 | 第25页 |
| 1.2 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白的相关研究 | 第25-29页 |
| 1.2.1 PGIP的结构 | 第26-27页 |
| 1.2.2 PGIP与PG的相互作用 | 第27页 |
| 1.2.3 PGIP的功能 | 第27-29页 |
| 1.2.3.1 参与花粉发育 | 第27-28页 |
| 1.2.3.2 参与植物抗病性 | 第28-29页 |
| 1.2.3.3 参与果实发育 | 第29页 |
| 1.3 阿拉伯半乳糖蛋白的相关研究 | 第29-32页 |
| 1.3.1 AGP的结构 | 第30页 |
| 1.3.2 在花粉发育中的作用 | 第30-31页 |
| 1.3.3 在信号转导中的作用 | 第31-32页 |
| 1.4 β-半乳糖苷酶的相关研究 | 第32-42页 |
| 1.4.1 BGAL的来源 | 第32-33页 |
| 1.4.2 BGAL在花粉发育中的作用 | 第33-34页 |
| 1.4.3 BGAL的固定 | 第34-35页 |
| 1.4.4 BGAL的生产运用 | 第35-42页 |
| 1.4.4.1 工业运用 | 第36-37页 |
| 1.4.4.2 生化过程中运用 | 第37-38页 |
| 1.4.4.3 医学运用 | 第38-39页 |
| 1.4.4.4 分析运用 | 第39-42页 |
| 2 白菜花粉发育相关基因BcMF19的功能验证 | 第42-60页 |
| 2.1 材料与方法 | 第43-52页 |
| 2.1.1 植物材料和主要试剂 | 第43页 |
| 2.1.2 RNA分离和cDNA的合成 | 第43-45页 |
| 2.1.2.1 RNA分离 | 第43-44页 |
| 2.1.2.2 RNA甲醛变性琼脂糖凝胶电泳检测 | 第44页 |
| 2.1.2.3 cDNA的合成 | 第44-45页 |
| 2.1.3 反义表达载体的构建 | 第45-48页 |
| 2.13.1 反义基因片段的分离 | 第45-46页 |
| 2.1.3.2 反义表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 2.1.3.3 p35S：：anti-BcMF19质粒转化农杆菌 | 第47-48页 |
| 2.1.4 反义表达载体对菜心的遗传转化 | 第48-49页 |
| 2.1.4.1 实验材料和菌种 | 第48页 |
| 2.1.4.2 菜心无菌苗的培养 | 第48页 |
| 2.1.4.3 菜心的遗传转化 | 第48-49页 |
| 2.1.5 转反义基因植株的分子检测 | 第49-51页 |
| 2.1.5.1 基因组DNA和总RNA的提取 | 第49-50页 |
| 2.1.5.2 PCR检测 | 第50页 |
| 2.1.5.3 荧光定量PCR检测 | 第50-51页 |
| 2.1.6 转反义基因植株的形态和细胞学观察 | 第51-52页 |
| 2.1.6.1 花粉生活力的观察 | 第51页 |
| 2.1.6.2 花粉扫描电镜和透射电镜观察 | 第51-52页 |
| 2.1.6.3 花粉体外萌发实验 | 第52页 |
| 2.1.6.4 花粉在雌蕊中的生长观察 | 第52页 |
| 2.2 结果 | 第52-58页 |
| 2.2.1 BcMF19反义表达载体的构建及对农杆菌的转化 | 第52-53页 |
| 2.2.1.1 白菜可育株系的花序总RNA的提取 | 第52页 |
| 2.2.1.2 白菜可育株系的花序cDNA合成 | 第52页 |
| 2.2.1.3 BcMF19反义片段的获得 | 第52页 |
| 2.2.1.4 反义载体的成功构建 | 第52-53页 |
| 2.2.2 获得反义BcMF19表达载体转化菜心植株 | 第53页 |
| 2.2.3 转反义基因植株的分子检测 | 第53-54页 |
| 2.2.4 bcmf19的形态和细胞学观察 | 第54-58页 |
| 2.2.4.1 bcmf19的花药形态异常 | 第54-55页 |
| 2.2.4.2 bcmf19花粉活力降低 | 第55-57页 |
| 2.2.4.3 bcmf19的花粉萌发异常 | 第57页 |
| 2.2.4.4 bcmf19的花粉形态畸形且内壁异常增厚 | 第57-58页 |
| 2.3 讨论 | 第58-60页 |
| 2.3.1 BcMF19与花粉发育和萌发有关 | 第58页 |
| 2.3.2 BcMF19参与抗病 | 第58-60页 |
| 3 白菜花粉发育相关基因BcAGP23的克隆和表达分析 | 第60-76页 |
| 3.1 材料与方法 | 第60-65页 |
| 3.1.1 植物材料与主要试剂 | 第60-61页 |
| 3.1.2 同源扩增基因DNA和cDNA全长 | 第61-62页 |
| 3.1.2.1 DNA提取 | 第61页 |
| 3.1.2.2 RNA分离和cDNA的合成 | 第61-62页 |
| 3.1.3 序列的特征分析 | 第62页 |
| 3.1.4 基因时空表达模式分析 | 第62-64页 |
| 3.1.4.1 荧光定量RT-PCR分析 | 第62页 |
| 3.1.4.2 植物组织原位杂交分析 | 第62-64页 |
| 3.1.5 十字花科同源基因的进化分析 | 第64-65页 |
| 3.1.5.1 同源基因的克隆及测序 | 第64-65页 |
| 3.1.5.2 序列差异分析和系统进化分析 | 第65页 |
| 3.2 结果 | 第65-71页 |
| 3.2.1 获得BcAGP23的cDNA全长和DNA全长 | 第65-66页 |
| 3.2.2 BcAGP23在花粉和绒毡层特异表达 | 第66-68页 |
| 3.2.2.1 花粉发育过程中表达 | 第66-68页 |
| 3.2.2.2 花粉粒中特异表达 | 第68页 |
| 3.2.3 BcAGP23十字花科同源序列进化分析 | 第68页 |
| 3.2.4 BcAGP23基因亚家族分析 | 第68-71页 |
| 3.3 讨论 | 第71-76页 |
| 3.3.1 BcAGP23是一个AG多肽编码基因 | 第71-74页 |
| 3.3.2 BcAGP23是花粉发育晚期特异表达基因 | 第74页 |
| 3.3.3 BcAGP23在芸薹属中的同源基因的进化与其物种分化一致 | 第74-76页 |
| 4 白菜花粉发育相关基因BcAGP23的功能验证 | 第76-90页 |
| 4.1 材料和方法 | 第76-82页 |
| 4.1.1 植物材料和主要试剂 | 第76-77页 |
| 4.1.2 RNA分离和cDNA的合成 | 第77页 |
| 4.1.3 p35S：：ami-BcAGP23表达载体的构建 | 第77-79页 |
| 4.1.3.1 ami-BcAGP23的设计与合成 | 第77页 |
| 4.1.3.2 重组表达载体的测序验证 | 第77-79页 |
| 4.1.3.3 重组表达载体转化农杆菌 | 第79页 |
| 4.1.4 重组表达载体对菜心的遗传转化 | 第79-81页 |
| 4.1.4.1 实验材料和菌种 | 第79页 |
| 4.1.4.2 菜心无菌苗的培养 | 第79-80页 |
| 4.1.4.3 菜心的遗传转化 | 第80-81页 |
| 4.1.5 转ami-BcAGP23植株的分子检测 | 第81页 |
| 4.1.5.1 基因组DNA和总RNA的提取 | 第81页 |
| 4.1.5.2 PCR检测 | 第81页 |
| 4.1.5.3 荧光定量PCR检测 | 第81页 |
| 4.1.6 植株形态和细胞学观察 | 第81-82页 |
| 4.1.6.1 花粉生活力的观察 | 第81页 |
| 4.1.6.2 花粉形态扫描电镜和花粉发育透射电镜观察 | 第81页 |
| 4.1.6.3 花粉体外萌发实验 | 第81-82页 |
| 4.2 结果 | 第82-87页 |
| 4.2.1 获得表达载体转化菜心植株 | 第82页 |
| 4.2.2 转ami-BcAGP23植株的分子检测 | 第82-84页 |
| 4.2.3 bcagp23的形态与细胞学观察 | 第84-87页 |
| 4.2.3.1 花药发育异常 | 第84-85页 |
| 4.2.3.2 花粉活力降低 | 第85-86页 |
| 2.2.3.3 bcagp23的花粉萌发异常 | 第86页 |
| 4.2.3.4 花粉畸形且内壁异常增厚 | 第86-87页 |
| 4.3 讨论 | 第87-90页 |
| 4.3.1 BcAGP23与花粉壁发育有关 | 第87页 |
| 4.3.2 BcAGP23与花粉管伸长有关 | 第87-90页 |
| 5 白菜花粉发育相关基因BcBGAL11的克隆和表达分析 | 第90-100页 |
| 5.1 材料与方法 | 第90-92页 |
| 5.1.1 植物材料与主要试剂 | 第90-91页 |
| 5.1.2 同源扩增基因DNA、cDNA全长和启动子序列 | 第91页 |
| 5.1.3 序列的特征分析 | 第91页 |
| 5.1.4 基因时空表达模式分析 | 第91-92页 |
| 5.1.4.1 荧光定量PCR分析 | 第91-92页 |
| 5.1.4.2 植物组织原位杂交分析 | 第92页 |
| 5.2 结果 | 第92-96页 |
| 5.2.1 分离获得该基因的cDNA和DNA全长及启动子片段 | 第92-95页 |
| 5.2.2 BcBGAL11在花粉和绒毡层特异表达 | 第95-96页 |
| 5.2.2.1 花粉发育中特异表达 | 第95-96页 |
| 5.2.2.2 花粉粒中表达 | 第96页 |
| 5.3 讨论 | 第96-100页 |
| 5.3.1 BcBGAL11是花粉发育晚期特异表达基因 | 第96-98页 |
| 5.3.2 可能通过参与信号转导途径而发挥作用 | 第98-100页 |
| 6 白菜β-半乳糖苷酶结构、进化和表达分析 | 第100-122页 |
| 6.1 材料与方法 | 第100-101页 |
| 6.1.1 植物材料与主要试剂 | 第100页 |
| 6.1.2 序列的特征分析 | 第100-101页 |
| 6.1.3 荧光定量PCR检测 | 第101页 |
| 6.2 结果 | 第101-115页 |
| 6.2.1 BcBGALs的DNA和cDNA序列特征分析 | 第101-104页 |
| 6.2.2 BcBGALs的启动子序列分析 | 第104-106页 |
| 6.2.3 BcBGALs的蛋白特征分析 | 第106-112页 |
| 6.2.3.1 跨膜区域分析 | 第106页 |
| 6.2.3.2 疏水性分析 | 第106页 |
| 6.2.3.3 保守功能域分析 | 第106-112页 |
| 6.2.4 BGAL的进化分析 | 第112页 |
| 6.2.5 BcBGALs的表达分析 | 第112-115页 |
| 6.2.5.1 在不同植物器官中的表达 | 第112-115页 |
| 6.2.5.2 在不同发育时期花蕾中的表达 | 第115页 |
| 6.2.5.3 在花器官中的表达 | 第115页 |
| 6.2.5.4 在授粉不同时间雌蕊中的表达 | 第115页 |
| 6.3 讨论 | 第115-122页 |
| 6.3.1 BGAL基因家族功能域进化保守 | 第115-120页 |
| 6.3.2 BGAL基因家族表达受多因素调控 | 第120-122页 |
| 结论 | 第122-124页 |
| 参考文献 | 第124-140页 |
| 在读期间发表的论文 | 第140页 |
