论文目录 | |
| 致谢 | 第1-8页 |
| 目录 | 第8-13页 |
| 缩略语表 | 第13-14页 |
| 摘要 | 第14-16页 |
| Abstract | 第16-18页 |
| 1 文献综述 | 第18-36页 |
| 1.1 大豆遗传转化的研究进展 | 第19-22页 |
| 1.1.1 大豆遗传转化的主要方法 | 第19-20页 |
| 1.1.2 影响农杆菌介导的大豆转化的主要因素 | 第20-22页 |
| 1.2 水分胁迫 | 第22-30页 |
| 1.2.1 植物耐盐机制 | 第22-26页 |
| 1.2.2 水通道蛋白的特征与功能 | 第26-28页 |
| 1.2.3 植物水通道蛋白与非生物胁迫相关的功能研究 | 第28-30页 |
| 1.3 大豆花叶病毒病 | 第30-34页 |
| 1.3.1 大豆花叶病毒病 | 第30-32页 |
| 1.3.2 植物防御系统 | 第32-33页 |
| 1.3.3 钾元素 | 第33-34页 |
| 1.4 目的和意义 | 第34-36页 |
| 2 材料和方法 | 第36-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第36页 |
| 2.1.1 大豆材料 | 第36页 |
| 2.1.2 实验菌株和基础载体 | 第36页 |
| 2.2 实验方法 | 第36-48页 |
| 2.2.1 大豆营养液培养条件 | 第36-37页 |
| 2.2.2 大豆土壤培养条件 | 第37页 |
| 2.2.3 大豆基因cDNA和氨基酸数据分析 | 第37页 |
| 2.2.4 多序列比对与及进化树分析 | 第37页 |
| 2.2.5 超表达载体的构建 | 第37-38页 |
| 2.2.6 农杆菌介导大豆子叶节转化 | 第38-41页 |
| 2.2.7 GFP融合蛋白载体的构建 | 第41页 |
| 2.2.8 亚细胞定位 | 第41页 |
| 2.2.9 爪蟾卵母细胞表达载体的构建 | 第41页 |
| 2.2.10 爪蟾卵母细胞表达实验 | 第41-42页 |
| 2.2.11 酵母表达载体的构建 | 第42页 |
| 2.2.12 酵母转化 | 第42页 |
| 2.2.13 酵母互补实验 | 第42页 |
| 2.2.14 GmAKT2基因启动子融合GUS载体的构建 | 第42-43页 |
| 2.2.15 切片制作 | 第43页 |
| 2.2.16 高盐法提取植物基因组DNA | 第43-44页 |
| 2.2.17 Southern杂交 | 第44-45页 |
| 2.2.18 RNA的提取和纯化 | 第45页 |
| 2.2.19 逆转录 | 第45页 |
| 2.2.20 半定量PCR和实时定量PCR | 第45页 |
| 2.2.21 盐处理 | 第45-46页 |
| 2.2.22 SMV接种 | 第46页 |
| 2.2.23 植物光合作用测定 | 第46页 |
| 2.2.24 植物导水率测定 | 第46页 |
| 2.2.25 气孔孔径和密度测定 | 第46-47页 |
| 2.2.26 植物元素的测定 | 第47页 |
| 2.2.27 植物可溶性糖的测定 | 第47页 |
| 2.2.28 大豆考种 | 第47-48页 |
| 3 以草丁膦为筛选剂的大豆转化体系的建立与优化 | 第48-60页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 结果与分析 | 第48-60页 |
| 3.2.1 大豆转化载体的构建 | 第48-50页 |
| 3.2.2 以草丁膦为筛选剂的大豆转基因体系的建立与优化 | 第50-55页 |
| 3.2.3 大豆转基因材料的鉴定 | 第55-60页 |
| 4 大豆GmPIP1；6基因的分析及功能研究 | 第60-80页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 结果与分析 | 第61-76页 |
| 4.2.1 大豆PIP基因注释及蛋白结构分析 | 第61-63页 |
| 4.2.2 GmPIP1;6亚细胞定位 | 第63-64页 |
| 4.2.3 GmPIP1;6蛋白在爪蟾卵母细胞中的表达分析 | 第64页 |
| 4.2.4 GmPIP1；6表达模式分析 | 第64页 |
| 4.2.5 NaCl处理条件GmPIP1；6的表达分析 | 第64-66页 |
| 4.2.6 GmPIP1；6超表达转基因大豆材料的发展和鉴定 | 第66页 |
| 4.2.7 盐胁迫条件下GmPIP1；6超表达大豆的表型分析 | 第66-68页 |
| 4.2.8 GmPIP1；6超表达大豆的光合指标分析 | 第68-70页 |
| 4.2.9 GmPIP1；6超表达材料的导水率分析 | 第70-71页 |
| 4.2.10 盐胁迫条件下GmPIP1；6超表达材料的Na+浓度分析 | 第71-73页 |
| 4.2.11 盐胁迫响应基因的表达分析 | 第73-74页 |
| 4.2.12 GmPIP1；6超表达材料的脯氨酸含量分析 | 第74-75页 |
| 4.2.13 GmPIP1；6超表达对大豆产量的影响 | 第75-76页 |
| 4.3 讨论 | 第76-80页 |
| 4.3.1 GmPIP1；6编码质膜水通道蛋白并调控大豆导水率 | 第76-77页 |
| 4.3.2 超表达GmPIP1；6增加大豆耐盐性 | 第77-78页 |
| 4.3.3 GmPIP1；6影响大豆光合作用和产量 | 第78-80页 |
| 5 大豆GmAKT2基因的分析及功能研究 | 第80-95页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 结果与分析 | 第80-92页 |
| 5.2.1 土壤中钾离子浓度对大豆SMV发病率的影响分析 | 第80-82页 |
| 5.2.2 土壤中钾离子浓度对大豆叶片钾离子浓度的影响 | 第82-83页 |
| 5.2.3 不同抗病品种大豆接种SMV后GmAKT2的表达分析 | 第83-84页 |
| 5.2.4 GmAKT2基因注释及蛋白结构分析 | 第84-85页 |
| 5.2.5 GmAKT2蛋白酵母互补实验 | 第85页 |
| 5.2.6 GmAKT2表达模式分析 | 第85-87页 |
| 5.2.7 缺钾处理条件GmAKT2的表达分析 | 第87页 |
| 5.2.8 GmAKT2超表达转基因大豆材料的发展和鉴定 | 第87-89页 |
| 5.2.9 GmAKT2超表达材料钾离子浓度分析 | 第89页 |
| 5.2.10 GmAKT2超表达材料的抗病表型和SMV基因表达分析 | 第89-92页 |
| 5.2.11 GmAKT2超表达材料叶片蔗糖浓度分析 | 第92页 |
| 5.3 讨论 | 第92-95页 |
| 5.3.1 GmAKT2编码钾离子通道蛋白并调控大豆K~+重新分配 | 第92-93页 |
| 5.3.2 超表达GmAKT2增加大豆对SMV抗病性 | 第93页 |
| 5.3.3 GmAKT2影响大豆体内的蔗糖合成与运输 | 第93-95页 |
| 6 结论与展望 | 第95-98页 |
| 6.1 结论 | 第95-96页 |
| 6.2 展望 | 第96-98页 |
| 参考文献 | 第98-110页 |
| 附件 | 第110-111页 |
| 攻读博士期间获得的研究成果 | 第111页 |
