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水稻应答铝毒害的根蛋白质组学研究及OsTCTP功能分析

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水稻应答铝毒害的根蛋白质组学研究及OsTCTP功能分析
论文目录
 
摘要第1-10页
Abstract第10-16页
第一章 文献综述第16-36页
1 植物定量蛋白质组学分析策略与方法第16-23页
  1.1 全长蛋白的定量分析方法第17-18页
    1.1.1 凝胶电泳定量分析法第17-18页
    1.1.2 质谱定量分析法第18页
  1.2 基于MS的非标记的定量分析方法第18页
  1.3 基于化学同位素标记的蛋白质组学定量分析方法第18-20页
    1.3.1 同位素标记的亲和标签(ICAT)和同位素标记的蛋白标签(ICPL)第19页
    1.3.2 TMT and iTRAQ第19-20页
    1.3.3 ~(18)0 标记第20页
    1.3.4 其它化学标签第20页
  1.4 代谢标记技术第20-22页
    1.4.1 细胞培养稳定同位素标记技术第21页
    1.4.2 同位素标记盐体内代谢标记技术第21-22页
  1.5 基于MS的对靶蛋白的绝对定量第22-23页
2 水稻蛋白质组学研究进展第23-32页
  2.1 水稻“Ⅰ期”蛋白质组学第24-30页
    2.1.1 水稻愈伤分化蛋白质组学第24页
    2.1.2 水稻叶蛋白质组学第24-25页
    2.1.3 水稻叶鞘蛋白质组学第25页
    2.1.4 水稻质膜(PM)蛋白质组学第25-26页
    2.1.5 水稻根蛋白质组学第26-28页
    2.1.6 水稻种子蛋白质组学第28-29页
    2.1.7 水稻细胞器蛋白质组学第29-30页
  2.2 水稻“Ⅱ期”蛋白质组学第30-32页
    2.2.1 互作蛋白质组学第30页
    2.2.2 分泌蛋白质组学第30-31页
    2.2.3 转录后修饰(PTMs)蛋白质组学第31-32页
3 植物铝毒害及其耐铝机制第32-33页
  3.1 植物铝毒害第32-33页
  3.2 植物耐铝毒机制第33页
4 水稻耐铝机制研究进展第33-34页
5 翻译调控瘤蛋白研究进展第34-35页
6 研究目的及意义第35-36页
第二章 水稻应答铝毒害的根蛋白质组学研究第36-67页
1 材料与方法第36-41页
  1.1 材料第36页
  1.2 水稻铝处理第36-37页
    1.2.1 水稻材料培养第36-37页
    1.2.2 氯化铝处理第37页
  1.3 根系相对伸长量测定第37页
  1.4 水稻根蛋白的提取和纯化第37页
  1.5 iTRAQ标记和质谱分析第37-39页
    1.5.1 蛋白样品的前处理第37页
    1.5.2 iTRAQ试剂标记酶解肽段第37-38页
    1.5.3 强阳离子交换色谱第38页
    1.5.4 On-line Nano-LC ESI QqTOF质谱分析第38-39页
  1.6 数据分析第39页
    1.6.1 质谱数据分析第39页
    1.6.2 蛋白质的分类第39页
  1.7 KOBAS分析铝响应的代谢途径第39-40页
  1.8 qPCR第40-41页
    1.8.1 水稻根总RNA的提取第40页
    1.8.2 cDNA第一链的合成第40页
    1.8.3 qPCR第40-41页
  1.9 蔗糖含量的测定第41页
2 结果与分析第41-57页
  2.1 两种水稻铝耐性分析第41-42页
  2.2 水稻受Al~(3+)迫前后根蛋白iTRAQ分析第42-44页
  2.3 iTRAQ定量信息的获取第44-53页
  2.4 受铝离子处理后差异表达的蛋白质第53页
  2.5 铝胁迫应答反应中显著上调的生化途径第53-54页
  2.6 iTRAQ数据的qPCR验证第54-57页
3 讨论第57-66页
  3.1 iTRAQ技术在定量蛋白质组研究中的优越性第57页
  3.2 水稻根铝响应的蛋白质第57-66页
    3.2.1 能量相关蛋白第57-61页
    3.2.2 胁迫和防御相关蛋白第61-62页
    3.2.3 蛋白动态平衡相关蛋白第62-63页
    3.2.4 代谢相关蛋白第63页
    3.2.5 信号转导和转运相关蛋白第63-64页
    3.2.6 细胞结构、转录、细胞生长和分裂相关的蛋白第64-66页
4 小结与展望第66-67页
  4.1 小结第66页
  4.2 展望第66-67页
第三章 水稻OsTCTP功能分析第67-96页
1 材料与方法第67-74页
  1.1 水稻材料第67页
  1.2 菌株第67页
  1.3 基因拷贝数分析第67-68页
    1.3.1 基因组DNA抽提第67页
    1.3.2 DNA的消化、电泳与转移第67-68页
    1.3.3 探针标记与标记效率检测第68页
    1.3.4 DNA杂交、洗膜与显影第68页
  1.4 载体构建第68-69页
    1.4.1 通用载体pCUN1301的构建第68页
    1.4.2 过量表达载体构建第68-69页
    1.4.3 RNAi载体的构建第69页
  1.5 亚细胞定位第69-70页
  1.6 抗体制备第70-72页
    1.6.1 原核表达载体构建第70-71页
    1.6.2 融合蛋白的诱导表达与纯化第71页
    1.6.3 多克隆抗体的制备和效价评定第71-72页
  1.7 水稻遗传转化与鉴定第72-73页
    1.7.1 水稻遗传转化第72页
    1.7.2 PCR鉴定和Southern blot第72页
    1.7.3 蛋白质提取和Western blot第72-73页
  1.8 水稻ostctp插入突变体的鉴定第73页
  1.9 逆境胁迫和激素处理第73页
  1.10 转基因植株耐汞性实验第73页
  1.11 H_2O_2含量测定和抗氧化酶活性分析第73-74页
  1.12 N-糖基化位点分析第74页
  1.13 OsTCTP系统进化分析和同源模建第74页
2 结果与分析第74-92页
  2.1 OsTCTP蛋白的诱导表达与抗体制备第74-75页
  2.2 OsTCTP存在可变剪接第75-77页
  2.3 只有OsTCTPa可被翻译第77-79页
  2.4 OsTCTP是典型的翻译调控瘤蛋白第79-82页
  2.5 OsTCTP具翻译水平调控第82-83页
  2.6 OsTCTP表达模式及亚细胞定位第83-85页
  2.7 OsTCTP受Hg、Cu、ABA和H202诱导表达第85-87页
  2.8 OsTCTP过表达和RNAi植株的表型分析第87-90页
  2.9 Hg胁迫下H202含量和抗氧化酶活性变化第90-92页
3 讨论第92-94页
  3.1 OsTCTP参与了水稻Hg耐性第92-93页
  3.2 OsTCTP不是N-糖蛋白第93-94页
4 小结与展望第94-96页
  4.1 小结第94-95页
  4.2 展望第95-96页
参考文献第96-117页
附录Ⅰ 在读期间发表或准备投稿的文章第117-118页
致谢第118页

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