论文目录 | |
| 摘要 | 第11-14页 |
| ABSTRACT | 第14-18页 |
| 缩略图 | 第18-20页 |
| 第一章 鱼类免疫研究进展 | 第20-46页 |
| 1. 鱼类的获得性免疫 | 第20-24页 |
| 1.1 鱼的免疫器官 | 第21-22页 |
| 1.2 免疫细胞 | 第22-24页 |
| 2. 先天免疫 | 第24-46页 |
| 2.1 先天免疫细胞 | 第24-25页 |
| 2.2 先天免疫机制与免疫因子 | 第25-46页 |
| 第二章 硬骨鱼凝集素结构和功能的多样性 | 第46-64页 |
| 1. 引言 | 第46页 |
| 2. 凝集素的功能与分类 | 第46-48页 |
| 3. 鱼类的凝集素组成成分与功能 | 第48-60页 |
| 3.1 C型凝集素 | 第48-53页 |
| 3.2 半乳糖结合凝集素 | 第53-55页 |
| 3.3 F型凝集素 | 第55-57页 |
| 3.4 鼠李糖结合凝集素 | 第57-59页 |
| 3.5 河豚凝集素 | 第59页 |
| 3.6 正五聚体蛋白 | 第59-60页 |
| 3.7 钙联接蛋白和钙网织蛋白 | 第60页 |
| 4. 本论文的研究对象、目的意义和技术路线 | 第60-64页 |
| 第三章 一种含双结构域的半乳糖结合凝集素(Tfgal-9)参与松江鲈对细菌的免疫 | 第64-102页 |
| 1. 前言 | 第64-66页 |
| 2. 材料和方法 | 第66-81页 |
| 2.1 菌株和载体 | 第66页 |
| 2.2 仪器和试剂 | 第66-67页 |
| 2.3 实验材料 | 第67页 |
| 2.4 总RNA的提取和SMART cDNA合成 | 第67-68页 |
| 2.5 松江鲈Tfgal-9基因扩增 | 第68-71页 |
| 2.6 序列分析 | 第71页 |
| 2.7 实时荧光定量PCR(Quantitative real time PCR,qRT-PCR) | 第71-72页 |
| 2.8 重组表达、蛋白纯化以及抗体制备 | 第72-79页 |
| 2.9 细菌结合实验 | 第79-80页 |
| 2.10 细菌凝集实验 | 第80页 |
| 2.11 抑菌活性检测 | 第80-81页 |
| 2.12 Tfgal-9体外抗氧化活性研究 | 第81页 |
| 3. 结果 | 第81-95页 |
| 3.1 基因克隆和序列分析结果 | 第81-82页 |
| 3.2 同源比对与进化树构建 | 第82-84页 |
| 3.3 Tfgal-9的空间结构 | 第84-87页 |
| 3.4 Tfgal-9的组织分布和表达模式 | 第87-88页 |
| 3.5 LPS和重金属刺激后Tfgal-9表达的变化 | 第88-90页 |
| 3.6 Tfgal-9重组表达及纯化 | 第90-91页 |
| 3.7 Tfgal-9的细菌结合活性 | 第91-93页 |
| 3.8 Tfgal-9的细菌凝集活性 | 第93页 |
| 3.9 抑菌活性检测 | 第93-94页 |
| 3.10 Tfgal-9体外抗氧化活性检测 | 第94-95页 |
| 4. 讨论 | 第95-102页 |
| 第四章 松江鲈补体的凝集素激活途径：TfCol-11及MASP的基因克隆与功能研究 | 第102-128页 |
| 1. 前言 | 第102-104页 |
| 2. 材料和方法 | 第104-107页 |
| 2.1 SMART cDNA合成(见第三章2.4) | 第104页 |
| 2.2 松江鲈TfCol-11和MASP基因3’,5’端克隆 | 第104-105页 |
| 2.3 序列分析 | 第105页 |
| 2.4 提取正常及LPS刺激不同时间松江鲈各组织的总RNA(见第三章2.4) | 第105页 |
| 2.5 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分析TfCol-11和MASP的组织分布以及LPS刺激后在血液,皮肤,肝脏,鳃表达模式的变化 | 第105页 |
| 2.6 TfCol-11和MASP重组表达、蛋白纯化及抗体制备 | 第105-106页 |
| 2.7 Western blot检测TfCol-11蛋白在正常松江鲈的组织分布 | 第106页 |
| 2.8 TfCol-11细菌结合实验 | 第106页 |
| 2.9 TfCol-11凝集实验 | 第106-107页 |
| 2.10 细菌感染实验(致死率的检测) | 第107页 |
| 2.11 Pull-down检测TfCol-11与MASP是否结合 | 第107页 |
| 3. 结果 | 第107-121页 |
| 3.1 TfCol-11和MASP基因克隆和序列分析结果 | 第107-108页 |
| 3.2 TfCol-11同源比对和进化树构建 | 第108页 |
| 3.3 TfCol-11 CDR的空间结构 | 第108-113页 |
| 3.4 TfCol-11和MASP基因mRNA的组织分布 | 第113-114页 |
| 3.5 LPS刺激后TfCol-11和MASP表达模式的变化 | 第114-116页 |
| 3.6 重组表达和纯化 | 第116-117页 |
| 3.7 TfCol-11蛋白在松江鲈的组织分布 | 第117页 |
| 3.8 细菌结合活性 | 第117-118页 |
| 3.9 TfCol-11的凝集活性 | 第118-120页 |
| 3.10 TfCol-11细菌感染实验 | 第120页 |
| 3.11 Pull down实验验证TfCol-11和MASP之间的结合 | 第120-121页 |
| 4. 讨论 | 第121-128页 |
| 第五章 松江鲈岩藻糖结合凝集素TfFBL的基因克隆与功能研究 | 第128-150页 |
| 1. 前言 | 第128-130页 |
| 2. 材料和方法 | 第130-132页 |
| 2.1 菌株和载体 | 第130页 |
| 2.2 仪器和试剂 | 第130页 |
| 2.3 实验材料 | 第130页 |
| 2.4 总RNA的提取和SMART cDNA的合成 | 第130-131页 |
| 2.5 序列分析 | 第131页 |
| 2.6 荧光实时定量PCR(qRT-PCR)分析TfFBL的组织分布和LPS刺激后在血液、皮肤、肝脏和心脏表达模式的变化 | 第131页 |
| 2.7 TfFBL重组表达、蛋白纯化及抗体制备 | 第131页 |
| 2.8 细菌结合实验 | 第131页 |
| 2.9 凝集实验 | 第131页 |
| 2.10 糖的抑制凝集作用实验 | 第131-132页 |
| 3. 结果 | 第132-144页 |
| 3.1 基因克隆和序列分析结果 | 第132页 |
| 3.2 TfFBL同源比对和进化树构建 | 第132-136页 |
| 3.3 TfFBL的空间结构 | 第136-138页 |
| 3.4 TfFBL表达模式分析 | 第138-141页 |
| 3.5 TfFBL基因的重组表达与蛋白纯化 | 第141-143页 |
| 3.6 TfFBL微生物结合实验 | 第143页 |
| 3.7 TfFBL细菌凝集实验 | 第143页 |
| 3.8 TfFBL的糖特异性 | 第143-144页 |
| 4. 讨论 | 第144-150页 |
| 论文总结 | 第150-152页 |
| 参考文献 | 第152-182页 |
| 致谢 | 第182-184页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第184-185页 |
| 附件 | 第185页 |
