论文目录 | |
| 致谢 | 第1-5页 |
| 中文摘要 | 第5-8页 |
| 前言 | 第8-10页 |
| 缩略语 | 第10-16页 |
| 第一部分 文献综述 | 第16-57页 |
| 第一章 苏云金芽胞杆菌毒蛋白的分子生物学研究进展 | 第17-38页 |
| 第1节 Bt杀虫晶体蛋白基因的分类 | 第17-21页 |
| 1．1 Hofte分类法 | 第18-19页 |
| 1．2 Crickmore分类法 | 第19-21页 |
| 第2节 Bt杀虫晶体蛋白的分子结构 | 第21-22页 |
| 2．1 结构域Ⅰ | 第22页 |
| 2．2 结构域Ⅱ | 第22页 |
| 2．3 结构域Ⅲ | 第22页 |
| 第3节 Bt杀虫晶体蛋白的分离与纯化 | 第22-23页 |
| 第4节 Bt杀虫晶体蛋白基因的表达与调控 | 第23-25页 |
| 4．1 转录水平的调控 | 第23-24页 |
| 4．2 转录后水平的调控 | 第24-25页 |
| 4．3 翻译后水平的调控 | 第25页 |
| 第5节 Bt杀虫晶体蛋白的分子毒性机制 | 第25-28页 |
| 5．1 晶体蛋白的溶解 | 第25页 |
| 5．2 晶体蛋白的酶解激活 | 第25-26页 |
| 5．3 活化Bt毒蛋白与昆虫中肠上肠上皮特异性受体的结合 | 第26页 |
| 5．4 昆虫中肠上皮细胞离子通道（孔）的形成 | 第26-28页 |
| 第6节 Bt毒蛋白的植物基因工程 | 第28-32页 |
| 6．1 几种常用的外源基因的转化方法 | 第28-29页 |
| 6．2 Bt植物基因工程发展过程 | 第29页 |
| 6．3 Bt转基因作物 | 第29-32页 |
| 参考文献 | 第32-38页 |
| 第二章 苏云金芽胞杆菌毒蛋白受体分子生物学研究进展 | 第38-49页 |
| 第1节 氨肽酶类受体 | 第38-42页 |
| 1．1 氨肽酶的分类、结构与功能 | 第38-39页 |
| 1．2 Cry1A氨肽酶类受体 | 第39-40页 |
| 1．3 氨肽酶序列的结构特征 | 第40-41页 |
| 1．4 氨肽酶和Bt毒蛋白结合的机制 | 第41-42页 |
| 第2节 类钙粘蛋白受体 | 第42-43页 |
| 2．1 类钙粘蛋白序列特征 | 第42页 |
| 2．2 类钙粘蛋白和Bt毒蛋白Cry1A相结合的特性及该受体的生酶功能 | 第42-43页 |
| 第3节 受体蛋白与昆虫的抗性机制 | 第43-44页 |
| 第4节 讨论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 第三章 杆状病毒表达系统 | 第49-57页 |
| 第1节 杆状病毒表达系统的基本原理 | 第49-52页 |
| 1．1 杆状病毒（NPV）的分子生物学特性 | 第49页 |
| 1．2 杆状病毒的重组原理 | 第49-52页 |
| 第2节 常用的杆状病毒载体及昆虫细胞 | 第52页 |
| 第3节 杆状病毒表达系统表达产物的修饰 | 第52-53页 |
| 3．1 表达蛋白信号肽的切除和成熟蛋白的分泌 | 第52-53页 |
| 3．2 表达蛋白的糖基化修饰 | 第53页 |
| 3．3 表达蛋白的磷酸化 | 第53页 |
| 3．4 表达蛋白的脂酰化 | 第53页 |
| 3．5 表达蛋白的剪切 | 第53页 |
| 第4节 杆状病毒表达系统的优点和缺点 | 第53-54页 |
| 4．1 主要优点 | 第53-54页 |
| 4．2 主要缺点 | 第54页 |
| 第5节 杆状病毒表达系统的主要应用 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-57页 |
| 第二部分 基本材料和方法 | 第57-67页 |
| 第1节 材料 | 第58页 |
| 1．1 供试昆虫 | 第58页 |
| 1．2 菌种与载体 | 第58页 |
| 1．3 工具酶 | 第58页 |
| 1．4 试剂盒 | 第58页 |
| 1．5 其它试剂 | 第58页 |
| 第2节 方法 | 第58-64页 |
| 2．1 二化螟中肠总RNA的抽提 | 第58-59页 |
| 2．2 琼脂糖凝胶电泳 | 第59页 |
| 2．3 PCR扩增产物中目的片段的分离回收（Glassmilk法） | 第59页 |
| 2．4 连接反应 | 第59页 |
| 2．5 感受态细胞的制备 | 第59-60页 |
| 2．6 连结产物转化感受态细胞及阳性克隆筛选 | 第60页 |
| 2．7 质粒DNA的小量制备 | 第60页 |
| 2．8 碱法大量制备质粒DNA | 第60-61页 |
| 2．9 重组质粒的筛选 | 第61页 |
| 2．10 昆虫细胞培养 | 第61页 |
| 2．11 重组杆状病毒的获得 | 第61页 |
| 2．12 Lipofectin共转染 | 第61-62页 |
| 2．13 用于PCR鉴定的重组杆状病毒模板的制备 | 第62页 |
| 2．14 SDS-PAGE电泳 | 第62-64页 |
| 2．15 Cry1Ab杀虫毒性活性分析 | 第64页 |
| 第3节 常用的分子生物学试剂配方 | 第64-66页 |
| 3．1 细菌培养基 | 第64页 |
| 3．2 质粒DNA抽提液 | 第64页 |
| 3．3 琼脂糖凝胶电泳缓冲液 | 第64页 |
| 3．4 常用缓冲液 | 第64-65页 |
| 3．5 抗生素贮液 | 第65页 |
| 3．6 Western blot试剂 | 第65页 |
| 3．7 其它试剂 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-67页 |
| 第三部分 试验研究与结果分析 | 第67-125页 |
| 第四章 高效液相离子色谱法从转基因水稻中分离、纯化Bt毒蛋白Cry1Ab的研究 | 第68-78页 |
| 第1节 引言 | 第68页 |
| 第2节 材料与方法 | 第68-71页 |
| 2．1 材料 | 第68-69页 |
| 2．2 仪器 | 第69页 |
| 2．3 方法 | 第69-71页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第71-77页 |
| 3．1 pH值对色谱分离度的影响 | 第73-74页 |
| 3．2 温度对色谱分离度的影响 | 第74-76页 |
| 3．3 缓冲溶液浓度对色谱分离度的影响 | 第76页 |
| 3．4 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-78页 |
| 第五章 Bt毒蛋白Cry1Ab溶液构象的研究 | 第78-87页 |
| 第1节 引言 | 第78页 |
| 第2节 材料与方法 | 第78-80页 |
| 2．1 仪器与试剂 | 第78-79页 |
| 2．2 实验方法 | 第79-80页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第80-85页 |
| 3．1 Bt毒蛋白Cry1Ab的荧光光谱 | 第80页 |
| 3．2 溶液pH值对Bt毒蛋白Cry1Ab荧光光谱的影响 | 第80页 |
| 3．3 荧光猝灭 | 第80-82页 |
| 3．4 有关溶剂对Bt毒蛋白Cry1Ab荧光光谱的影响 | 第82-84页 |
| 3．5 温度对Bt毒蛋白Cry1Ab荧光光谱的影响 | 第84-85页 |
| 参考文献 | 第85-87页 |
| 第六章 二化螟中肠Cry1Ab受体蛋白的鉴定、受体基因的克隆及其核苷酸序列特征 | 第87-105页 |
| 第1节 引言 | 第87页 |
| 第2节 材料与方法 | 第87-98页 |
| 2．1 材料 | 第87-88页 |
| 2．2 二化螟中肠Bt毒蛋白Cry1Ab受体蛋白存在的确证 | 第88-90页 |
| 2．3 二化螟中肠Bt毒蛋白Cry1Ab受体基因的克隆 | 第90-98页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第98-104页 |
| 3．1 ~（125）I-Cry1Ab蛋白放射性探针检测结果 | 第98页 |
| 3．2 Bt-R3受体基因克隆和测序策略 | 第98-100页 |
| 3．3 Bt-R3核苷酸序列的特征 | 第100-103页 |
| 3．4 结论 | 第103-104页 |
| 参考文献 | 第104-105页 |
| 第七章 Bt受体基因（Bt-R3）在杆状病毒—昆虫系统中的表达 | 第105-112页 |
| 第1节 引言 | 第105页 |
| 第2节 材料与方法 | 第105-107页 |
| 2．1 材料 | 第105-106页 |
| 2．2 方法 | 第106-107页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第107-111页 |
| 3．1 重组杆状病毒供体质粒的构建 | 第107-108页 |
| 3．2 重组病毒的获得 | 第108页 |
| 3．3 Lipofectin共转染 | 第108页 |
| 3．4 细胞中重组病毒粒子的PCR检测 | 第108页 |
| 3．5 Western blot | 第108页 |
| 3．6 讨论 | 第108-110页 |
| 3．7 结论 | 第110-111页 |
| 参考文献 | 第111-112页 |
| 第八章 二化螟中肠Bt受体基因（Bt-R3）蛋白序列的生物信息学分析 | 第112-125页 |
| 第1节 引言 | 第112页 |
| 第2节 材料与方法 | 第112-113页 |
| 2．1 数据来源 | 第112-113页 |
| 2．2 计算机生物信息学软件的分析方法 | 第113页 |
| 第3节 结果与讨论 | 第113-123页 |
| 3．1 Bt-R3受体蛋白序列的特性 | 第113-116页 |
| 3．2 Bt-R3受体蛋白的分子进化 | 第116-119页 |
| 3．3 Bt受体氨基酸序列的多重联配 | 第119-123页 |
| 3．4 结论 | 第123页 |
| 参考文献 | 第123-125页 |
| 第四部分 总结 | 第125-128页 |
| 1 论文研究的主要结论 | 第125-126页 |
| 2 研究的主要创新点 | 第126-127页 |
| 3 研究展望 | 第127-128页 |
| 英文摘要 | 第128-131页 |
| 附录 | 第131-136页 |
| A 攻读博士学位期间发表的论文情况 | 第131-132页 |
| B GenBank Accessory number AY 118272 | 第132-136页 |
| C 氨基酸符号 | 第136页 |
