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米曲霉脂肪酶的分离纯化、基因克隆、表达及其在维生素A合成中的应用研究

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米曲霉脂肪酶的分离纯化、基因克隆、表达及其在维生素A合成中的应用研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
缩略词表第14-15页
第一章 绪论第15-31页
  1.1 脂肪酶第15-19页
    1.1.1 脂肪酶的简介第15-17页
    1.1.2 脂肪酶的结构特征第17-18页
    1.1.3 脂肪酶非水介质体系的催化特性第18-19页
  1.2 米曲霉及其脂肪酶第19-22页
    1.2.1 米曲霉的简介第19-20页
    1.2.2 米曲霉脂肪酶的研究进展第20-22页
  1.3 脂肪酶在维生素类药物合成中的应用第22-26页
    1.3.1 脂肪酶催化立体选择性反应第22-24页
    1.3.2 脂肪酶催化区域选择性反应第24-25页
    1.3.3 脂肪酶催化合成维生素酯类衍生物第25-26页
  1.4 维生素A及其化学合成的研究第26-29页
    1.4.1 维生素A的简介第26-27页
    1.4.2 维生素A的化学合成工艺第27-29页
  1.5 立题依据、研究意义及主要研究内容第29-31页
    1.5.1 立题依据及研究意义第29-30页
    1.5.2 主要研究内容第30-31页
第二章 脂肪酶转酯化活性筛选模型的建立及微生物的筛选第31-47页
  2.1 引言第31-32页
  2.2 实验材料第32-33页
    2.2.1 脂肪酶第32页
    2.2.2 试剂与材料第32页
    2.2.3 主要仪器第32-33页
  2.3 实验方法第33-36页
    2.3.1 试剂的配制第33页
    2.3.2 脂肪酶转酯化反应体系第33页
    2.3.3 酚试剂检测方法第33-34页
    2.3.4 脂肪酶转酯化转化率与酶活力的计算方法第34-35页
    2.3.5 气相色谱检测方法第35页
    2.3.6 微生物的培养方法第35页
    2.3.7 菌株WZ007的微生物鉴定方法第35-36页
  2.4 结果与讨论第36-45页
    2.4.1 酚试剂法最适检测波长的确定第36-37页
    2.4.2 酚试剂法衍生化最适时间的确定第37-38页
    2.4.3 酚试剂法衍生化最适温度的确定第38-39页
    2.4.4 酚试剂法标准曲线的建立第39-40页
    2.4.5 利用气相色谱法的验证实验第40-41页
    2.4.6 脂肪酶转酯化活性微生物的筛选第41-42页
    2.4.7 菌株WZ007的微生物鉴定第42-45页
  2.5 本章小结第45-47页
第三章 米曲霉WZ007脂肪酶的分离纯化与酶学性质研究第47-68页
  3.1 引言第47页
  3.2 实验材料第47-49页
    3.2.1 菌株第47-48页
    3.2.2 微生物培养基第48页
    3.2.3 缓冲液第48页
    3.2.4 试剂与材料第48页
    3.2.5 主要仪器第48-49页
  3.3 实验方法第49-55页
    3.3.1 米曲霉WZ007的培养第49页
    3.3.2 米曲霉WZ007脂肪酶的分离与纯化第49-51页
    3.3.3 蛋白质浓度测定第51-52页
    3.3.4 酶活测定方法第52页
    3.3.5 SDS-PAGE分析第52-53页
    3.3.6 米曲霉WZ007脂肪酶的酶学性质研究第53-54页
    3.3.7 脂肪酶的MALDI-TOF-MS分析第54-55页
  3.4 实验结果与讨论第55-67页
    3.4.1 米曲霉WZ007脂肪酶的分离与纯化第55-58页
    3.4.2 脂肪酶纯度鉴定及分子量测定第58页
    3.4.3 米曲霉脂肪酶的酶学性质研究第58-65页
    3.4.4 脂肪酶的质谱分析第65-67页
  3.5 本章小结第67-68页
第四章 米曲霉脂肪酶的基因克隆、表达与结构分析第68-79页
  4.1 引言第68页
  4.2 实验材料第68-70页
    4.2.1 菌种、质粒及引物第68页
    4.2.2 试剂与材料第68-69页
    4.2.3 微生物培养基第69页
    4.2.4 主要仪器第69-70页
  4.3 实验方法第70-72页
    4.3.1 米曲霉WZ007的培养第70页
    4.3.2 米曲霉WZ007 cDNA的制备第70页
    4.3.3 aol基因PCR引物设计第70页
    4.3.4 aol基因PCR扩增第70页
    4.3.5 重组表达载体pEASY-E1-aol的构建及鉴定第70-71页
    4.3.6 重组菌的构建与表达第71页
    4.3.7 重组菌脂肪酶的分离与纯化第71页
    4.3.8 重组菌脂肪酶的活力测定第71-72页
    4.3.9 米曲霉脂肪酶AOL的序列分析及同源建模第72页
  4.4 结果与讨论第72-78页
    4.4.1 脂肪酶基因aol的克隆第72-74页
    4.4.2 米曲霉脂肪酶AOL的结构分析第74-76页
    4.4.3 米曲霉脂肪酶AOL的E. coli异源表达与纯化第76-78页
  4.5 本章小结第78-79页
第五章 米曲霉WZ007细胞催化合成维生素A中间体的研究第79-98页
  5.1 引言第79-80页
  5.2 实验材料第80-81页
    5.2.1 菌株第80页
    5.2.2 培养基第80页
    5.2.3 试剂与材料第80页
    5.2.4 主要仪器第80-81页
  5.3 实验方法第81-83页
    5.3.1 米曲霉WZ007的培养第81页
    5.3.2 米曲霉冻干细胞的制备第81页
    5.3.3 酶催化维生素A中间体二醇单乙酰化的反应条件第81-82页
    5.3.4 酶催化底物和产物的液相检测方法第82页
    5.3.5 酶催化反应转化率和区域选择性的计算方法第82页
    5.3.6 酶催化产物的气相质谱和核磁检测第82-83页
  5.4 实验结果与讨论第83-97页
    5.4.1 液相色谱检测标准曲线的建立第83-84页
    5.4.2 脂肪酶的筛选第84-85页
    5.4.3 脂肪酶催化区域选择性乙酰化的条件研究第85-94页
    5.4.4 米曲霉脂肪酶细胞的操作稳定性第94-95页
    5.4.5 酶催化反应的时间曲线第95-96页
    5.4.6 酶催化产物的结构鉴定第96-97页
  5.5 本章小结第97-98页
第六章 结论与展望第98-101页
  6.1 结论第98-100页
  6.2 创新点第100页
  6.3 展望第100-101页
参考文献第101-117页
附录第117-120页
攻读博士期间发表论文与申请专利第120-122页
致谢第122页

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