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假单胞菌D-2-羟基戊二酸代谢机制暨生物催化生产2-酮基丁酸

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假单胞菌D-2-羟基戊二酸代谢机制暨生物催化生产2-酮基丁酸
论文目录
 
摘要第11-14页
ABSTRACT第14-20页
缩略词第20-21页
第一章 绪论第21-49页
1 D-2-羟基戊二酸代谢第21-37页
  1.1 引言第21-22页
  1.2 D-2-HG分解代谢第22-31页
    1.2.1 D-2-HG分解代谢生理意义第22-25页
    1.2.2 D-2-HG分解代谢产物形式第25-26页
    1.2.3 D-2-HG分解代谢关键酶D2HGDH的性质及在生物体中的分布第26-27页
    1.2.4 D2HGDH进化起源及结构特征第27-29页
    1.2.5 电子传递黄素蛋白(ETF)对D-2-HG分解代谢的影响第29-31页
  1.3 D-2-HG合成代谢第31-36页
    1.3.1 非专一性D-2-HG产生酶类及机制第31-33页
    1.3.2 专一性D-2-HG产生酶第33-34页
    1.3.3 D-2-HG产生反应参与的重要代谢途径第34-36页
  1.4 D-2-HG代谢校正机制第36-37页
2 生物催化法生产2-酮基丁酸第37-39页
  2.1 2-酮基丁酸的用途第37-38页
  2.2 2-酮基丁酸生产方法第38-39页
  2.3 D-2-羟基丁酸生产方法第39页
3 论文主要研究内容第39-40页
参考文献第40-49页
第二章 Pseudomonas stutzeri A1501中D2HGDH的外源表达及酶学性质研究第49-69页
1 引言第49页
2 材料与方法第49-55页
  2.1 实验材料第49-52页
  2.2 实验方法第52-55页
3 结果与讨论第55-65页
  3.1 微生物中D2HGDH的生物信息学分析第55-58页
  3.2 P.stutzeri A1501中D2HGDH的鉴定第58-61页
    3.2.1 P. stutzeri A1501中假定D2HGDH的外源表达第58-59页
    3.2.2 P. stutzeri A1501中假定D2HGDH的分离纯化第59-60页
    3.2.3 P. stutzeri A1501中假定D2HGDH的生物学活性分析第60-61页
  3.3 P.stutzeri A1501中D2HGDH酶学性质第61-65页
    3.3.1 P. stutzeri A1501中D2HGDH亚基构成分析第61-62页
    3.3.2 P.stutzeri A1501中D2HGDH的辅因子分析第62-63页
    3.3.3 P. stutzeri A1501中D2HGDH的动力学参数测定第63-64页
    3.3.4 pH、温度、金属离子对D2HGDH酶活力的影响第64-65页
4 本章小结第65-66页
参考文献第66-69页
第三章 D2HGDH在P. stutzeri A1501 D-2-HG分解代谢中的功能研究第69-95页
1 引言第69页
2 材料与方法第69-76页
  2.1 实验材料第69-73页
  2.2 实验方法第73-76页
  2.3 检测方法第76页
3 绪果与讨论第76-91页
  3.1 P. stutzeri A1501中D-2-HG代谢特性初步研究第76-80页
    3.1.1 D2HGDH表达特性分析第76-77页
    3.1.2 P. stutzeri A1501胞内D-2-HG浓度测定方法建立第77-79页
    3.1.3 生理状态下P. stutzeri A1501胞内D-2-HG浓度测定第79-80页
  3.2 P.stutzeri A1501中d2hgdh的基因敲除与回补第80-84页
    3.2.1 P.stutzeri A1501中D2HGDH编码基因d2hgdh的敲除第80-83页
    3.2.2 P. stutzeri A1501中d2hgdh的基因回补第83-84页
  3.3 P. struzeri A1501中D2HGDH的体内功能验证第84-91页
    3.3.1 D2HGDH在P. stutzeri A1501同化利用D-2-HG中其关键作用第84-85页
    3.3.2 D2HGDH维持胞内D-2-HG浓度处于恒定水平第85-86页
    3.3.3 D2HGDH缺失影响P. stutzeri A1501生长表型第86-87页
    3.3.4 D2HGDH缺失影响P. stutzeri A1501可利用碳源量第87-91页
    3.3.5 D2HGDH在P. stutzeri A1501代谢过程中功能推测第91页
4 本章小结第91-92页
参考文献第92-95页
第四章 电子传递蛋白ETF在D-2-HG分解代谢中的作用分析第95-119页
1 引言第95页
2 材料与方法第95-101页
  2.1 实验材料第95-98页
  2.2 实验方法第98-100页
  2.3 检测方法第100-101页
3 结果与讨论第101-116页
  3.1 ETF体外介导D2HGDH的电子传递第101-107页
    3.1.1 P. stutzeri A1501中ETF的外源表达与分离纯化第101-102页
    3.1.2 ETF促进D2HGDH和人工电子受体间的电子传递第102-104页
    3.1.3 D2HGDH以ETF为底物时动力学参数的测定第104-105页
    3.1.4 ETF对D2HGDH以D-2-HG为底物时动力学参数的影响第105-107页
  3.2 体内实验鉴定ETF在D-2-HG分解代谢中的作用第107-116页
    3.2.1 P. stutzeri A1501中etf基因的敲除第107-110页
    3.2.2 P. stutzeri A1501中etf基因的回补第110-111页
    3.2.3 ETF参与P. stutzeri A1501同化利用D-2-HG第111-112页
    3.2.4 ETF维持胞内D-2-HG浓度处于恒定水平第112-114页
    3.2.5 ETF缺失影响P. stutzeri A1501可利用碳源量第114-115页
    3.2.6 ETF在P. stutzeriA1501代谢D-2-HG过程中功能推测第115-116页
4 本章小结第116页
参考文献第116-119页
第五章 D-2-HG合成代谢机制及D-2-HG代谢模块的生理意义第119-155页
1 引言第119-120页
2 材料与方法第120-124页
  2.1 实验材料第120-122页
  2.2 实验方法第122-123页
  2.3 检测方法第123-124页
3 结果与讨论第124-149页
  3.1 D-2-HG合成代谢机制第124-133页
    3.1.1 比较基因组学确定SerA和D2HGDH的功能相关性第124-126页
    3.1.2 P. stutzeri A1501中SerA的外源表达与分离纯化第126-128页
    3.1.3 体外实验确定SerA催化2-KG生成D-2-HG第128-129页
    3.1.4 d2hgdh和serA双基因敲除菌株构建第129-133页
    3.1.5 体内实验确定SerA为D-2-HG合成关键酶第133页
  3.2 D-2-HG合成的生理意义研究第133-139页
    3.2.1 SerA催化的D-2-HG合成和D-3-PG氧化反应速率分析第134页
    3.2.2 D-2-HG合成促进D-3-PG氧化反应第134-135页
    3.2.3 D-2-HG的合成可再生SerA紧密结合的NADH第135-137页
    3.2.4 SerA催化的D-2-HG合成和D-3-PG氧化反应自由能分析第137-139页
  3.3 D-2-HG代谢模块及其生理意义研究第139-149页
    3.3.1 D-2-HG对SerA催化反应的抑制效应第139-141页
    3.3.2 SerA参与的丝氨酸合成途径自由能及代谢流量分析第141-145页
    3.3.3 D-2-HG代谢模块及生理意义分析第145-149页
4 本章小结第149页
参考文献第149-155页
第六章 以L-苏氨酸为底物生物催化法生产2-酮基丁酸第155-175页
1 引言第155页
2 材料与方法第155-159页
  2.1 实验材料第155-157页
  2.2 实验方法第157-159页
3 结果与讨论第159-171页
  3.1 生物催化剂选择第159-160页
  3.2 P. stutzeri SDM的2-OBA生产能力验证第160-161页
  3.3 P. stutzeri SDM催化2-OBA生产pH和温度优化第161页
  3.4 催化体系中催化剂浓度和底物浓度优化第161-164页
  3.5 在优化条件下催化生产2-OBA第164-167页
  3.6 反应机理研究第167-171页
4 本章小结第171-172页
参考文献第172-175页
第七章 以1,2-丁二醇为底物生产D-2-羟基丁酸和2-酮基丁酸第175-193页
1 引言第175-176页
2 材料与方法第176-178页
  2.1 实验材料第176页
  2.2 实验方法第176-178页
3 结果与讨论第178-189页
  3.1 G. oxydans DSM 2003的D-2-HBA生产能力鉴定第178-180页
  3.2 催化反应条件的初步确定第180-182页
  3.3 抑制D-2-HBA分解方法探索第182-186页
  3.4 生物催化1,2-丁二醇生成D-2-HBA第186-188页
  3.5 以1,2-BDO为底物生产2-OBA可行性研究第188-189页
4 本章小结第189-190页
参考文献第190-193页
结束语第193-195页
附录第195-203页
致谢第203-205页
论文发表与专利申请第205-206页

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