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基于免疫磁分离和核酸适配子技术快速检测食源性致病菌的研究

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基于免疫磁分离和核酸适配子技术快速检测食源性致病菌的研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-7页
缩略语索引第7-14页
第一章 前言第14-22页
  1.1 食源性致病菌第14页
    1.1.1 食品安全与食源性致病菌第14页
    1.1.2 食源性致病菌的危害第14页
  1.2 食源性致病菌的检测方法第14-17页
    1.2.1 传统检测方法第14-15页
    1.2.2 免疫学检测方法第15页
    1.2.3 分子生物学检测方法第15-17页
    1.2.4 传感器检测方法第17页
  1.3 核酸适配子研究概况第17-20页
    1.3.1 核酸适配子第17-18页
    1.3.2 核酸适配体的特点第18页
    1.3.3 核酸适配子与抗体性能的比较第18页
    1.3.4 核酸适配子的筛选技术第18-19页
    1.3.5 核酸适配子在食源性致病菌检测中的应用第19-20页
  1.4 研究内容第20-21页
  1.5 研究目的与意义第21-22页
第二章 大肠杆菌O157:H7活菌的IMS-PMA-IAC-PCR检测体系的建立第22-34页
  2.1 前言第22-23页
  2.2 材料与仪器第23-26页
    2.2.1 实验菌株第23-25页
    2.2.2 主要试剂和仪器设备第25页
    2.2.3 实验相关试剂和培养基的配制第25-26页
  2.3 实验方法第26-29页
    2.3.1 细菌的培养和计数第26页
    2.3.2 细菌DNA的提取第26页
    2.3.3 免疫磁分离捕获效率的测定第26页
    2.3.4 PMA对细菌的处理第26页
    2.3.5 PCR反应第26-27页
    2.3.6 PCR产物的验证第27页
    2.3.7 PMA抑制死菌DNA的PCR扩增能力的评价第27-28页
    2.3.8 纯培养物中PCR方法检测限的确定第28页
    2.3.9 引物特异性的验证第28页
    2.3.10 纯培养物中IMS-PMA-IAC-PCR方法检测限的确定第28页
    2.3.11 人工污染牛奶中IMS-PMA-IAC-PCR方法检测限的确定第28-29页
  2.4 实验结果第29-32页
    2.4.1 PCR反应条件的优化第29-30页
    2.4.2 免疫磁分离对大肠杆菌O157:H7捕获效率的确定第30页
    2.4.3 PMA抑制死菌DNA扩增能力的确定第30-31页
    2.4.4 引物特异性的验证第31页
    2.4.5 纯培养物中IMS-PMA-IAC-PCR方法的灵敏度第31-32页
    2.4.6 人工污染牛奶中IMS-PMA-IAC-PCR方法的灵敏度第32页
  2.5 讨论与分析第32-34页
第三章 大肠杆菌O157:H7活菌的IMS-SD-PMA-qPCR检测体系的建立第34-45页
  3.1 前言第34-35页
  3.2 材料与仪器第35-37页
    3.2.1 实验菌株第35-36页
    3.2.2 主要试剂和仪器设备第36-37页
    3.2.3 实验相关试剂和培养基的配制第37页
  3.3 实验方法第37-40页
    3.3.1 细菌的培养和计数第37页
    3.3.2 细菌DNA的提取第37页
    3.3.3 PMA对细菌的处理第37页
    3.3.4 引物特异性的验证第37-38页
    3.3.5 SD的浓度和时间的优化第38页
    3.3.6 方法学的比较第38-39页
    3.3.7 人工污染牛奶的检测第39-40页
    3.3.8 人工污染牛奶样品中方法特异性验证第40页
  3.4 实验结果第40-44页
    3.4.1 引物特异性的验证第40页
    3.4.2 SD浓度和时间的确定第40-41页
    3.4.3 qPCR标准曲线的建立第41-42页
    3.4.4 qPCR、PMA-qPCR、SD-PMA-qPCR和传统平板计数法比较第42-43页
    3.4.5 人工污染牛奶中大肠杆菌O157:H7活菌的检测第43-44页
  3.5 讨论与分析第44-45页
第四章 沙门氏菌、志贺氏菌和金黄色葡萄球菌活菌的SD-PMA-IAC-mPCR检测体系的建立第45-55页
  4.1 前言第45-46页
  4.2 材料与方法第46-47页
    4.2.1 实验菌株第46-47页
    4.2.2 主要试剂和仪器设备第47页
    4.2.3 实验相关试剂和培养基的配制第47页
  4.3 实验方法第47-50页
    4.3.1 细菌的培养和计数第47页
    4.3.2 细菌DNA的提取第47页
    4.3.3 SD和PMA处理第47页
    4.3.4 mPCR反应体系的优化第47-48页
    4.3.5 mPCR反应条件第48-49页
    4.3.6 引物特异性的验证第49页
    4.3.7 SD和PMA联用对细菌PCR扩增的影响第49页
    4.3.8 纯培养物中检测限的确定第49页
    4.3.9 人工污染食品中鼠伤寒沙门氏菌、宋内氏志贺氏菌和金黄色葡萄球菌活菌的检测第49-50页
  4.4 实验结果第50-54页
    4.4.1 mPCR退火温度和引物浓度的确定第50-51页
    4.4.2 引物特异性的确定第51页
    4.4.3 SD和PMA抑制死菌或者受伤细菌PCR扩增第51-52页
    4.4.4 纯培养物中SD-PMA-IAC-mPCR方法灵敏度第52-53页
    4.4.5 人工污染食品中检测限的确定第53-54页
  4.5 分析与讨论第54-55页
第五章 基于QCM传感器筛选鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子方法的建立第55-74页
  5.1 前言第55-56页
  5.2 材料与仪器第56-57页
    5.2.1 实验菌株第56页
    5.2.2 主要试剂和仪器设备第56页
    5.2.3 试剂和培养基的配制第56页
    5.2.4 随机ssDNA文库和相关引物的合成第56-57页
  5.3 实验方法第57-64页
    5.3.1 菌株生长曲线的制备第57页
    5.3.2 菌株的处理第57页
    5.3.3 鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子的筛选第57-58页
    5.3.4 PCR扩增第58-59页
    5.3.5 PCR产物的纯化第59页
    5.3.6 ssDNA的制备第59页
    5.3.7 克隆和测序第59-61页
    5.3.8 候选核酸适配子亲和力的测定第61-62页
    5.3.9 K_d和特异性的测定第62-63页
    5.3.10 基于核酸适配子的QCM方法检测鼠伤寒沙门氏菌第63-64页
  5.4 实验结果第64-72页
    5.4.1 鼠伤寒沙门氏菌生长曲线的测定第64页
    5.4.2 鼠伤寒沙门氏菌核酸适配子的筛选过程第64-67页
    5.4.3 鼠伤寒沙门氏菌适配子克隆子的PCR鉴定结果第67页
    5.4.4 核酸适配子测序结果及分析第67-70页
    5.4.5 亲和力的比较第70页
    5.4.6 核酸适配子K_d第70-71页
    5.4.7 特异性第71页
    5.4.8 基于核酸适配子QCM方法检测鼠伤寒沙门氏菌第71-72页
  5.5 讨论与分析第72-74页
第六章 基于免疫磁分离和核酸适配子PCR技术检测鼠伤寒沙门氏菌方法的建立第74-83页
  6.1 前言第74-75页
  6.2 材料与仪器第75页
    6.2.1 实验菌株第75页
    6.2.2 主要试剂和仪器设备第75页
    6.2.3 主要溶液和培养基的配制第75页
    6.2.4 核酸适配子和相关序列的合成第75页
  6.3 实验方法第75-78页
    6.3.1 细菌的培养和计数第75-76页
    6.3.2 磁珠用量对磁珠捕获效率的影响第76页
    6.3.3 抗体用量对磁珠捕获效率的影响第76页
    6.3.4 免疫磁分离和核酸适配子PCR技术检测鼠伤寒沙门氏菌方法的建立第76-77页
    6.3.5 洗脱液pH值的优化第77页
    6.3.6 灵敏度的确定第77页
    6.3.7 特异性的确定第77-78页
    6.3.8 火鸡馅中鼠伤寒沙门氏菌的检测第78页
  6.4 实验结果第78-81页
    6.4.1 免疫磁分离中磁珠量和抗体量的确定第78-79页
    6.4.2 洗脱液pH值的确定第79页
    6.4.3 方法检测限第79-80页
    6.4.4 方法特异性第80-81页
    6.4.5 人工污染火鸡馅中方法检测限的确定第81页
  6.5 分析与讨论第81-83页
第七章 结论与展望第83-85页
  7.1 结论第83-84页
  7.2 展望第84-85页
致谢第85-86页
附录A 试剂第86-88页
附录B 实验仪器设备第88-89页
参考文献第89-96页
个人介绍第96页
攻读学位期间研究成果第96-97页

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