论文目录 | |
| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-8页 |
| Abstract | 第8-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| 1.1 引言 | 第14-15页 |
| 1.2 SAM的理化性质 | 第15-16页 |
| 1.2.1 SAM的结构分析 | 第15页 |
| 1.2.2 SAM的稳定性 | 第15-16页 |
| 1.2.3 SAM盐的稳定性 | 第16页 |
| 1.3 SAM的生理功能 | 第16-18页 |
| 1.3.1 转甲基作用 | 第16-17页 |
| 1.3.2 转硫作用 | 第17-18页 |
| 1.3.3 转氨丙基作用 | 第18页 |
| 1.3.4 核糖开关作用 | 第18页 |
| 1.4 SAM的应用领域和市场前景 | 第18-19页 |
| 1.4.1 SAM的应用领域 | 第18-19页 |
| 1.4.2 SAM的市场前景 | 第19页 |
| 1.5 SAM生产的研究进展 | 第19-27页 |
| 1.5.1 高产SAM菌株的理性化筛选育种 | 第20-23页 |
| 1.5.2 微生物发酵过程优化提高SAM产率的研究 | 第23-24页 |
| 1.5.3 代谢工程改造菌种提高SAM发酵产率的研究 | 第24-26页 |
| 1.5.4 SAM研究与生产的前景和展望 | 第26-27页 |
| 1.6 酿酒酵母中标记回收的基因敲除技术 | 第27-31页 |
| 1.6.1 酿酒酵母中基因敲除技术 | 第27-29页 |
| 1.6.2 标记回收的基因敲除技术 | 第29-31页 |
| 1.7 本工作研究的基本思路及拟研究内容 | 第31-32页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第32-42页 |
| 2.1 菌株与质粒 | 第32页 |
| 2.2 仪器与试剂 | 第32-34页 |
| 2.2.1 主要仪器 | 第32-33页 |
| 2.2.2 工具酶及主要试剂 | 第33-34页 |
| 2.3 培养基和培养条件 | 第34-35页 |
| 2.3.1 酵母培养基 | 第34页 |
| 2.3.2 酵母培养条件 | 第34-35页 |
| 2.3.3 大肠杆菌培养基及培养条件 | 第35页 |
| 2.4 大肠杆菌中的分子克隆实验 | 第35-36页 |
| 2.4.1 大肠杆菌质粒的抽提 | 第35页 |
| 2.4.2 大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第35页 |
| 2.4.3 大肠杆菌的转化 | 第35-36页 |
| 2.4.4 DNA纯化回收 | 第36页 |
| 2.5 酿酒酵母的转化 | 第36-37页 |
| 2.6 分析检测方法 | 第37-42页 |
| 2.6.1 细胞密度测定 | 第37页 |
| 2.6.2 细胞干重测定 | 第37-38页 |
| 2.6.3 葡萄糖浓度的测定 | 第38页 |
| 2.6.4 乙醇浓度的测定 | 第38页 |
| 2.6.5 发酵液中SAM浓度的测定 | 第38-42页 |
| 第三章 过表达SAM2基因强化工业菌株对SAM的合成 | 第42-56页 |
| 3.1 引言 | 第42-43页 |
| 3.2 材料与方法 | 第43-47页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第43页 |
| 3.2.2 工具酶及主要试剂 | 第43页 |
| 3.2.3 大肠杆菌质粒的提取及转化 | 第43页 |
| 3.2.4 酿酒酵母基因组的提取 | 第43-44页 |
| 3.2.5 重组质粒pYMIKP-SAM2的构建 | 第44-45页 |
| 3.2.6 构建并筛选ZJU001-SAM2的重组菌 | 第45页 |
| 3.2.7 摇瓶发酵检测SAM的生产能力 | 第45页 |
| 3.2.8 遗传稳定性测试 | 第45-46页 |
| 3.2.9 两联体10L发酵罐上罐检测SAM的生产能力 | 第46页 |
| 3.2.10 胞内SAM合成酶酶活测定 | 第46-47页 |
| 3.3 实验结果与讨论 | 第47-54页 |
| 3.3.1 构建重组质粒pYMIKP-SAM2 | 第47-48页 |
| 3.3.2 重组菌株的构建与筛选 | 第48-49页 |
| 3.3.3 重组菌株的SAM生产能力得到增强 | 第49-51页 |
| 3.3.4 SAM合成酶酶活的提高是SAM生产能力加强的直接原因 | 第51页 |
| 3.3.5 10L发酵罐发酵进一步证实了R1-ZJU001 SAM生产能力的提高 | 第51-54页 |
| 3.4 小结 | 第54-56页 |
| 第四章 BY4741中与SAM合成相关的代谢途径的研究 | 第56-73页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 材料和方法 | 第57-59页 |
| 4.2.1 菌株和质粒 | 第57页 |
| 4.2.2 培养基与培养条件 | 第57页 |
| 4.2.3 BY4741中的基因敲除 | 第57-59页 |
| 4.3 实验结果与讨论 | 第59-71页 |
| 4.3.1 从SAM合成底物ATP角度改造BY4741代谢途径 | 第59-65页 |
| 4.3.2 从SAM囤积部位角度出发改造BY4741代谢途径 | 第65-68页 |
| 4.3.3 从SAM的胞内降解角度出发改造SAM的代谢途径 | 第68-71页 |
| 4.4 小结 | 第71-73页 |
| 第五章 ZJU001中与SAM合成相关的代谢途径的研究 | 第73-92页 |
| 5.1 引言 | 第73页 |
| 5.2 材料与方法 | 第73-78页 |
| 5.2.1 菌株和质粒 | 第73页 |
| 5.2.2 培养基与培养条件 | 第73-74页 |
| 5.2.3 构建ZJU001的单基因突变菌株 | 第74-75页 |
| 5.2.4 构建ZJU001中GAL11基因过表达的菌株 | 第75-76页 |
| 5.2.5 比较各突变菌株的SAM积累能力 | 第76页 |
| 5.2.6 麦角固醇含量的测定 | 第76-78页 |
| 5.3 实验结果与讨论 | 第78-90页 |
| 5.3.1 ZJU001中基因敲除方法的建立 | 第78-81页 |
| 5.3.2 ZJU001中SAM脱羧途径改造对SAM合成能力的影响 | 第81-83页 |
| 5.3.3 ZJU001中糖原合成途径改造对SAM合成能力的影响 | 第83-85页 |
| 5.3.4 ZJU001中麦角固醇途径改造对SAM合成能力的影响 | 第85-88页 |
| 5.3.5 ZJU001中GAL11基因过表达对SAM合成能力的影响 | 第88-90页 |
| 5.4 小结 | 第90-92页 |
| 第六章 SAM高产工程菌的构建 | 第92-110页 |
| 6.1 引言 | 第92页 |
| 6.2 材料与方法 | 第92-97页 |
| 6.2.1 菌株与质粒 | 第92-93页 |
| 6.2.2 培养基与培养条件 | 第93页 |
| 6.2.3 ZJU001-GS双基因突变菌株的构建 | 第93-94页 |
| 6.2.4 ZJU001-GS-SAM2菌株的构建 | 第94页 |
| 6.2.5 摇瓶发酵比较各菌株的SAM产量 | 第94页 |
| 6.2.6 糖原浓度的测定 | 第94-95页 |
| 6.2.7 脱羧SAM的测定 | 第95-97页 |
| 6.3 实验结果与讨论 | 第97-109页 |
| 6.3.1 双基因突变菌株ZJU001-GS的构建 | 第97-100页 |
| 6.3.2 ZJU001-GS合成SAM能力的考察 | 第100-101页 |
| 6.3.3 SAM高产工程菌ZJU001-GS-SAM2的构建及SAM产量的考察 | 第101-102页 |
| 6.3.4 ZJU001-GS-SAM2胞内糖原和脱羧SAM的检测 | 第102-109页 |
| 6.4 小结 | 第109-110页 |
| 第七章 工程菌株的发酵研究 | 第110-121页 |
| 7.1 引言 | 第110-111页 |
| 7.2 材料与方法 | 第111-114页 |
| 7.2.1 菌株 | 第111页 |
| 7.2.2 分批补料基本发酵条件及控制 | 第111-112页 |
| 7.2.3 拟指数流加模型 | 第112-114页 |
| 7.3 实验结果与讨论 | 第114-120页 |
| 7.3.1 采用分批补料有反馈控制流加基本发酵策略对ZJU001各突变菌株SAM生产能力的检测 | 第114-117页 |
| 7.3.2 拟指数流加法优化ZJU001-GS-SAM2发酵策略 | 第117-120页 |
| 7.4 小结 | 第120-121页 |
| 第八章 结论与展望 | 第121-125页 |
| 8.1 结论 | 第122-123页 |
| 8.2 展望 | 第123-125页 |
| 参考文献 | 第125-133页 |
| 作者简历 | 第133页 |
