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多拷贝人/鲑嵌合降钙素在酿酒酵母中表达优化及安全性评价研究

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多拷贝人/鲑嵌合降钙素在酿酒酵母中表达优化及安全性评价研究
论文目录
 
摘要第1-7页
Abstract第7-23页
第一章 文献综述和立项依据第23-57页
第一节 降钙素的研究概况第23-34页
1 降钙素的来源第23-27页
  1.1 降钙素的发现第23-24页
  1.2 降钙素的生产第24-27页
2 降钙素的生物特性第27-31页
  2.1 生物活性第27-28页
  2.2 降钙素的分子结构与生物活性的关系第28-31页
3 hsCT分子的概况第31-32页
  3.1 hsCT的分子结构第31-32页
  3.2 hsCT的等电点pI值、亲水性和疏水性分析第32页
  3.3 hsCT的抗原表位第32页
4 降钙素的研究展望第32-34页
第二节 酿酒酵母rDNA的结构及其介导整合影响因素的研究进展第34-49页
1 酿酒酵母同源重组研究概况第34页
2 rDNA作为酿酒酵母同源重组位点的研究第34-35页
3 酿酒酵母rDNA序列元件组成及功能第35-39页
  3.1 rDNA序列组成元件及功能第35-37页
  3.2 rDNA序列35S启动子组成元件及功能第37-39页
4 影响酿酒酵母rDNA的因素第39-48页
  4.1 影响rDNA的重要功能元件第39-43页
  4.2 酿酒酵母rDNA重复单元拷贝数的影响因素第43-45页
  4.3 酿酒酵母rDNA重复单元稳定性的影响因素第45-47页
  4.4 以rDNA高拷贝数整合的外源基因在有丝分裂中稳定性的影响因素第47-48页
5 展望第48-49页
第三节 转基因食品的安全性评价研究第49-55页
1 转基因食品的概况第49页
2 转基因食品的安全问题第49-50页
3 转基因食品的安全性评价第50-51页
  3.1 营养评价第50页
  3.2 致敏性检测第50-51页
  3.3 毒理学评价第51页
4 食品安全性评价的应用第51-55页
  4.1 食品安全性评价在转基因动物中的应用第51-52页
  4.2 食品安全性评价在转基因植物中的应用第52-53页
  4.3 食品安全性评价在转基因微藻中的应用第53页
  4.4 食品安全性评价在转基因酵母中的应用第53-55页
第四节 立项依据第55-57页
1 5hsCT基因的构建及表达研究第55页
2 以rDNA介导降钙素基因在酿酒酵母中的表达第55-56页
3 人/鲑嵌合降钙素串联基因在酿酒酵母中表达第56-57页
第二章 转5hsCT基因酿酒酵母的检测分析第57-98页
第一节 5hsCT基因向酿酒酵母的转化和检测第57-74页
1 前言第57-58页
2 材料第58-60页
  2.1 质粒和菌株第58页
  2.2 培养基第58-59页
  2.3 常用试剂第59-60页
  2.4 主要仪器设备第60页
3 方法第60-66页
  3.1 rDNA2-ura3-Ppgk-5hsCT-rDNA1线性片段的获得第60-61页
  3.2 酿酒酵母感受态细胞的制备第61页
  3.3 酿酒酵母的转化操作第61-62页
  3.4 转化子的筛选和遗传稳定性检测第62-63页
  3.5 提取转基因酿酒酵母基因组DNA第63页
  3.6 Southern blotting实验第63-66页
4 结果第66-71页
  4.1 rDNA2-ura3-Ppgk-5hsCT-rDNA1线性片段的获得第66-67页
  4.2 酿酒酵母转化子的筛选和稳定性检测第67-69页
  4.3 酿酒酵母转化子的Southem blotting检测第69-71页
5 讨论第71-74页
  5.1 各种因素对转化率的影响第71-72页
  5.2 转化子稳定性的影响因素第72页
  5.3 Southern blotting检测第72-74页
第二节 人/鲑嵌合降钙素在酿酒酵母中表达的定性和定量分析第74-89页
1 前言第74页
2 材料第74-77页
  2.1 菌种第74-75页
  2.2 溶液及试剂第75-77页
  2.3 实验仪器第77页
3 方法第77-82页
  3.1 转基因酿酒酵母的培养第77-78页
  3.2 酿酒酵母总蛋白的提取第78页
  3.3 可溶性总蛋白质含量的测定第78-79页
  3.4 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳第79-80页
  3.5 Western Blotting第80-81页
  3.6 免疫检测第81页
  3.7 酶联免疫吸附测定第81-82页
4 结果第82-86页
  4.1 转基因酿酒酵母YS-5hsCT总蛋白含量的测定第82-83页
  4.2 人/鲑嵌合降钙素的表达与定性分析第83-85页
  4.3 人/鲑嵌合降钙素的表达与定量分析第85-86页
5 讨论第86-89页
  5.1 Western blotting结果分析第86-87页
  5.2 ELISA结果分析第87-89页
第三节 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠的降血钙活性研究第89-98页
1 前言第89页
2 材料第89-90页
  2.1 实验动物第89页
  2.2 实验菌株第89页
  2.3 培养基第89页
  2.4 常用实验仪器第89-90页
3 方法第90-92页
  3.1 酿酒酵母的培养第90页
  3.2 转基因酿酒酵母的收集第90页
  3.3 动物实验设计第90-91页
  3.4 小鼠取血和血清的制备第91页
  3.5 血钙值的检测第91-92页
  3.6 统计方法第92页
4 结果第92-95页
  4.1 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠状态的影响第92页
  4.2 小鼠血钙值的数据处理第92-93页
  4.3 转基因酿酒酵母YS-5hsCT的持续降血钙活性第93-95页
  4.4 剂量效应第95页
5 讨论第95-98页
  5.1 真空冷冻干燥对转基因酿酒酵母的影响第95-96页
  5.2 取血方法对血清的影响第96-97页
  5.3 转基因酿酒酵母的降血钙活性效果第97-98页
第三章 5hsCT在转基因酿酒酵母YS-5hsCT中表达条件的优化第98-132页
第一节 不同条件对5hsCT基因在转基因酿酒酵母YS-5hsCT中表达的影响第98-116页
1 前言第98页
2 材料第98-99页
  2.1 菌株与培养基第98页
  2.2 主要试剂第98-99页
  2.4 主要仪器第99页
3 方法第99-105页
  3.1 转基因酿酒酵母种子液的培养第99-100页
  3.2 转基因酿酒酵母培养的时间梯度设置第100页
  3.3 转基因酿酒酵母培养的温度梯度设置第100页
  3.4 转基因酿酒酵母培养的转速梯度设置第100-101页
  3.5 酿酒酵母总RNA的提取第101-103页
  3.7 Real-time PCR第103-104页
  3.8 基因相对表达量的数据处理第104页
  3.9 酵母总蛋白的提取第104页
  3.10 可溶性总蛋白质含量的测定第104-105页
  3.11 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳第105页
  3.12 酶联免疫吸附测定第105页
4 结果与分析第105-114页
  4.1 不同条件处理后酿酒酵母总RNA的提取第105页
  4.2 Real-time PCR反应第105-109页
  4.3 不同条件下5hsCT在酿酒酵母中表达的SDS-PAGE分析第109-110页
  4.4 不同条件下人/鲑嵌合降钙素的ELISA测定第110-114页
5 讨论第114-116页
  5.1 反转录反应对Realtime PCR的影响因素第114页
  5.2 不同条件对5hsCT基因在酿酒酵母中表达的影响第114-116页
第二节 单因子实验对转基因酿酒酵母YS-5hsCT培养条件的优化第116-126页
1 前言第116页
2 材料第116-117页
  2.1 菌株与培养基第116页
  2.2 实验试剂第116页
  2.3 主要仪器第116-117页
3 方法第117-119页
  3.1 种子液的制备第117页
  3.2 接种量和发酵时间对转基因酿酒酵母生长的影响第117页
  3.3 温度对转基因酿酒酵母生长的影响第117-118页
  3.4 搅拌转速对转基因酿酒酵母生长的影响第118页
  3.5 通气比对转基因酿酒酵母生长的影响第118页
  3.6 酵母细胞密度及比生长速率的测定第118-119页
  3.7 酵母生物量的测定第119页
4 结果与分析第119-124页
  4.1 发酵时间对转基因酿酒酵母YS-5hsCT生长的影响第119-120页
  4.2 接种量对转基因酿酒酵母生长的影响第120-121页
  4.3 温度对转基因酿酒酵母生长的影响第121-122页
  4.4 搅拌转速对转基因酿酒酵母生长的影响第122-123页
  4.5 通气量对转基因酿酒酵母生长的影响第123-124页
5 讨论第124-126页
  5.1 发酵时间和初始接种量对转基因酿酒酵母生长的影响第124-125页
  5.2 发酵温度对转基因酿酒酵母生长的影响第125页
  5.3 发酵搅拌速度和通气量对转基因酿酒酵母生长的影响第125-126页
第三节 正交实验设计对5hsCT在酿酒酵母YS-5hsCT中表达条件的综合优化第126-132页
1 前言第126页
2 材料第126页
  2.1 菌株和培养基第126页
  2.2 常用仪器第126页
3 方法第126-128页
  3.1 种子液的制备第126-127页
  3.2 正交实验设计第127-128页
  3.3 酵母总蛋白的提取第128页
  3.4 可溶性总蛋白质含量的测定第128页
  3.5 SDS-PAGE蛋白质凝胶电泳第128页
  3.6 酶联免疫吸附测定第128页
  3.7 酵母生物量的测定第128页
4 结果与分析第128-131页
  4.1 正交实验中5hsCT蛋白表达的SDS-PAGE结果分析第128-129页
  4.2 正交实验中5hsCT蛋白产量的结果分析第129-131页
5 讨论第131-132页
第四章 小鼠口服转基因酿酒酵母YS-5hsCT的安全性评价第132-184页
第一节 转基因酿酒酵母YS-5hsCT经口急性毒性实验第132-138页
1 前言第132-133页
2 材料第133-134页
  2.1 实验动物第133页
  2.2 动物饲料第133页
  2.3 菌株第133-134页
3 方法第134-136页
  3.1 实验分组第134页
  3.2 实验记录第134-136页
  3.3 LDso的计算公式第136页
4 结果第136-137页
5 讨论第137-138页
第二节 转基因酿酒酵母YS-5hsCT的致突变作用研究Ⅰ第138-145页
1 前言第138页
2 材料第138-139页
  2.1 实验动物、饲料和菌株第138页
  2.2 主要试剂第138-139页
  2.3 主要仪器第139页
3 方法第139-141页
  3.1 实验分组第139-140页
  3.2 制作小鼠骨髓细胞涂片第140页
  3.3 涂片镜检第140-141页
  3.4 统计学分析第141页
4 结果第141-143页
5 讨论第143-145页
第三节 转基因酿酒酵母的致突变作用研究Ⅱ第145-151页
1 前言第145页
2 材料第145页
  2.1 动物、饲料和菌株第145页
  2.2 主要试剂第145页
  2.3 主要仪器第145页
3 方法第145-147页
  3.1 实验分组第145-146页
  3.2 制作小鼠精子涂片第146页
  3.3 精子畸形检查第146-147页
  3.4 统计学分析第147页
4 结果第147-150页
  4.1 酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠精子畸形的诱导作用第147-148页
  4.2 小鼠精子的畸形类型检查第148-150页
5 讨论第150-151页
第四节 转基因酿酒酵母YS-5hsCT的致畸变作用研究第151-166页
1 前言第151页
2 材料第151-152页
  2.1 动物、饲料和菌株第151页
  2.2 主要试剂第151-152页
  2.3 主要仪器第152页
3 方法第152-157页
  3.1 实验分组第152-153页
  3.2 孕鼠的生殖机能检查第153页
  3.3 胎鼠的外观检查第153-154页
  3.4 胎鼠骨骼标本的制作与检查第154-155页
  3.5 胎鼠内脏的畸形检查第155-156页
  3.6 数据统计和分析第156-157页
4 结果第157-164页
  4.1 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠的母体毒性第157-160页
  4.2 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠的胚胎发育毒性第160页
  4.3 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对胎鼠外观的致畸影响第160-161页
  4.4 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对胎鼠骨骼的致畸影响第161-163页
  4.5 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对胎鼠各器官、内脏的致畸影响第163-164页
5 讨论第164-166页
第五节 转基因酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠的30天喂养实验研究第166-184页
1 前言第166页
2 材料第166-167页
  2.1 动物、饲料和菌株第166页
  2.2 主要试剂第166-167页
  2.3 主要仪器第167页
3 方法第167-170页
  3.1 实验分组第167页
  3.2 血液学和血液生化检查第167-168页
  3.3 病理组织学检查第168页
  3.4 冰冻切片的制备第168-169页
  3.5 冰冻切片的苏木素伊红染色第169-170页
  3.6 统计学分析第170页
4 结果第170-181页
  4.1 一般观察第170页
  4.2 酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠体重的影响第170-171页
  4.3 酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠血液常规指标的影响第171-172页
  4.4 酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠血液生化指标的影响第172-177页
  4.5 酿酒酵母YS-5hsCT对小鼠脏器系数的影响第177-179页
  4.6 病理组织检查第179-181页
5 讨论第181-183页
  5.1 血常规和血液生化检测第181-182页
  5.2 体重变化和脏器系数的影响第182-183页
6 小结第183-184页
总结第184-186页
参考文献第186-208页
致谢第208-209页
个人简历第209-210页
发表的学术论文情况第210页

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涨跌停制度对创业板股票波动性影响
本土酿酒酵母对葡萄酒质量的影响及
苹果酒酵母BAT2基因和支链氨基酸代
资源型上市公司绩效评价及其影响因
苹果根皮素糖基转移酶的基因表征及
北大未名私募股权投资项目的风险管
三种中国地方猪肉与瘦肉型猪肉的风
股指之间及股指与股指期货之间的关
大豆7S、11S球蛋白与分离蛋白影响面
西藏灵菇发酵乳多糖的性质表征及菌
注册制背景下上市公司信息披露与监
巴氏球菌TS-82产类胡萝卜素裂解酶及
金融衍生产品对冲、宏观经济风险与
米根霉遗传转化体系建立及木糖代谢
转谷氨酰胺酶对羊毛的改性研究
我国股票型公募基金与QFII的投资风
光电催化氧化降解染料废水
多元统计分析在证券板块投资中的应
振动式大包下渣检测机理及其关键技
自主配售权受限对IPO定价过程及效率
高炉煤气流预测算法研究及其在炉况
高炉冶炼过程的铁水硅含量分析及其
非流动性、投资者情绪与股票定价—
Fe-6.5Si单相合金雾化液滴凝固行为
铁基粉末高速压制过程中粉体摩擦行
公开市场业务对股市价格的影响
铁矿石烧结过程中料层高温区流动阻
我国开放式股票型基金投资风格漂移
卫生陶瓷模具石膏性能劣化机制及耐
高性能材料刀具及其切削性能研究
Z公司阳光私募基金操作风险管理策略
基于网格近似法的数控机床贝叶斯可
基于投资者情绪的我国A股市场股价对
螺旋锥齿轮数控加工及精度控制关键
大型数控切点跟踪曲轴磨削系统稳定
黑龙江联合产权交易所发展策略研究
铣削表面形貌的多尺度表征与仿真技
天琪私募股权基金发展对策研究
北山公司股票投资策略研究
快速刀具伺服车削加工系统的误差建
我国租赁资产证券化的应用研究——
搅拌摩擦焊接/加工高熔点合金组织与
融资融券对我国股市流动性和波动性
钣金零件成形工艺稳健优化关键技术
风险投资及其行为特征对于创业板IP
二十辊轧机振痕振动激励机理与振动
基于元胞自动机的股票价格仿真研究
大型铸锻件加热透烧的无损预报与工
钛基金属表面双脉冲电沉积纳米CeO<
KMV模型对我国上市企业信用风险度量
基于搅拌摩擦焊技术的TC4钛合金表面
基于行为特征和分形降维的股价趋势
AZ31镁合金表面合金化热扩散层与铸
中信证券客户价值分析及数据模型化
低碳含量无碳化物贝氏体钢的强韧化
中国股票市场复杂网络性质的动态研
护环用改进型超高氮奥氏体钢的铸态
新型Mg-Mn-Ca/Mg-Mn-Ca-Sr生物镁合
数据挖掘技术在证券客户偏好分析中
Al-Cu-Mg-(Ag)/Al-Zn-Mg-Cu-(Ag)合
新三板中小企业定向增发经营绩效实
热冲压成型用模具钢SDCM的组织与性
Fe-Cr-Ni合金的三维晶界网络分布特
处于经济低位运行时期结构性产品标
CuZr非晶合金玻璃形成能力、塑性变
委托单市场买卖价差关键问题的研究
纳米晶Cu,Ni及Ni-Fe合金力学行为及
中国股票市场趋势性特征研究
直流电作用下液—固金属体系的润湿
屈曲法表征薄膜/韧性基底材料体系的
分级基金折溢价与投资者情绪研究
利率市场化对中国上市公司投资效率
基于原子层沉积的光电薄膜工艺与器
传统产业转型升级过程中股票融资问
纳米材料在电子封装互连及散热方面
p型Sb掺杂ZnO纳米棒的制备与光电性
主权财富基金投资的公告效应实证分
利用溶胶—凝胶法制备手性纳米材料
分级基金投资策略研究
Ⅱ-Ⅵ族半导体纳米线的溶液法合成、
中概股私有化退市研究
低维纳米材料的设计、制备及其钠离
蒽及其衍生物载流子传输性质的理论
最优债券投资组合理论与中国债券基
2.5维机织复合材料疲劳寿命预测模型
基金投资风格差异化对基金业绩的影
锡/钼基锂离子电池负极材料的微结构
 
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