论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 前言 | 第19-35页 |
| 0.1 鱿鱼资源概述 | 第19-21页 |
| 0.2 乌贼墨生物活性研究进展 | 第21-23页 |
| 0.2.1 乌贼墨主要化学成分研究进展 | 第21-22页 |
| 0.2.2 乌贼墨主要生物活性研究进展 | 第22-23页 |
| 0.3 肠道粘膜免疫研究进展 | 第23-27页 |
| 0.3.1 肠道菌群的研究进展 | 第23-25页 |
| 0.3.2 肠道获得性免疫的研究进展 | 第25-26页 |
| 0.3.3 肠道上皮细胞紧密连接的研究进展 | 第26-27页 |
| 0.4 多糖生物功能研究简述 | 第27页 |
| 0.5 多糖与肠道菌群研究进展 | 第27-29页 |
| 0.6 多糖与肠道粘膜免疫研究进展 | 第29-31页 |
| 0.7 化疗对肠道粘膜损伤概述 | 第31-33页 |
| 0.8 研究目的及内容 | 第33-35页 |
| 第一章 鱿鱼墨多糖改善化疗小鼠肠道菌群的研究 | 第35-53页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料和试剂 | 第35-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第35页 |
| 2.2 实验动物 | 第35页 |
| 2.3 实验试剂 | 第35-37页 |
| 2.4 实验仪器 | 第37-38页 |
| 3 实验方法 | 第38-43页 |
| 3.1 鱿鱼墨粗多糖的提取 | 第38页 |
| 3.2 动物模型建立及分组 | 第38-39页 |
| 3.3 肠道细菌总DNA的提取 | 第39页 |
| 3.4 PCR-RFLP分析肠道菌群的组成变化可行性分析 | 第39-40页 |
| 3.5 构建肠道细菌16S rDNA基因克隆文库分析肠道菌群的组成变化 | 第40-42页 |
| 3.6 实时荧光定量PCR对肠道总菌、拟杆菌、厚壁菌、双歧杆菌进行定量分析 | 第42-43页 |
| 4 结果与讨论 | 第43-51页 |
| 4.1 鱿鱼墨多糖对肠道总菌数量的影响 | 第43-44页 |
| 4.2 PCR-RFLP对肠道菌群的组成变化分析的可行性探讨 | 第44-45页 |
| 4.3 构建16S rDNA基因克隆文库研究肠道菌群的组成变化 | 第45-46页 |
| 4.4 ARDRA分型及文库的多样性分析 | 第46-50页 |
| 4.5 变化最显著细菌种类分析 | 第50-51页 |
| 4.6 鱿鱼墨多糖对肠道双歧杆菌、厚壁菌含量的影响 | 第51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 第二章 鱿鱼墨多糖促进肠道上皮细胞紧密连接与粘附连接的研究 | 第53-68页 |
| 1 引言 | 第53页 |
| 2 材料和试剂 | 第53-56页 |
| 2.1 实验材料 | 第53页 |
| 2.2 实验动物 | 第53-54页 |
| 2.3 实验试剂 | 第54-55页 |
| 2.4 实验仪器 | 第55-56页 |
| 3 实验方法 | 第56-61页 |
| 3.1 鱿鱼墨粗多糖的提取 | 第56页 |
| 3.2 动物分组 | 第56页 |
| 3.3 小肠蛋白表达差异性分析及质谱鉴定 | 第56-59页 |
| 3.5 Western blot方法检测蛋白表达量 | 第59-60页 |
| 3.6 小肠组织免疫荧光染色观察 | 第60-61页 |
| 3.7 数据统计处理 | 第61页 |
| 4 结果与讨论 | 第61-66页 |
| 4.1 小肠组织蛋白表达差异性分析 | 第61-62页 |
| 4.2 鱿鱼墨多糖对小鼠肠道上皮细胞粘附连接蛋白的影响 | 第62-64页 |
| 4.3 鱿鱼墨多糖对小鼠肠道上皮细胞紧密连接与粘附连接影响的组织学观察验证 | 第64-65页 |
| 4.4 鱿鱼墨多糖对小鼠肠道上皮细胞紧密连接其他粘附因子表达的影响 | 第65-66页 |
| 5 本章小结 | 第66-68页 |
| 第三章 鱿鱼墨多糖促进肠道SIGA分泌的功能及其机理探讨 | 第68-89页 |
| 1 引言 | 第68页 |
| 2 材料和试剂 | 第68-71页 |
| 2.1 实验材料 | 第68页 |
| 2.2 实验动物 | 第68页 |
| 2.3 实验试剂 | 第68-71页 |
| 3 实验方法 | 第71-74页 |
| 3.1 鱿鱼墨粗多糖的提取 | 第71页 |
| 3.2 动物实验分组 | 第71页 |
| 3.3 小肠黏膜SIgA含量的测定 | 第71页 |
| 3.4 Real time-RT-PCR方法检测基因表达量 | 第71-72页 |
| 3.5 Western blot方法检测蛋白表达量 | 第72页 |
| 3.6 小肠组织免疫组织化学染色观察IgA相对含量 | 第72-73页 |
| 3.7 小鼠血清IgA、IgG含量测定 | 第73页 |
| 3.8 小鼠血清TNF-α含量测定 | 第73页 |
| 3.9 鱿鱼墨多糖内毒素含量检测 | 第73-74页 |
| 3.10 数据统计处理 | 第74页 |
| 4 结果与讨论 | 第74-87页 |
| 4.1 鱿鱼墨多糖OBP对小鼠肠粘膜SIgA的改善作用 | 第74页 |
| 4.2 鱿鱼墨多糖对J chain、pIgR、IgA表达量的影响 | 第74-78页 |
| 4.3 鱿鱼墨多糖改善肠道IgA表达的验证 | 第78-80页 |
| 4.4 鱿鱼墨多糖促进肠道IgA高表达非机体炎症反应所致 | 第80-81页 |
| 4.5 鱿鱼墨多糖对IgA~+B cell分化过程的影响 | 第81-84页 |
| 4.6 鱿鱼墨多糖对IgA~+B cell分化成浆细胞及浆细胞分泌过程的促进作用验证 | 第84-87页 |
| 5 本章小结 | 第87-89页 |
| 第四章 鱿鱼墨多糖中促进肠道SIGA分泌的主要功效成分SIP的确证 | 第89-98页 |
| 1 引言 | 第89页 |
| 2 材料和试剂 | 第89-90页 |
| 2.1 实验材料 | 第89页 |
| 2.2 实验动物 | 第89-90页 |
| 2.3 实验试剂 | 第90页 |
| 2.4 主要仪器、耗材 | 第90页 |
| 3 实验方法 | 第90-92页 |
| 3.1 鱿鱼墨粗多糖的提取 | 第90页 |
| 3.2 鱿鱼墨纯多糖SIP的分离与纯化 | 第90-91页 |
| 3.3 苯酚-硫酸法检测各组分糖含量 | 第91页 |
| 3.4 高效液相色谱(HPLC)检测糖纯度 | 第91页 |
| 3.5 多糖核磁共振波谱分析(NMR) | 第91页 |
| 3.6 动物实验分组 | 第91-92页 |
| 3.7 小肠黏膜SIgA含量的测定 | 第92页 |
| 3.8 数据统计处理 | 第92页 |
| 4 结果与讨论 | 第92-96页 |
| 4.1 鱿鱼墨多糖的分离纯化 | 第92-94页 |
| 4.2 鱿鱼墨多糖~1H-NMR图谱鉴定 | 第94-95页 |
| 4.3 鱿鱼墨多糖SIP对化疗小鼠免疫力的影响 | 第95-96页 |
| 4.4 鱿鱼墨多糖SIP对化疗小鼠小肠粘膜SIgA的改善作用 | 第96页 |
| 5 本章小结 | 第96-98页 |
| 第五章 鱿鱼墨纯多糖SIP促进SIgA分泌的机理探讨 | 第98-117页 |
| 1 引言 | 第98页 |
| 2 材料和试剂 | 第98-101页 |
| 2.1 实验动物 | 第98页 |
| 2.2 实验细胞 | 第98页 |
| 2.3 实验试剂 | 第98-100页 |
| 2.4 实验仪器 | 第100-101页 |
| 3 实验方法 | 第101-105页 |
| 3.1 鱿鱼墨粗多糖OBP的提取 | 第101页 |
| 3.2 鱿鱼墨纯多糖SIP的分离纯化 | 第101页 |
| 3.3 动物实验分组 | 第101页 |
| 3.4 细胞培养 | 第101页 |
| 3.5 Real time-RT-PCR方法检测基因表达量 | 第101-102页 |
| 3.6 Western blot方法检测蛋白表达量 | 第102-103页 |
| 3.7 小肠组织免疫荧光化学染色观察IgA相对含量 | 第103页 |
| 3.8 小肠组织免疫荧光染色观察 | 第103页 |
| 3.9 鱿鱼墨多糖SIP内毒素含量检测 | 第103页 |
| 3.10 MTT法检测SIP对RAW264.7和Caco-2增殖情况 | 第103页 |
| 3.11 检测SIP对RAW264.7细胞IL-6、IL-10、TNF-α的mRNA表达量的影响 | 第103-104页 |
| 3.12 检测SIP对Caco-2细胞pIgR的mRNA和蛋白表达量的影响 | 第104页 |
| 3.13 硝酸还原酶法检测SIP对RAW264.7培养上清液中的NO含量 | 第104页 |
| 3.14 小鼠脾脏淋巴细胞分离 | 第104-105页 |
| 3.15 MTT法检测SIP对小鼠脾淋巴细胞增殖情况 | 第105页 |
| 3.16 检测SIP对小鼠脾淋巴细胞IL-6、IL-10、TNF-α的mRNA表达量的影响 | 第105页 |
| 3.17 数据统计处理 | 第105页 |
| 4 结果与讨论 | 第105-116页 |
| 4.1 鱿鱼墨多糖对SIgA三组分-J chain、pIgR、IgA表达量的影响 | 第106-107页 |
| 4.2 鱿鱼墨多糖SIP对IgA高表达量的验证 | 第107页 |
| 4.3 鱿鱼墨多糖SIP促进肠道上皮细胞中pIgR高表达的验证与探讨 | 第107-110页 |
| 4.4 鱿鱼墨多糖SIP对IgA高表达的机理探讨 | 第110页 |
| 4.5 鱿鱼墨多糖SIP激活免疫相关细胞 | 第110-115页 |
| 4.6 鱿鱼墨多糖SIP对免疫细胞IFN-gamma表达量的影响 | 第115页 |
| 4.7 鱿鱼墨多糖SIP对上皮细胞Caco-2 IL-6和IL-10表达量的影响 | 第115-116页 |
| 5 本章小结 | 第116-117页 |
| 第六章 鱿鱼墨纯多糖SIP对PIGR转运速率的影响 | 第117-141页 |
| 1 引言 | 第117页 |
| 2 材料和试剂 | 第117-120页 |
| 2.1 实验细胞 | 第117页 |
| 2.2 IgA多发性骨髓瘤病人血清及正常人血清 | 第117-118页 |
| 2.3 实验试剂 | 第118-119页 |
| 2.4 实验仪器及耗材 | 第119-120页 |
| 3 实验方法 | 第120-126页 |
| 3.1 鱿鱼墨多糖SIP的分离纯化 | 第120页 |
| 3.2 建立表达human pIgR(hpIgR)的上皮细胞MDCK株 | 第120-124页 |
| 3.3 细胞培养 | 第124页 |
| 3.4 dIgA/pIgA的获得 | 第124-125页 |
| 3.5 三维细胞转运实验 | 第125-126页 |
| 4 结果与讨论 | 第126-140页 |
| 4.1 构建表达人pIgR的表达型载体phpIgR | 第126-130页 |
| 4.2 以MDCK细胞为出发细胞株构建表达人pIgR的MDCK-pIgR细胞株 | 第130-133页 |
| 4.3 dIgA/pIgA的获得 | 第133-137页 |
| 4.4 MDCK-pIgR上皮细胞株三维转运实验 | 第137-140页 |
| 5 本章小结 | 第140-141页 |
| 总结 | 第141-143页 |
| 创新点 | 第143-144页 |
| 参考文献 | 第144-158页 |
| 附录 | 第158-163页 |
| 个人简历 | 第163-164页 |
| 在读期间发表论文情况 | 第164-167页 |
| 致谢 | 第167页 |
