论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-15页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-29页 |
| 1.1 葡萄酒中的乳酸菌 | 第15-17页 |
| 1.1.1 葡萄酒中乳酸菌的种类 | 第15页 |
| 1.1.2 酒球菌属的简介（凌代文 1999） | 第15-17页 |
| 1.2 乳酸菌的分类研究方法 | 第17-19页 |
| 1.2.1 16S r RNA基因序列分析 | 第17页 |
| 1.2.2 多序列位点分型技术 | 第17-19页 |
| 1.2.3 脉冲场凝脉电泳 | 第19页 |
| 1.3 酒酒球菌胁迫适应性反应机制的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3.1 MLF与膜H+-F0F1-ATP酶 | 第20-21页 |
| 1.3.2 环境胁迫对酒酒球菌细胞膜组分的影响 | 第21-22页 |
| 1.3.3 胁迫蛋白的合成 | 第22-23页 |
| 1.4 基因表达的研究方法 | 第23-24页 |
| 1.5 立题意义与研究内容 | 第24-29页 |
| 1.5.1 立题意义 | 第24-25页 |
| 1.5.2 课题主要研究内容 | 第25-27页 |
| 1.5.3 技术路线 | 第27-29页 |
| 第二章中国不同葡萄酒产区酒酒球菌的分离鉴定 | 第29-39页 |
| 2.1 材料与仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.1 样品来源 | 第29页 |
| 2.1.2 培养基与培养条件 | 第29页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第29-30页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第30页 |
| 2.2 试验方法 | 第30-33页 |
| 2.2.1 样品采集 | 第30页 |
| 2.2.2 酒酒球菌的分离和纯化 | 第30-31页 |
| 2.2.3 酒酒球菌分离株的保存 | 第31页 |
| 2.2.4 酒酒球菌分离株的鉴定 | 第31-33页 |
| 2.3 结果与分析 | 第33-36页 |
| 2.3.1 酒酒球菌的分离结果 | 第33-34页 |
| 2.3.2. DNA的提取结果 | 第34页 |
| 2.3.3 16S r RNA基因的扩增结果 | 第34页 |
| 2.3.4 16S r RNA基因序列全部上传于Gen Bank数据库 | 第34-35页 |
| 2.3.5 16S r RNA基因同源性比较及系统发育树分析 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-37页 |
| 2.4.1 PCR扩增的特异性 | 第36-37页 |
| 2.4.2 酒酒球菌的 16S r RNA分类鉴定 | 第37页 |
| 2.5 小结 | 第37-39页 |
| 第三章中国不同葡萄酒产区酒酒球菌抗逆基因MLST分析 | 第39-59页 |
| 3.1 材料与仪器 | 第39-40页 |
| 3.1.1 供试菌株 | 第39页 |
| 3.1.2 培养基与培养条件 | 第39页 |
| 3.1.3 主要试剂 | 第39-40页 |
| 3.1.4 主要仪器设备 | 第40页 |
| 3.1.5 生物信息学分析软件 | 第40页 |
| 3.2 试验方法 | 第40-44页 |
| 3.2.1 MLST目的基因的选取 | 第40-41页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第41-42页 |
| 3.2.3 菌株培养及总DNA提取 | 第42页 |
| 3.2.4 抗逆基因的PCR扩增 | 第42-44页 |
| 3.2.5 DNA测序 | 第44页 |
| 3.2.6 序列分析 | 第44页 |
| 3.3 结果与分析 | 第44-56页 |
| 3.3.1 MLST目的基因的扩增和测序结果 | 第44-46页 |
| 3.3.2 酒酒球菌等位基因的ST分型结果 | 第46-48页 |
| 3.3.3 等位基因的分析 | 第48-52页 |
| 3.3.4 ST型的e BURST分析 | 第52-53页 |
| 3.3.5 不同地区酒酒球菌分离株的亲缘关系分析 | 第53-55页 |
| 3.3.6 不同ST型的聚类分析结果 | 第55-56页 |
| 3.4 讨论 | 第56-58页 |
| 3.4.1 MLST分型抗逆基因片段特性 | 第56-57页 |
| 3.4.2 抗逆基因中检测出选择性压力 | 第57页 |
| 3.4.3 混合式进化途径 | 第57-58页 |
| 3.5 小结 | 第58-59页 |
| 第四章酒酒球菌PFGE技术与MLST技术的比较及结合 | 第59-75页 |
| 4.1 材料与仪器 | 第59-60页 |
| 4.1.1 供试菌株 | 第59页 |
| 4.1.2 培养基与培养条件 | 第59页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第59页 |
| 4.1.4 主要仪器设备 | 第59-60页 |
| 4.1.5 生物信息分析软件 | 第60页 |
| 4.2 试验方法 | 第60-64页 |
| 4.2.1 主要试剂的配制 | 第60页 |
| 4.2.2 胶块的制备 | 第60-61页 |
| 4.2.3 细胞的裂解 | 第61页 |
| 4.2.4 洗胶块 | 第61页 |
| 4.2.5 酶切 | 第61-62页 |
| 4.2.6 加样 | 第62-63页 |
| 4.2.7 电泳 | 第63页 |
| 4.2.8 图像的获取 | 第63页 |
| 4.2.9 数据分析 | 第63-64页 |
| 4.3 结果与分析 | 第64-69页 |
| 4.3.1 PFGE分型 | 第64-65页 |
| 4.3.2 PFGE分型和菌株的分布 | 第65-66页 |
| 4.3.3 PFGE和MLST分型结果的组合 | 第66-68页 |
| 4.3.4 PFGE和MLST分型技术比较 | 第68-69页 |
| 4.4 讨论 | 第69-72页 |
| 4.4.1 不同分型方式都形成了两个系统发育组 | 第69-70页 |
| 4.4.2 PFGE分型技术展示出的酒酒球菌东、西部产区差异 | 第70-71页 |
| 4.4.3 PFGE-MLST结合技术的优越性 | 第71-72页 |
| 4.5 小结 | 第72-75页 |
| 第五章不同基因型酒酒球菌酿酒适应性的相关研究 | 第75-85页 |
| 5.1 材料与仪器 | 第75-76页 |
| 5.1.1 供试菌株 | 第75页 |
| 5.1.2 培养基与培养条件 | 第75页 |
| 5.1.3 主要试剂 | 第75页 |
| 5.1.4 主要仪器设备 | 第75-76页 |
| 5.2 试验方法 | 第76-77页 |
| 5.2.1 酒酒球菌菌液浊度与菌密度的测定 | 第76页 |
| 5.2.2 酒酒球菌对p H和酒精的抗性实验 | 第76-77页 |
| 5.2.3 苹果酸-乳酸酶活力的测定 | 第77页 |
| 5.2.4 氨基酸测定（陈毓荃 1997） | 第77页 |
| 5.3 结果与分析 | 第77-82页 |
| 5.3.1 酒酒球菌菌密度与OD位的关系 | 第77-78页 |
| 5.3.2 p H和酒精对酒酒球菌生长的影晌 | 第78-80页 |
| 5.3.3 酒酒球菌对p H和酒精复合因子的抗性 | 第80-81页 |
| 5.3.4 不同菌株间苹果酸-乳酸酶活力比较 | 第81页 |
| 5.3.5 优选菌株的氨基酸代谢研究 | 第81-82页 |
| 5.4 讨论 | 第82-83页 |
| 5.4.1 菌株的不同酿酒适应性 | 第82页 |
| 5.4.2 影响酒酒球菌苹果酸-乳酸酶代谢活力的因素 | 第82-83页 |
| 5.4.3 酒酒球菌中含氮化合物的代谢 | 第83页 |
| 5.5 小结 | 第83-85页 |
| 第六章 MLF过程中酒酒球菌不同抗逆基因表达水平研究 | 第85-105页 |
| 6.1 材料与仪器 | 第85-86页 |
| 6.1.1 供试菌株 | 第85页 |
| 6.1.2 模拟酒培养基与培养条件 | 第85页 |
| 6.1.3 主要试剂 | 第85-86页 |
| 6.1.4 主要仪器设备 | 第86页 |
| 6.2 试验方法 | 第86-89页 |
| 6.2.1 关键酶基因及管家基因的确定 | 第86-87页 |
| 6.2.2 实时荧光定量PCR引物设计与合成 | 第87页 |
| 6.2.3 RNA的提取 | 第87-88页 |
| 6.2.4 反转录合成c DNA | 第88页 |
| 6.2.5 实时荧光定量PCR | 第88页 |
| 6.2.6 实时荧光定量PCR数据处理分析 | 第88-89页 |
| 6.2.7 抗逆基因在菌株不同MLF阶段的表达测定 | 第89页 |
| 6.2.8 苹果酸和柠檬酸含量的测定 | 第89页 |
| 6.3 结果与分析 | 第89-100页 |
| 6.3.1 RNA的数量和质量 | 第89-90页 |
| 6.3.2 实时荧光定量PCR结果 | 第90-92页 |
| 6.3.3 不同生长阶段关键酶基因的表达情况分析 | 第92-100页 |
| 6.4 讨论 | 第100-103页 |
| 6.4.1 MLF过程中mle A和cit E基因的变化 | 第101-102页 |
| 6.4.2 MLF过程中胁迫应答相关基因的变化 | 第102-103页 |
| 6.5 小结 | 第103-105页 |
| 第七章结论、创新与展望 | 第105-107页 |
| 7.1 主要结论 | 第105页 |
| 7.2 创新点 | 第105-106页 |
| 7.3 展望 | 第106-107页 |
| 参考文献 | 第107-117页 |
| 致谢 | 第117-119页 |
| 作者简介 | 第119页 |
