论文目录 | |
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 缩写词表 | 第11-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-39页 |
| 1.1 引言 | 第15-18页 |
| 1.2 类胡萝卜素的应用及市场 | 第18-22页 |
| 1.2.1 类胡萝卜素简介 | 第18-19页 |
| 1.2.2 类胡萝卜素的用途 | 第19-21页 |
| 1.2.3 类胡萝卜素的市场价值 | 第21-22页 |
| 1.3 类胡萝卜素的合成 | 第22-32页 |
| 1.3.1 类胡萝卜素的化学法合成 | 第22-23页 |
| 1.3.2 类胡萝卜素的生物合成途径 | 第23-25页 |
| 1.3.3 生物法合成类胡萝卜素研究进展 | 第25-27页 |
| 1.3.4 类胡萝卜素在异源宿主中的合成 | 第27-32页 |
| 1.4 酶分子定向进化在类胡萝卜素生物合成中的应用 | 第32-34页 |
| 1.4.1 定向进化用于新类胡萝卜素分子的合成 | 第32-34页 |
| 1.4.2 定向进化在提高类胡萝卜素产量上的应用 | 第34页 |
| 1.5 酿酒酵母中外源代谢途径的组装和表达调控 | 第34-37页 |
| 1.5.1 基于附着型载体的方法 | 第34-35页 |
| 1.5.2 基于YIP整合型载体的方法 | 第35页 |
| 1.5.3 基于PCR的多片段组装技术 | 第35-36页 |
| 1.5.4 外源生物合成途径的基因表达调控 | 第36-37页 |
| 1.6 本课题研究的内容及意义 | 第37-39页 |
| 第二章 β-胡萝卜素生物合成途径基因的克隆与表达 | 第39-49页 |
| 2.1 前言 | 第39-40页 |
| 2.2 实验材料与方法 | 第40-42页 |
| 2.2.1 仪器设备 | 第40-41页 |
| 2.2.2 生物材料 | 第41页 |
| 2.2.3 生化试剂和药品 | 第41页 |
| 2.2.4 试剂和培养基配方 | 第41-42页 |
| 2.3 实验方法 | 第42-45页 |
| 2.3.1 质粒抽提、酶切、连接等分子生物学操作 | 第42-43页 |
| 2.3.2 酿酒酵母电转化感受态细胞的制备及转化 | 第43-44页 |
| 2.3.3 红法夫酵母RNA的抽提与胡萝卜素基因的克隆 | 第44-45页 |
| 2.3.4 酿酒酵母类胡萝卜素的抽提及HPLC分析 | 第45页 |
| 2.4 实验结果与讨论 | 第45-48页 |
| 2.4.1 β-胡萝卜素合成基因的克隆 | 第45-46页 |
| 2.4.2 β-胡萝卜素合成途径在2μ质粒上的构建 | 第46-48页 |
| 2.4 本章小结 | 第48-49页 |
| 第三章 酿酒酵母代谢途径组装新载体工具的构建 | 第49-60页 |
| 3.1 前言 | 第49-50页 |
| 3.2 实验材料与方法 | 第50-52页 |
| 3.2.1 生物材料 | 第50页 |
| 3.2.2 生化试剂及培养基 | 第50-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 3.3.1 常规分子生物学操作 | 第52页 |
| 3.3.2 CPEC法构建质粒 | 第52-54页 |
| 3.3.3 pMRI载体的使用及marker循环利用测试 | 第54页 |
| 3.4 实验结果与讨论 | 第54-58页 |
| 3.4.1 pMRI基本载体骨架的构建 | 第54页 |
| 3.4.2 pMRI表达载体的构建 | 第54-57页 |
| 3.4.3 pMRI质粒的使用 | 第57页 |
| 3.4.4 loxP-KanMX-pBR32ori-loxP的循环利用测试 | 第57-58页 |
| 3.5 本章小结 | 第58-60页 |
| 第四章 利用分散式组装策略构建可控性β-胡萝卜素生物合成途径 | 第60-75页 |
| 4.1 引言 | 第60-61页 |
| 4.2 仪器设备、试剂、药品和引物 | 第61页 |
| 4.3 实验方法 | 第61-65页 |
| 4.3.1 β-胡萝卜素、番茄红素标准曲线制作 | 第61-62页 |
| 4.3.2 HPLC分析条件 | 第62-63页 |
| 4.3.3 培养基中葡萄糖浓度的测定 | 第63页 |
| 4.3.4 表达载体的构建和代谢途径的组装 | 第63-64页 |
| 4.3.5 GAL80基因的敲除 | 第64页 |
| 4.3.6 菌株的基因型检测 | 第64页 |
| 4.3.7 菌株的摇瓶发酵 | 第64页 |
| 4.3.9 菌株的遗传稳定性分析 | 第64-65页 |
| 4.4 实验结果与讨论 | 第65-74页 |
| 4.4.1 类胡萝卜素标准曲线的建立 | 第65-66页 |
| 4.4.2 功能模块和菌株的构建 | 第66-67页 |
| 4.4.3 半乳糖诱导类胡萝卜素的生物合成 | 第67-69页 |
| 4.4.4 葡萄糖控制型β-胡萝卜合成途径的构建 | 第69-73页 |
| 4.4.5 菌株的遗传稳定性分析 | 第73-74页 |
| 4.5 本章小结 | 第74-75页 |
| 第五章 利用顺序控制策略提高酿酒酵母中类胡萝卜素的产量 | 第75-100页 |
| 5.1 引言 | 第75-77页 |
| 5.2 实验仪器材料与试剂 | 第77-80页 |
| 5.3 实验方法 | 第80-84页 |
| 5.3.1 角鲨烯和FOH标准曲线制作 | 第80页 |
| 5.3.2 发酵液中角鲨烯和FOH的抽提 | 第80页 |
| 5.3.3 乙醇标准曲线制作及样品中乙醇含量分析 | 第80-81页 |
| 5.3.4 载体及菌株的构建 | 第81-83页 |
| 5.3.5 实时荧光定量PCR和半定量PCR检测基因的表达变化 | 第83页 |
| 5.3.6 酿酒酵母的高密度发酵 | 第83-84页 |
| 5.4 实验结果与讨论 | 第84-99页 |
| 5.4.1 角鲨烯、FOH、乙醇标准曲线 | 第84-85页 |
| 5.4.2 启动子强度的比较 | 第85-88页 |
| 5.4.3 利用P_(BTSI)下调ERG9基因的表达 | 第88-91页 |
| 5.4.4 构建β-胡萝卜素和角鲨烯合成途径的顺序控制系统 | 第91-93页 |
| 5.4.5 优化顺序控制策略进一步提高类胡萝卜素产量 | 第93-96页 |
| 5.4.6 YXWP-101(+)的高密度发酵 | 第96-99页 |
| 5.5 本章小结 | 第99-100页 |
| 第六章 结合蛋白质工程与代谢工程提高酿酒酵母中番茄红素的产量 | 第100-129页 |
| 6.1 引言 | 第100-101页 |
| 6.2 实验材料 | 第101-105页 |
| 6.2.1 菌株质粒及其它生物材料 | 第101-103页 |
| 6.2.2 仪器、试剂、药品和引物 | 第103-105页 |
| 6.3 实验方法 | 第105-111页 |
| 6.3.1 分子生物学操作 | 第105页 |
| 6.3.2 生物信息学分析 | 第105-106页 |
| 6.3.3 酿酒酵母的培养和产物分析 | 第106页 |
| 6.3.4 番茄红素合成途径中关键酶的选择和改造原理 | 第106-107页 |
| 6.3.5 酿酒酵母代谢途径中关键酶定向进化的基本流程 | 第107-108页 |
| 6.3.6 pUMRI载体及菌株的构建 | 第108-111页 |
| 6.4 实验结果与讨论 | 第111-128页 |
| 6.4.1 不同来源八氢番茄红素基因对酿酒酵母产番茄红素的影响 | 第111-114页 |
| 6.4.2 CrtYB的定向进化 | 第114-120页 |
| 6.4.3 整合型番茄红素合成途径的组装 | 第120-122页 |
| 6.4.4 CrtE的定向进化 | 第122-124页 |
| 6.4.5 CrtI的定向进化 | 第124页 |
| 6.4.6 不同拷贝数Crt基因对番茄红素产量的影响 | 第124-125页 |
| 6.4.7 番茄红素的高密度发酵生产 | 第125-128页 |
| 6.5 本章小结 | 第128-129页 |
| 第七章 结论与展望 | 第129-132页 |
| 7.1 结论 | 第129-130页 |
| 7.2 展望 | 第130-132页 |
| 参考文献 | 第132-145页 |
| 作者简历 | 第145页 |
