论文目录 | |
| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 缩略词表 | 第13-14页 |
| 1 文献综述 | 第14-45页 |
| 1.1 禾谷镰刀菌研究现状 | 第15-27页 |
| 1.1.1 禾谷镰刀菌基本生物学性状 | 第15页 |
| 1.1.2 禾谷镰刀菌产毒类型 | 第15-17页 |
| 1.1.3 禾谷镰刀菌遗传多样性研究 | 第17-18页 |
| 1.1.4 禾谷镰刀菌致病性研究 | 第18-22页 |
| 1.1.4.1 致病机理及致病相关基因 | 第18-21页 |
| 1.1.4.2 致病力鉴定方法 | 第21-22页 |
| 1.1.5 禾谷镰刀菌基因组学研究 | 第22-24页 |
| 1.1.6 小麦赤霉病防治研究 | 第24-27页 |
| 1.1.6.1 小麦赤霉病化学防治 | 第25页 |
| 1.1.6.2 小麦赤霉病生物防治 | 第25-26页 |
| 1.1.6.3 小麦赤霉病农业防治 | 第26页 |
| 1.1.6.4 小麦抗赤霉病基因工程 | 第26-27页 |
| 1.2 几丁质合成酶及其基因研究进展 | 第27-35页 |
| 1.2.1 真菌细胞壁的结构 | 第27-28页 |
| 1.2.2 真菌几丁质合成酶及其基因研究 | 第28-31页 |
| 1.2.3 几丁质合成酶的分类 | 第31-32页 |
| 1.2.4 几丁质的生物合成及调控 | 第32-33页 |
| 1.2.5 几丁质合成酶的个体发生与进化 | 第33-34页 |
| 1.2.6 几丁质合成酶作为杀菌剂和抗真菌药物靶标 | 第34-35页 |
| 1.3 根癌农杆菌介导真菌遗传转化研究进展 | 第35-45页 |
| 1.3.1 真菌遗传转化方法的研究进展 | 第35-36页 |
| 1.3.2 根癌农杆菌介导转化(ATMT)真菌的分子基础及原理 | 第36-38页 |
| 1.3.2.1 根癌农杆菌Ti质粒分类及Ti质粒基因组结构分析 | 第36-37页 |
| 1.3.2.2 根癌农杆菌介导转化的过程 | 第37-38页 |
| 1.3.3 影响ATMT转化因素的分析 | 第38-40页 |
| 1.3.3.1 转化受体 | 第38页 |
| 1.3.3.2 真菌菌株 | 第38页 |
| 1.3.3.3 农杆菌菌株 | 第38-39页 |
| 1.3.3.4 AS浓度 | 第39页 |
| 1.3.3.5 共培养条件 | 第39-40页 |
| 1.3.4 根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化所用的筛选标记基因 | 第40-41页 |
| 1.3.5 根癌农杆菌介导丝状真菌遗传转化的特点 | 第41页 |
| 1.3.6 根癌农杆菌介导成功进行遗传转化的真菌种类 | 第41页 |
| 1.3.7 ATMT在真菌遗传转化中的发展历程 | 第41-42页 |
| 1.3.8 ATMT在真菌功能基因组学中的应用 | 第42-43页 |
| 1.3.8.1 建立T-DNA插入突变体库 | 第42页 |
| 1.3.8.2 目的基因敲除及功能分析 | 第42-43页 |
| 1.3.9 根癌农杆菌介导转化技术在禾谷镰刀菌遗传转化中的应用 | 第43页 |
| 1.3.10 根癌农杆菌介导转化真菌的展望 | 第43-45页 |
| 2 研究目的和意义 | 第45-46页 |
| 3 材料和方法 | 第46-71页 |
| 3.1 实验材料 | 第46-56页 |
| 3.1.1 真菌菌株 | 第46页 |
| 3.1.2 小麦材料 | 第46页 |
| 3.1.3 细菌菌株及质粒 | 第46页 |
| 3.1.4 试剂及培养基 | 第46-53页 |
| 3.1.4.1 试剂配制 | 第46-52页 |
| 3.1.4.2 培养基配制 | 第52-53页 |
| 3.1.5 主要仪器设备 | 第53-54页 |
| 3.1.6 引物 | 第54-56页 |
| 3.2 实验方法 | 第56-71页 |
| 3.2.1 质粒DNA提取 | 第56页 |
| 3.2.2 感受态细胞制备 | 第56-58页 |
| 3.2.2.1 大肠杆菌热激感受态细胞制备 | 第56-57页 |
| 3.2.2.2 大肠杆菌电击转化感受态细胞制备 | 第57页 |
| 3.2.2.3 根癌农杆菌电击转化感受态细胞制备 | 第57页 |
| 3.2.2.4 DNA热激转化感受态细胞 | 第57-58页 |
| 3.2.2.5 DNA电击转化感受态细胞 | 第58页 |
| 3.2.3 真菌活化培养及保存 | 第58页 |
| 3.2.4 真菌产孢培养 | 第58页 |
| 3.2.5 载体构建 | 第58-59页 |
| 3.2.5.1 基因敲除载体构建 | 第58页 |
| 3.2.5.2 基因回复突变载体构建 | 第58-59页 |
| 3.2.6 根癌农杆菌介导真菌遗传转化 | 第59-60页 |
| 3.2.7 真菌基因组DNA提取 | 第60-61页 |
| 3.2.8 真菌菌丝总RNA提取及cDNA的获得 | 第61-62页 |
| 3.2.9 Southern杂交分析 | 第62-64页 |
| 3.2.10 PCR分析 | 第64-65页 |
| 3.2.11 几丁质合成酶活性测定 | 第65-67页 |
| 3.2.11.1 真菌细胞膜粗蛋白提取 | 第65-66页 |
| 3.2.11.2 膜蛋白粗提物的SDS-PAGE检测 | 第66页 |
| 3.2.11.3 几丁质合成酶活性测定 | 第66-67页 |
| 3.2.12 几丁质含量测定 | 第67页 |
| 3.2.13 产孢能力及分生孢子形态分析 | 第67-68页 |
| 3.2.14 生物量测定分析 | 第68页 |
| 3.2.15 渗透压敏感性实验 | 第68页 |
| 3.2.16 致病力接种鉴定 | 第68-69页 |
| 3.2.16.1 田间花期单花接种 | 第68-69页 |
| 3.2.16.2 室内苗期接种 | 第69页 |
| 3.2.17 子囊壳诱导 | 第69页 |
| 3.2.18 细胞核荧光染色观察 | 第69-70页 |
| 3.2.19 菌丝DIC观察 | 第70页 |
| 3.2.20 细胞壁结构透射电镜观察分析 | 第70页 |
| 3.2.21 几丁质合成酶单基因缺失突变体及其与小麦互作的代谢组学分析 | 第70页 |
| 3.2.22 数据分析 | 第70-71页 |
| 4 结果与分析 | 第71-119页 |
| 4.1 禾谷镰刀菌基因组中的几丁质合成酶基因 | 第71-73页 |
| 4.1.1 禾谷镰刀菌几丁质合成酶基因数量及类型分析 | 第71页 |
| 4.1.2 禾谷镰刀菌几丁质合成酶基因的基因组定位 | 第71-73页 |
| 4.2 载体构建 | 第73-78页 |
| 4.2.1 基因敲除载体构建 | 第73-76页 |
| 4.2.2 基因回复突变载体构建 | 第76-78页 |
| 4.3 根癌农杆菌介导转化失活及回复几丁质合成酶基因 | 第78-81页 |
| 4.3.1 根癌农杆菌介导转化失活几丁质合成酶基因 | 第78-79页 |
| 4.3.2 根癌农杆菌介导的几丁质合成酶基因功能回复 | 第79-80页 |
| 4.3.3 根癌农杆菌介导转化失活PLSl基因 | 第80-81页 |
| 4.4 几丁质合成酶基因失活及回复突变体菌株的PCR鉴定 | 第81-87页 |
| 4.4.1 Δchs1突变体菌株的PCR鉴定 | 第81页 |
| 4.4.2 CHS1C突变体菌株的PCR鉴定 | 第81-83页 |
| 4.4.3 Δchs2突变体菌株的PCR鉴定 | 第83页 |
| 4.4.4 CHS2C突变体菌株的PCR鉴定 | 第83页 |
| 4.4.5 Δchs3a突变体菌株的PCR鉴定 | 第83-85页 |
| 4.4.6 Δchs4突变体菌株的PCR鉴定 | 第85页 |
| 4.4.7 Δchs5突变体菌株的PCR鉴定 | 第85-86页 |
| 4.4.8 CHS5C突变体菌株的PCR鉴定 | 第86页 |
| 4.4.9 Δchs6突变体菌株的PCR鉴定 | 第86页 |
| 4.4.10 Δpls1突变体菌株的PCR鉴定 | 第86-87页 |
| 4.5 几丁质合成酶基因失活及回复突变体菌株的Southern鉴定 | 第87-93页 |
| 4.5.1 Δchs1突变体及CHS1C回复突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第87-88页 |
| 4.5.2 Δchs2突变体及CHS2C回复突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第88-89页 |
| 4.5.3 Δchs3a突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第89页 |
| 4.5.4 Δchs4突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第89-90页 |
| 4.5.5 Δchs5突变体及CHS5C回复突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第90-91页 |
| 4.5.6 Achs6突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第91-92页 |
| 4.5.7 Δpls1突变体菌株的Southern杂交鉴定 | 第92-93页 |
| 4.6 几丁质合成酶基因失活及回复突变体菌株的RT-PCR分析 | 第93-97页 |
| 4.6.1 Δchs1突变体及CHS1C回复突变体菌株的RT-PCR分析 | 第93页 |
| 4.6.2 Δchs2突变体及CHS2C回复突变体菌株的RT-PCR分析 | 第93-94页 |
| 4.6.3 Δchs3a突变体菌株的RT-PCR分析 | 第94页 |
| 4.6.4 Δchs4突变体菌株的RT-PCR分析 | 第94-95页 |
| 4.6.5 Δchs5突变体及CHS5C回复突变体菌株的RT-PCR分析 | 第95-96页 |
| 4.6.6 Δchs6突变体菌株的RT-PCR分析 | 第96页 |
| 4.6.7 Δpls1突变体菌株的RT-PCR分析 | 第96-97页 |
| 4.7 几丁质合成酶活性测定 | 第97-99页 |
| 4.7.1 真菌细胞膜粗蛋白提取及SDS-PAGE检测 | 第97-98页 |
| 4.7.2 几丁质合成酶活性测定 | 第98-99页 |
| 4.8 几丁质含量测定 | 第99-100页 |
| 4.9 产孢能力及分生孢子形态分析 | 第100-103页 |
| 4.10 生物量分析 | 第103-104页 |
| 4.11 渗透压敏感性分析 | 第104-110页 |
| 4.12 细胞核荧光染色及菌DIC观察 | 第110-112页 |
| 4.13 细胞壁结构的透射电镜观察 | 第112-115页 |
| 4.14 致病力鉴定 | 第115-119页 |
| 4.14.1 田间花期单花接种 | 第115页 |
| 4.14.2 室内苗期接种 | 第115-119页 |
| 5 讨论 | 第119-125页 |
| 6 参考文献 | 第125-148页 |
| 致谢 | 第148-149页 |
| 附录 | 第149-148页 |
