论文目录 | |
| 摘要 | 第1-12页 |
| Abstract | 第12-18页 |
| 第1章 文献综述 | 第18-36页 |
| 1.1 甘蓝S -位点受体激酶互作相关蛋白研究进展 | 第18-24页 |
| 1.1.1 S -位点糖蛋白 | 第18-19页 |
| 1.1.2 S -位点受体激酶 | 第19-20页 |
| 1.1.3 S -位点富含半胱氨酸蛋白 | 第20页 |
| 1.1.4 类硫氧还蛋白 1/2 | 第20-21页 |
| 1.1.5 M位点蛋白激酶 | 第21-22页 |
| 1.1.6 臂重复蛋白 1 | 第22-23页 |
| 1.1.7 Exo70A1蛋白 | 第23-24页 |
| 1.2 甘蓝自交不亲和的信号传导网络 | 第24-25页 |
| 1.3 蛋白质相互作用研究方法 | 第25-30页 |
| 1.3.1 酵母双杂交技术 | 第25-26页 |
| 1.3.2 GST-pull down技术 | 第26-28页 |
| 1.3.3 免疫共沉淀技术 | 第28页 |
| 1.3.4 双分子荧光互补技术 | 第28-29页 |
| 1.3.5 串联亲和纯化技术 | 第29页 |
| 1.3.6 其他方法 | 第29-30页 |
| 1.4 植物基因功能研究的基本策略 | 第30-36页 |
| 1.4.1 基因超表达技术 | 第30页 |
| 1.4.2 基因敲除技术 | 第30-36页 |
| 第2章 引言 | 第36-40页 |
| 2.1 研究目的与意义 | 第36-37页 |
| 2.2 研究内容 | 第37-39页 |
| 2.3 技术路线 | 第39-40页 |
| 第3章 SRK-ARC1-Exo70A1互作域的确定及作用强度研究 | 第40-64页 |
| 3.1 引言 | 第40页 |
| 3.2 材料 | 第40-42页 |
| 3.2.1 植物材料 | 第40页 |
| 3.2.2 菌株 | 第40页 |
| 3.2.3 试剂 | 第40-42页 |
| 3.3 方法 | 第42-49页 |
| 3.3.1 甘蓝RNA的提取及cDNA的合成 | 第42页 |
| 3.3.2 SRK激酶域、ARC1和Exo70A1的克隆 | 第42-43页 |
| 3.3.3 序列分析和结构预测 | 第43页 |
| 3.3.4 酵母表达载体的构建和酶切检测 | 第43-45页 |
| 3.3.5 酵母AH109感受态的制备和转化 | 第45-46页 |
| 3.3.6 重组质粒的毒性和自激活检测 | 第46页 |
| 3.3.7 蛋白相互作用的酵母双杂交检测 | 第46页 |
| 3.3.8 β–半乳糖苷酶活性测定 | 第46-47页 |
| 3.3.9 SRK-ARC1和ARC1-Exo70A1核心互作区段的体外验证 | 第47-49页 |
| 3.4 结果和分析 | 第49-60页 |
| 3.4.1 SRK激酶域、ARC1和Exo70A1的生物信息学分析 | 第49-53页 |
| 3.4.2 SRK激酶域、ARC1和Exo70A1短截体的构建 | 第53-55页 |
| 3.4.3 酵母重组质粒构建与鉴定 | 第55页 |
| 3.4.4 重组质粒的毒性和自激活检测 | 第55-57页 |
| 3.4.5 SRK-ARC1-Exo70A1不同功能域之间相互作用检测 | 第57-58页 |
| 3.4.6 甘蓝SRKj-ARC1与ARC1-Exo70A1互作结构域的确定 | 第58-59页 |
| 3.4.7 SRK-ARC1和ARC1-Exo70A1互作区段的体外检测 | 第59-60页 |
| 3.5 讨论 | 第60-62页 |
| 3.6 小结 | 第62-64页 |
| 第4章 基于转录组测序S -位点受体激酶新的互作蛋白BoPUB的鉴定 | 第64-80页 |
| 4.1 引言 | 第64页 |
| 4.2 材料和方法 | 第64-67页 |
| 4.2.1 材料 | 第64-65页 |
| 4.2.2 总RNA的提取和转录组测序分析 | 第65页 |
| 4.2.3 BoPUB基因的克隆和生物信息学分析 | 第65-66页 |
| 4.2.4 酵母双杂交载体的构建 | 第66页 |
| 4.2.5 甘蓝SRK激酶域与BoPUB蛋白系列相互作用的酵母双杂交检测 | 第66页 |
| 4.2.6 SRK与BoPUB蛋白的体外相互作用检测 | 第66-67页 |
| 4.2.7 与SRK互作的BoPUB蛋白的组织表达特性分析 | 第67页 |
| 4.2.8 与SRK互作的BoPUB蛋白的时空表达特性分析 | 第67页 |
| 4.3 结果和分析 | 第67-77页 |
| 4.3.1 甘蓝柱头转录组数据分析和BoPUB蛋白筛选 | 第67-68页 |
| 4.3.2 BoPUB系列基因的克隆和生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 4.3.3 蛋白序列分析 | 第69-70页 |
| 4.3.4 酵母重组质粒的构建与鉴定 | 第70-72页 |
| 4.3.5 甘蓝SRK激酶域与BoPUB蛋白的相互作用检测 | 第72-74页 |
| 4.3.6 BoPUB蛋白与SRK互作的体外验证 | 第74-76页 |
| 4.3.7 与SRK互作的PUB蛋白的表达特性分析 | 第76-77页 |
| 4.4 讨论 | 第77-79页 |
| 4.5 小结 | 第79-80页 |
| 第5章 甘蓝MLPK同源基因MLPKn1的鉴定和表达分析 | 第80-98页 |
| 5.1 引言 | 第80页 |
| 5.2 材料和方法 | 第80-84页 |
| 5.2.1 材料 | 第80-81页 |
| 5.2.2 BoMLPKf1/2 cDNA克隆 | 第81页 |
| 5.2.3 BoMLPKf1/2 和BoMLPKn1 gDNA克隆 | 第81页 |
| 5.2.4 BoMLPKf1/2 和BoMLPKn1的序列分析 | 第81-82页 |
| 5.2.5 BoMLPKf1/2 和BoMLPKn1表达模式分析 | 第82-83页 |
| 5.2.6 BoMLPKf1和BoMLPKn1的亚细胞定位检测 | 第83页 |
| 5.2.7 BoMLPKf1、BoMLPKn1与SRK和ARC1的相互作用检测 | 第83-84页 |
| 5.2.8 MLPK同源基因的进化分析 | 第84页 |
| 5.3 结果 | 第84-96页 |
| 5.3.1 BoMLPKf1/2 和BoMLPKn1鉴定和序列分析 | 第84-87页 |
| 5.3.2 BoMLPKf1/2 和BoMLPKn1的表达特性分析 | 第87-88页 |
| 5.3.3 BoMLPKf1和BoMLPKn1的亚细胞定位检测 | 第88-89页 |
| 5.3.4 BoMLPKf1和BoMLPKn1与SRK和ARC1的相互作用检测 | 第89-90页 |
| 5.3.5 MLPK同源基因的全基因组分析 | 第90-91页 |
| 5.3.6 MLPK和APK1B的进化关系和线性关系分析 | 第91-96页 |
| 5.4 讨论 | 第96-97页 |
| 5.5 小结 | 第97-98页 |
| 第6章 MLPKn1拟南芥同源基因AtAPK1B的功能研究 | 第98-110页 |
| 6.1 引言 | 第98页 |
| 6.2 材料 | 第98-99页 |
| 6.2.1 植物材料 | 第98页 |
| 6.2.2 菌株和载体 | 第98-99页 |
| 6.3 方法 | 第99-103页 |
| 6.3.1 表达载体构建 | 第99-100页 |
| 6.3.2 农杆菌转化 | 第100-101页 |
| 6.3.3 拟南芥转化 | 第101-102页 |
| 6.3.4 转基因植株筛选 | 第102页 |
| 6.3.5 转基因植株基因敲除检测 | 第102-103页 |
| 6.4 结果与分析 | 第103-108页 |
| 6.4.1 载体构建 | 第103页 |
| 6.4.2 转基因拟南芥的筛选 | 第103-104页 |
| 6.4.3 转基因拟南芥gDNA PCR检测 | 第104-106页 |
| 6.4.4 基因敲除突变体的检测 | 第106-108页 |
| 6.4.5 突变体的表型初步观察 | 第108页 |
| 6.5 讨论 | 第108-109页 |
| 6.6 小结 | 第109-110页 |
| 第7章 SRK相关因子在亲和突变材料中编码序列分析及MLPKf2的功能初步研究 | 第110-126页 |
| 7.1 引言 | 第110页 |
| 7.2 材料 | 第110-111页 |
| 7.2.1 植物材料 | 第110-111页 |
| 7.2.2 菌株和载体 | 第111页 |
| 7.2.3 激素、抗生素和培养基体系 | 第111页 |
| 7.3 试验方法 | 第111-115页 |
| 7.3.1 S -位点受体激酶相关因子的克隆 | 第111-112页 |
| 7.3.2 基因序列分析 | 第112页 |
| 7.3.3 MLPKf2超表达载体的构建 | 第112-113页 |
| 7.3.4 重组质粒转化农杆菌 | 第113-114页 |
| 7.3.5“Yellow sarson”材料的遗传转化 | 第114页 |
| 7.3.6 转基因植株分子检测 | 第114-115页 |
| 7.4 结果和分析 | 第115-124页 |
| 7.4.1S -位点受体激酶相关因子编码基因的克隆和序列分析 | 第115-119页 |
| 7.4.2 BoMLPKf2基因超表达载体的构建 | 第119-120页 |
| 7.4.3 白菜型油菜“Yellow sarson”材料的遗传转化 | 第120-122页 |
| 7.4.4 转基因植株gDNA PCR检测 | 第122-123页 |
| 7.4.5 转基因甘蓝的qRT-PCR表达分析 | 第123页 |
| 7.4.6 转基因植株的表型初步观察 | 第123-124页 |
| 7.5 讨论 | 第124-125页 |
| 7.6 小结 | 第125-126页 |
| 第8章 结论与展望 | 第126-130页 |
| 8.1 结论 | 第126-127页 |
| 8.1.1 确定SRK-ARC1-Exo70A1的核心作用结构域 | 第126页 |
| 8.1.2 基于转录组测序筛选出3个与S -位点受体激酶互作的泛素蛋白 | 第126页 |
| 8.1.3 甘蓝MLPK新同源基因MLPKn1的鉴定与表达分析 | 第126-127页 |
| 8.1.4 甘蓝MLPKn1拟南芥同源基因AtAPK1B的功能研究 | 第127页 |
| 8.1.5 S -位点受体激酶相关因子在亲和突变材料中编码序列分析及MLPKf2的功能初步研究 | 第127页 |
| 8.2 创新点 | 第127-128页 |
| 8.3 展望 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-144页 |
| 附录 | 第144-146页 |
| 发表论文及参加课题一览表 | 第146-148页 |
| 致谢 | 第148页 |
