论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-11页 |
| 中文摘要 | 第11-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 1 前言 | 第17-33页 |
| 1.1 乙烯信号转导途径 | 第17-20页 |
| 1.2 植物中MAPK级联途径的研究进展 | 第20-26页 |
| 1.2.1 MAPK级联途径在植物生长发育中的作用 | 第23-24页 |
| 1.2.2 MAPK级联途径在植物免疫和胁迫响应中的作用 | 第24-25页 |
| 1.2.3 植物MAPK级联途径的展望 | 第25-26页 |
| 1.3 WRKY转录因子 | 第26-30页 |
| 1.3.1 WRKY转录因子与植物胁迫响应 | 第29-30页 |
| 1.3.2 WRKY转录因子展望 | 第30页 |
| 1.4 苹果轮纹病 | 第30-31页 |
| 1.5 乙烯与植物抗病 | 第31页 |
| 1.6 研究的目的和意义 | 第31-32页 |
| 1.7 研究的主要内容 | 第32-33页 |
| 2 材料和方法 | 第33-48页 |
| 2.1 试材 | 第33-35页 |
| 2.1.1 材料 | 第33页 |
| 2.1.2 轮纹病菌、腐烂病菌和灰霉病菌 | 第33页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第33页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第33页 |
| 2.1.5 PCR引物及探针 | 第33页 |
| 2.1.6 培养基 | 第33-34页 |
| 2.1.7 抗生素配方 | 第34页 |
| 2.1.8 溶液配置 | 第34-35页 |
| 2.2 试验方法 | 第35-48页 |
| 2.2.1 苹果轮纹病菌、腐烂病菌、灰霉病菌的培养及保存 | 第35-36页 |
| 2.2.2 基因组DNA提取 | 第36页 |
| 2.2.3 RNA提取 | 第36-37页 |
| 2.2.4 cDNA的合成 | 第37页 |
| 2.2.5 qRT-PCR | 第37页 |
| 2.2.6 基因的克隆 | 第37页 |
| 2.2.7 PCR产物的回收 | 第37-38页 |
| 2.2.8 酶切反应和连接反应 | 第38页 |
| 2.2.9 大肠杆菌和农杆菌感受态细胞转化 | 第38页 |
| 2.2.10 质粒小量提取 | 第38-39页 |
| 2.2.11 小提质粒酶切验证 | 第39页 |
| 2.2.12 苹果愈伤细胞的原生质体分离与转化 | 第39页 |
| 2.2.13 Western blot | 第39-40页 |
| 2.2.14 MBP融合蛋白诱导及纯化方法 | 第40-41页 |
| 2.2.15 Pull down | 第41页 |
| 2.2.16 体外磷酸激酶试验 | 第41-42页 |
| 2.2.17 目的基因转化苹果愈伤 | 第42页 |
| 2.2.18 EMSA | 第42-44页 |
| 2.2.19 ChIP试验 | 第44-45页 |
| 2.2.20 重组蛋白抑菌试验 | 第45页 |
| 2.2.21 硝酸银染色 | 第45-46页 |
| 2.2.22 大提质粒 | 第46-47页 |
| 2.2.23 原生质体的启动子转录活性试验 | 第47页 |
| 2.2.24 乙烯处理接种病菌的苹果果实和愈伤细胞的MAPK活性检测试验 | 第47-48页 |
| 3 结果与分析 | 第48-81页 |
| 3.1 乙烯特异性增强对苹果轮纹病的感病性 | 第48-52页 |
| 3.1.1 乙烯促进苹果轮纹病发病 | 第48-50页 |
| 3.1.2 乙烯对苹果腐烂病的作用 | 第50页 |
| 3.1.3 乙烯对于不同病菌侵染的苹果愈伤的作用 | 第50-52页 |
| 3.2 乙烯特异性抑制苹果轮纹病菌诱导的MAPK活性 | 第52-53页 |
| 3.2.1 乙烯抑制苹果轮纹病诱导的苹果果实的MAPK活性 | 第52页 |
| 3.2.2 乙烯抑制苹果轮纹病诱导的苹果愈伤的MAPK活性 | 第52-53页 |
| 3.3 乙烯负调控轮纹病菌诱导的抗病相关基因的表达 | 第53-58页 |
| 3.3.1 乙烯影响轮纹病菌诱导的病程相关蛋白的表达 | 第53-54页 |
| 3.3.2 乙烯对乙烯受体基因和EIN3转录因子的影响 | 第54页 |
| 3.3.3 乙烯对WRKY33转录因子的影响 | 第54页 |
| 3.3.4 乙烯对信号转导途径中ERFs表达的影响 | 第54-55页 |
| 3.3.5 乙烯对MdERF98-7、MdWRKY40、MdPG1的影响 | 第55-58页 |
| 3.4 MdMPK3/6超表达对苹果抗病性的影响 | 第58-60页 |
| 3.4.1 MdMPK3/6超表达愈伤对于3种病菌侵染的响应 | 第58-59页 |
| 3.4.2 MdMPK3/6超表达对轮纹病菌诱导的抗性基因的影响 | 第59-60页 |
| 3.5 乙烯特异性抑制轮纹病菌诱导的MdMPK3/6-MdWRKY33-1的信号途径 | 第60-62页 |
| 3.6 MdWRKY33-1超表达后对基因转录水平的影响 | 第62-70页 |
| 3.6.1 MdWRKY33-1超表达后上调MdACS5A、MdChiB-1的表达 | 第62页 |
| 3.6.2 MdWRKY33-1与MdChiB-1启动子结合 | 第62-70页 |
| 3.7 MdChiB-1的转录活性的调控机制 | 第70-74页 |
| 3.8 乙烯改变苹果轮纹病菌诱导的MdMPK6的蛋白水平修饰 | 第74-78页 |
| 3.9 MdWRKY33-1超表达对苹果轮纹病的抗性无显著影响 | 第78-81页 |
| 4 讨论 | 第81-87页 |
| 4.1 乙烯特异性降低对轮纹病的抗性 | 第81-82页 |
| 4.2 乙烯特异性降低了轮纹病菌诱导的MdMPK3/6-MdWRKY33的免疫途径 | 第82-85页 |
| 4.3 乙烯与MAPK级联途径 | 第85-86页 |
| 4.4 建立苹果材料抗病性的鉴定体系 | 第86-87页 |
| 5 结论 | 第87-88页 |
| 6 创新点 | 第88-89页 |
| 7 参考文献 | 第89-99页 |
| 8 附录 | 第99-104页 |
| 8.1 构建载体所用引物 | 第99-101页 |
| 8.2 qRT-PCR所用引物 | 第101-102页 |
| 8.3 MdWRKY33-1与AtWRKY33蛋白序列比对 | 第102-103页 |
| 8.4 MdMPK6与AtMPK6蛋白序列比对 | 第103-104页 |
| 9 致谢 | 第104-105页 |
| 10 攻读学位期间发表论文情况 | 第105页 |
