论文目录 | |
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-16页 |
| 第一章 miRNAs与羊乳脂质代谢的研究进展 | 第16-23页 |
| 1.1 羊奶营养价值 | 第16-17页 |
| 1.2 MiRNA研究概况 | 第17-20页 |
| 1.2.1 MiRNA生成过程 | 第17-18页 |
| 1.2.2 MiRNA的作用方式 | 第18页 |
| 1.2.3 MiRNA调控机制 | 第18-20页 |
| 1.3 MiRNA的调控功能研究 | 第20-22页 |
| 1.3.1 MiRNA在动物脂肪组织中的研究 | 第20页 |
| 1.3.2 MiRNA在动物乳腺组织中的研究 | 第20-21页 |
| 1.3.3 MiRNA协同调控 | 第21-22页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二章 奶山羊乳腺组织mi RNA表达谱分析及乳脂代谢关键miRNA筛选 | 第23-37页 |
| 2.1 材料与方法 | 第23-25页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.2 试验主要试剂配制及方法 | 第24页 |
| 2.1.3 试验动物 | 第24-25页 |
| 2.2 试验方法 | 第25-30页 |
| 2.2.1 试验准备 | 第25页 |
| 2.2.2 细胞培养及处理 | 第25页 |
| 2.2.3 总 RNA 的提取 | 第25页 |
| 2.2.4 总RNA质量鉴定 | 第25-26页 |
| 2.2.5 乳腺组织mi RNA检测 | 第26-27页 |
| 2.2.6 MiRNA引物分组 | 第27页 |
| 2.2.7 数据统计分析 | 第27页 |
| 2.2.8 TAG含量检测 | 第27页 |
| 2.2.9 qRT-PCR试验 | 第27-28页 |
| 2.2.10 蛋白提取 | 第28页 |
| 2.2.11 BCA检测蛋白质浓度 | 第28页 |
| 2.2.12 蛋白变性 | 第28页 |
| 2.2.13 SDS-PAGE试验 | 第28-29页 |
| 2.2.14 转膜、封闭 | 第29-30页 |
| 2.2.15 WB图像分析及数据采集 | 第30页 |
| 2.2.16 油红O染色 | 第30页 |
| 2.2.17 统计分析 | 第30页 |
| 2.2.18 MiRNA靶基因的预测及功能注释分析 | 第30页 |
| 2.3 结果与分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 乳腺组织不同时期表达差异的miRNA筛选 | 第30-31页 |
| 2.3.2 最佳催乳素浓度的筛选 | 第31-32页 |
| 2.3.3 2.5μg/ml催乳素处理浓度miRNA筛选 | 第32-33页 |
| 2.3.4 MiRNA下游靶基因预测 | 第33-35页 |
| 2.4 讨论 | 第35-36页 |
| 2.5 小结 | 第36-37页 |
| 第三章 MiR-181b通过IRS2抑制TAG合成并调控Hippo信号通路基因 | 第37-49页 |
| 3.1 材料与方法 | 第37-41页 |
| 3.1.1 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第37-38页 |
| 3.1.2 质粒转化 | 第38页 |
| 3.1.3 普通质粒挑选、扩增及纯化提取过程 | 第38页 |
| 3.1.4 质粒回收体系 | 第38页 |
| 3.1.5 SiRNA和miRNA的mimic, inhibitor稀释及转染 | 第38-39页 |
| 3.1.6 靶基因预测 | 第39页 |
| 3.1.7 荧光素酶活性检测 | 第39-40页 |
| 3.1.8 3’UTR荧光素酶报告载体活性检测试验 | 第40页 |
| 3.1.9 应用S-Poly(T)检测miR-181b表达 | 第40-41页 |
| 3.1.10 TAG含量检测 | 第41页 |
| 3.1.11 胆固醇含量检测 | 第41页 |
| 3.2 结果与分析 | 第41-47页 |
| 3.2.1MiRNA和siRNA的转染效率 | 第41-42页 |
| 3.2.2 乳腺上皮细胞中miR-181b特异性靶向IRS2 | 第42-43页 |
| 3.2.3 MiR-181b和IRS2在GMECs上的功能 | 第43-45页 |
| 3.2.4 在GMECs中IRS2刺激下TAG水平提高及脂滴累积增加 | 第45-46页 |
| 3.2.5 SiRNA- IRS2可以部分补救miR-181b对TAG的影响 | 第46-47页 |
| 3.2.6 MiR-181b调控Hippo信号通路中的多个元件 | 第47页 |
| 3.3 讨论 | 第47-48页 |
| 3.3.1 MiR-181b靶向IRS2 | 第47页 |
| 3.3.2 MiR-181b调控Hippo信号通路中多个元件 | 第47-48页 |
| 3.4 小结 | 第48-49页 |
| 第四章 MiR-30e-5p和miR-15a通过靶向LRP6和YAP1基因协同调控乳脂代谢 | 第49-62页 |
| 4.1 材料与方法 | 第49-51页 |
| 4.1.1 SiRNA和miRNA mimic，inhibitor稀释及转染 | 第49-50页 |
| 4.1.2 靶基因预测 | 第50页 |
| 4.1.3 荧光素酶活性检测 | 第50页 |
| 4.1.4 3’-UTR荧光素酶报告载体活性检测试验 | 第50页 |
| 4.1.5 应用S-Poly(T)检测miR-30e-5p和miR-15a表达 | 第50页 |
| 4.1.6 TAG含量检测 | 第50页 |
| 4.1.7 胆固醇含量检测 | 第50-51页 |
| 4.2 结果与分析 | 第51-60页 |
| 4.2.1 MiRNA和siRNA的转染效率 | 第51-52页 |
| 4.2.2 在乳腺上皮细胞中miR-30e-5p和miR-15a各自特异性分别靶向LPR6和YAP1 | 第52-54页 |
| 4.2.3 SiRNA-LRP6和siRNA-YAP1可以各自部分抑制miR-30e-5p and miR-15a对TAG的影响 | 第54页 |
| 4.2.4 在乳腺上皮细胞中miR-30e-5p与 β-catenin的关系 | 第54页 |
| 4.2.5 MiR-30e-5p与mi R-15a协同抑制YAP1 | 第54-55页 |
| 4.2.6 MiR-30e-5p，mi R-15a，LRP6和YAP1在GMECs上的功能 | 第55-60页 |
| 4.3 讨论 | 第60-61页 |
| 4.3.1 MiR-30e-5p和miR-15a分别靶向LRP6和YAP1基因 | 第60页 |
| 4.3.2 MiR-30e-5p，β-catenin和YAP1之间的关系 | 第60-61页 |
| 4.3.3 MiR-30e-5p与mi R-15a协同调控YAP1 | 第61页 |
| 4.4 小结 | 第61-62页 |
| 第五章 PRL通过甲基化修饰抑制miR-135b调控表达 | 第62-75页 |
| 5.1 材料与方法 | 第62-64页 |
| 5.1.1 SiRNA和miRNA的mimic，inhibitor稀释及转染 | 第62-63页 |
| 5.1.2 靶基因预测 | 第63页 |
| 5.1.3 荧光素酶活性检测 | 第63页 |
| 5.1.4 3’-UTR荧光素酶报告载体活性检测试验 | 第63页 |
| 5.1.5 应用S-Poly(T)检测miR-135b表达 | 第63页 |
| 5.1.6 免疫荧光试验 | 第63页 |
| 5.1.7 小鼠泌乳模型构建及miR-135b的处理 | 第63-64页 |
| 5.1.8 TAG含量检测 | 第64页 |
| 5.1.9 胆固醇含量检测 | 第64页 |
| 5.2 结果与分析 | 第64-72页 |
| 5.2.1 MiRNA和siRNA的转染效率 | 第64-65页 |
| 5.2.2 mi R-135b在GMECs上的功能验证 | 第65-68页 |
| 5.2.3 mi R-135b在体内（in vivo）的功能 | 第68页 |
| 5.2.4 LATS2在GMECs上的功能 | 第68-69页 |
| 5.2.5 在乳腺上皮细胞中miR-135b特异性靶向LATS2 | 第69-71页 |
| 5.2.6 SiRNA- LATS2可以部分补救miR-135b对TAG的影响 | 第71页 |
| 5.2.7 PRL调控miR-135b表达的细胞水平的分子机制 | 第71-72页 |
| 5.3 讨论 | 第72-73页 |
| 5.4 小结 | 第73-75页 |
| 第六章 MiR-148a和miR175p通过PPARGC1A和PPARA基因协同调控乳腺上皮细胞乳脂代谢 | 第75-89页 |
| 6.1 材料和方法 | 第75-77页 |
| 6.1.1 MRNA数据 | 第75页 |
| 6.1.2 MRNA和mi RNA联合分析 | 第75页 |
| 6.1.3 联合分析和miRNA靶基因预测 | 第75-76页 |
| 6.1.4 SiRNA和miRNA的mimic，inhibitor稀释及转染 | 第76页 |
| 6.1.5 荧光素酶活性检测 | 第76页 |
| 6.1.6 3’-UTR荧光素酶报告载体活性检测试验 | 第76-77页 |
| 6.1.7 应用S-Poly(T)检测miR-148a和miR175p表达 | 第77页 |
| 6.1.8 TAG含量检测 | 第77页 |
| 6.1.9 胆固醇含量检测 | 第77页 |
| 6.2 结果与分析 | 第77-87页 |
| 6.2.1 MiRNA和mRNA之间的相互作用 | 第77-78页 |
| 6.2.2 MiRNA和siRNA的转染效率 | 第78-79页 |
| 6.2.3 在乳腺上皮细胞中miR-148a和miR175p各 自分别特异性靶向PPARGC1A和PPARA | 第79-81页 |
| 6.2.4 MiR-148a和mi R175p在乳腺上皮细胞中协同调控TAG合成 | 第81-82页 |
| 6.2.5 MiR-148a，mi R175p，PPARGC1A和PPARA在GMECs上的功能 | 第82-87页 |
| 6.2.6 SiRNA-PPARGC1A和siRNA-PPARA可以各自部分补救miR-148a和mi R175p对TAG的影响 | 第87页 |
| 6.3 讨论 | 第87-88页 |
| 6.4 小结 | 第88-89页 |
| 结论 | 第89-90页 |
| 创新点 | 第90-91页 |
| 存在的问题及展望 | 第91-92页 |
| 参考文献 | 第92-102页 |
| 附录 | 第102-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
