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中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24功能研究

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中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24功能研究
论文目录
 
摘要第1-8页
Abstract第8-15页
第一章 文献综述第15-25页
  1.1 葡萄白粉病研究进展第15-17页
  1.2 泛素/26S蛋白酶体系统第17-20页
    1.2.1 HECT类型的E3第17-18页
    1.2.2 RING类型的E3第18页
    1.2.3 U-box类型的E3第18页
    1.2.4 CRLs类型的E3第18-19页
    1.2.5 其他类型的E3s第19页
    1.2.6 E4酶第19-20页
  1.3 泛素连接酶与生物胁迫反应第20-22页
    1.3.1 泛素连接酶与PTI反应第20-21页
    1.3.2 泛素连接酶与ETI反应第21-22页
  1.4 泛素连接酶与非生物胁迫反应第22-23页
  1.5 泛素连接酶与植物生长发育第23-24页
  1.6 本研究的目的与意义第24-25页
第二章 中国野生华东葡萄泛素连接酶VpPUB24基因克隆及序列分析第25-40页
  2.1 材料第25页
    2.1.1 葡萄材料第25页
    2.1.2 主要试剂第25页
  2.2 方法第25-30页
    2.2.1 葡萄U-box类型泛素连接酶聚类分析第25页
    2.2.2 材料处理第25-26页
    2.2.3 葡萄叶片RNA提取及反转录第26页
    2.2.4 引物第26-29页
    2.2.5 实时荧光定量PCR及PCR反应第29-30页
    2.2.6 常用培养基配制第30页
  2.3 结果与分析第30-38页
    2.3.1 中国野生华东葡萄白河351 U-box类型E3基因响应白粉菌分析第30-33页
    2.3.2 中国野生华东葡萄白河351 泛素连接酶VpPUB24基因克隆第33页
    2.3.3 中国野生华东葡萄白河351 泛素连接酶基因VpPUB24序列分析第33-36页
    2.3.4 不同葡萄中PUB24基因克隆与序列比对分析第36-38页
  2.4 讨论第38-40页
第三章 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子克隆及功能分析第40-48页
  3.1 试验材料第40页
    3.1.1 葡萄材料第40页
    3.1.2 质粒载体与菌株第40页
    3.1.3 主要试剂与试剂盒第40页
  3.2 方法第40-41页
    3.2.1 启动子序列分析第40页
    3.2.3 启动子克隆第40-41页
    3.2.4 引物第41页
    3.2.5 启动子GUS融合表达载体构建第41页
    3.2.6 启动子GUS活性定量分析第41页
  3.3 结果与分析第41-46页
    3.3.1 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子的克隆第41-42页
    3.3.2 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24启动子瞬时表达载体构建第42-43页
    3.3.3 VpPUB24基因启动子受不同生物胁迫和非生物胁迫诱导表达第43-44页
    3.3.4 不同葡萄PUB24基因启动子序列克隆第44页
    3.3.5 不同葡萄PUB24启动子序列分析第44-45页
    3.3.6 不同葡萄PUB24启动子受白粉菌和SA诱导表达分析第45-46页
  3.4 讨论第46-48页
第四章 酵母双杂交筛选VpPUB24互作蛋白第48-59页
  4.1 材料第48页
    4.1.1 质粒载体第48页
    4.1.2 菌株第48页
    4.1.3 试剂第48页
    4.1.4 培养基及缓冲液配制第48页
  4.2 方法第48-51页
    4.2.1 中国野生华东葡萄白河351 白粉菌诱导的cDNA文库构建第48-49页
    4.2.2 诱饵质粒载体的构建第49页
    4.2.3 重组诱饵质粒转化酵母菌第49页
    4.2.4 酵母诱饵载体自激活验证第49页
    4.2.5 酵母双杂交筛选互作蛋白第49页
    4.2.6 酵母质粒提取第49页
    4.2.7 酵母插入片段的鉴定第49-50页
    4.2.8 酵母双杂交互作蛋白回复验证第50页
    4.2.9 引物第50-51页
  4.3 结果第51-56页
    4.3.1 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24诱饵载体构建与转化第51-52页
    4.3.2 中国野生华东葡萄白河351 白粉菌诱导的cDNA文库构建第52-53页
    4.3.3 酵母双杂交筛选VpPUB24的互作蛋白第53-56页
  4.4 讨论第56-59页
第五章 泛素连接酶VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作功能研究第59-92页
  5.1 材料第59-60页
    5.1.1 植物材料第59页
    5.1.2 质粒载体第59页
    5.1.3 菌株第59页
    5.1.4 试剂第59-60页
    5.1.5 常用溶液配制第60页
  5.2 方法第60-64页
    5.2.1 基因克隆第60页
    5.2.2 基因序列分析第60页
    5.2.3 载体构建第60-61页
    5.2.4 引物第61-62页
    5.2.5 双分子荧光互补试验第62-63页
    5.2.6 免疫共沉淀试验第63页
    5.2.7 Western blot分析第63-64页
    5.2.8 病原菌接种第64页
    5.2.9 实时荧光定量分析第64页
    5.2.10 蛋白降解试验第64页
  5.3 结果第64-86页
    5.3.1 VpEXO70B1基因克隆及序列分析第64-68页
    5.3.2 酵母双杂交验证VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作第68-72页
    5.3.3 BiFC和Co-IP试验验证VpPUB24与VpEXO70B1蛋白互作第72-73页
    5.3.4 泛素连接酶VpPUB24促进VpEXO70B1蛋白降解第73-74页
    5.3.5 VpPUB24与VpEXO70B1的亚细胞定位分析第74-75页
    5.3.6 中国野生华东葡萄泛素连接酶基因VpPUB24在拟南芥过量表达第75-86页
  5.4 讨论第86-92页
第六章 泛素连接酶VpPUB24与VpICE1蛋白互作功能研究第92-124页
  6.1 材料第92页
    6.1.1 植物材料第92页
    6.1.2 质粒载体和菌株第92页
    6.1.3 试剂第92页
  6.2 方法第92-96页
    6.2.1 基因克隆第92页
    6.2.2 基因序列分析第92-93页
    6.2.3 载体构建第93页
    6.2.4 蛋白降解试验第93页
    6.2.5 拟南芥低温处理试验第93-94页
    6.2.6 引物第94-96页
  6.3 结果第96-120页
    6.3.1 中国野生华东葡萄白河351 VpICE1基因克隆与序列分析第96-98页
    6.3.2 泛素连接酶VpPUB24与Vp ICE1蛋白互作第98-105页
    6.3.3 泛素连接酶VpPUB24受低温诱导表达第105-108页
    6.3.4 葡萄ICE1基因受低温诱导表达第108-109页
    6.3.5 中国野生华东葡萄白河351 中ICE家族基因亚细胞定位分析第109-110页
    6.3.6 泛素连接酶VpPUB24促进VpICE1蛋白的积累第110-112页
    6.3.7 泛素连接酶VpHOS1与VpICE1蛋白互作第112-113页
    6.3.8 泛素连接酶VpHOS1促进VpICE1蛋白的降解第113-116页
    6.3.9 泛素连接酶VpHOS1基因受低温诱导表达第116-117页
    6.3.10 拟南芥中过表达VpPUB24提高植株抗寒性第117-119页
    6.3.11 中国野生华东葡萄转录因子VpICE1与VpJAZ1蛋白互作第119-120页
  6.4 讨论第120-124页
第七章 结论和创新点第124-125页
  7.1 结论第124页
  7.2 创新点第124-125页
参考文献第125-135页
附录第135-143页
附表第143-147页
致谢第147-148页
作者简介第148页

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