论文目录 | |
缩写词 | 第1-11
页 |
摘要 | 第11-13
页 |
Abstract | 第13-15
页 |
前言 | 第15-17
页 |
1 文献综述 | 第17-31
页 |
· 拟南芥突变库的构建及功能基因组学 | 第17-20
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· 拟南芥功能基因组学研究概述 | 第17-18
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· 拟南芥突变体库的构建方法 | 第18-20
页 |
· 激发标签技术在功能基因组研究上的应用 | 第20-24
页 |
· 激发标签技术的主要特点 | 第20-21
页 |
· 激发标签技术的作用原理 | 第21
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· 激发标签技术在功能基因组中的应用 | 第21-23
页 |
· 激发标签技术的发展前景 | 第23-24
页 |
· 拟南芥与丁香假单胞杆菌的互作体系及其抗病信号传导 | 第24-27
页 |
· 拟南芥与丁香假单胞杆菌互作体系的建立 | 第24
页 |
· 拟南芥与丁香假单胞杆菌互作体系中的R基因和Avr基因 | 第24-26
页 |
· 拟南芥与丁香假单胞杆菌体系的互作模式 | 第26
页 |
· 拟南芥系统获得性抗性的产生及其信号传导 | 第26-27
页 |
· 渗透胁迫对植物的影响及其与脱落酸的关系 | 第27-31
页 |
· ABA在植物渗透胁迫中的作用 | 第28
页 |
· 渗透胁迫调节ABA的合成与降解 | 第28-29
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· 渗透胁迫与ABA调节植物基因的表达 | 第29-31
页 |
2 拟南芥激发标签突变体库的构建 | 第31-39
页 |
· 材料与方法 | 第31-34
页 |
· 植物材料 | 第31
页 |
· 菌株和质粒 | 第31-32
页 |
· 实验试剂与营养液 | 第32-33
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· 拟南芥的种植 | 第33-34
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· 农杆菌的制备 | 第34
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· 拟南芥的转化 | 第34
页 |
· 拟南芥T1代转化植株的筛选 | 第34
页 |
· 结果与分析 | 第34-35
页 |
· 拟南芥T_1代转化植株的筛选结果 | 第34-35
页 |
· 拟南芥T_1代转化植株的转化率 | 第35
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· T_1代植株中有表型变化的株系 | 第35
页 |
· 讨论 | 第35-39
页 |
3 ASR1的基因克隆、转基因验证及初步的功能分析 | 第39-55
页 |
· 材料与方法 | 第39-45
页 |
· 植物材料 | 第39
页 |
· 菌株和表达载体 | 第39
页 |
· 病原菌菌株 | 第39
页 |
· 试剂和仪器 | 第39-40
页 |
· asr1的Southern blotting杂交实验 | 第40-41
页 |
· 基因组DNA的提取 | 第40
页 |
· BAR基因探针的制备 | 第40
页 |
· 基因组DNA的完全酶切、琼脂糖凝胶电泳及转膜 | 第40-41
页 |
· 探针的同位素标记 | 第41
页 |
· 杂交 | 第41
页 |
· Plasmid Rescue克隆ASR1基因 | 第41-42
页 |
· asr1基因组DNA的酶切 | 第42
页 |
· 酶切产物的自连接 | 第42
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· 感受态大肠杆菌的转化和重组质粒的筛选 | 第42
页 |
· DNA序列的测定及同源性比对 | 第42
页 |
· ASR1的Northern blotting分析 | 第42-43
页 |
· Northern杂交探针的制备 | 第42-43
页 |
· 总RNA的提取、甲醛变性电泳、转膜和Northern杂交 | 第43
页 |
· ASR1的转基因验证 | 第43-44
页 |
· 35S::ASR1 cDNA表达载体的构建 | 第43-44
页 |
· 野生型拟南芥Col-0的转化 | 第44
页 |
· asr1的假单胞杆菌接种实验 | 第44
页 |
· ASR1的IAA诱导表达实验 | 第44-45
页 |
· asr1生长素反应元件表达模式的GUS检测 | 第45
页 |
· 不同光照条件对asr1下胚轴和根发育的影响 | 第45
页 |
· 结果与分析 | 第45-52
页 |
· asr1的遗传分析和表型分析 | 第45-46
页 |
· asr1的Southern杂交实验 | 第46
页 |
· Plasmid Rescue克隆ASR1基因 | 第46-47
页 |
· ASR1基因的Northern blotting分析 | 第47-48
页 |
· ASR1的转基因验证 | 第48-49
页 |
· asr1突变体的假单胞杆菌接种实验 | 第49-50
页 |
· ASR1的IAA诱导表达实验 | 第50
页 |
· asr1生长素反应元件表达模式的GUS检测 | 第50-51
页 |
· 不同光照条件对asr1下胚轴和根发育的影响 | 第51-52
页 |
· 讨论 | 第52-55
页 |
4 ASR1的原核表达、Western杂交以及ASR1:GFP融合蛋白质的亚细胞定位 | 第55-69
页 |
· 材料与方法 | 第55-63
页 |
· 植物材料 | 第55
页 |
· 菌株和质粒 | 第55
页 |
· 试剂和仪器 | 第55-56
页 |
· ASR1原核表达载体的构建 | 第56
页 |
· 在大肠杆菌中诱导ASR1融合蛋白的高效表达 | 第56-57
页 |
· ASR1融合蛋白的大量制备、回收、纯化以及多克隆抗体的制备 | 第57-58
页 |
· ASR1融合蛋白的大量制备 | 第57-58
页 |
· ASR1融合蛋白的回收和纯化 | 第58
页 |
· ASR1融合蛋白多克隆抗体的制备 | 第58
页 |
· ASR1的Western杂交 | 第58-59
页 |
· ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建 | 第59-61
页 |
· ASR1 cDNA的PCR扩增 | 第59
页 |
· ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建策略 | 第59-61
页 |
· GFP对照表达载体的构建 | 第61-62
页 |
· 利用洋葱表皮瞬时表达系统表达ASR1:GFP融合蛋白 | 第62-63
页 |
· 洋葱表皮细胞的准备 | 第62
页 |
· 质粒DNA的纯化和金粉包埋 | 第62
页 |
· 用基因枪法在洋葱表皮细胞中导入外源质粒 | 第62-63
页 |
· ASR1:GFP融合蛋白亚细胞定位的显微镜观察 | 第63
页 |
· 结果与分析 | 第63-68
页 |
· ASR1原核表达载体的构建 | 第63-64
页 |
· ASR1的原核表达 | 第64-65
页 |
· ASR1融合蛋白的大量制备、回收、纯化以及多克隆抗体的制备 | 第65
页 |
· ASR1的Western杂交 | 第65-66
页 |
· ASR1:GFP融合蛋白表达载体的构建及酶切验证 | 第66
页 |
· GFP对照表达载体的构建及酶切验证 | 第66-67
页 |
· ASR1:GFP融合蛋白质的亚细胞定位 | 第67-68
页 |
· 讨论 | 第68-69
页 |
5 激发标签突变体dai1抗逆表型的初步分析以及DAI1候选基因的初步定位 | 第69-79
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· 材料与方法 | 第69-72
页 |
· 植物材料 | 第69
页 |
· dai1抗逆表型的初步分析 | 第69-70
页 |
· dai1的Southern blotting杂交实验 | 第70
页 |
· 通过TAIL-PCR扩增T-DNA插入的基因组旁邻序列 | 第70-72
页 |
· TAIL-PCR的基本原理 | 第70
页 |
· 引物和反应条件 | 第70-72
页 |
· DAI1候选基因的初步定位 | 第72
页 |
· 结果与分析 | 第72-78
页 |
· dai1突变体的获得 | 第72-73
页 |
· dai1突变体抗逆表型的初步分析 | 第73-75
页 |
· 干旱胁迫实验 | 第73
页 |
· 高盐胁迫实验 | 第73
页 |
· ABA反应实验 | 第73-75
页 |
· dai1的Southern杂交实验 | 第75
页 |
· TAIL-PCR扩增dai1的T-DNA旁邻序列 | 第75-77
页 |
· DAI1候选基因的初步定位 | 第77-78
页 |
· 讨论 | 第78-79
页 |
结论 | 第79-81
页 |
参考文献 | 第81-92
页 |