论文目录 | |
致谢 | 第1-7页 |
摘要 | 第7-9页 |
abstract | 第9-14页 |
第一章 文献综述 | 第14-41页 |
1.1 果蝇神经干细胞的发生和发育 | 第15-18页 |
1.1.1 果蝇神经干细胞的发生 | 第15页 |
1.1.2 果蝇神经干细胞的发生和发育 | 第15-18页 |
1.2 果蝇神经干细胞不对称分裂机制 | 第18-35页 |
1.2.1 蛋白复合体在神经干细胞内的极性分布 | 第18-24页 |
1.2.2 神经细胞命运决定因子的定位 | 第24-26页 |
1.2.3 正确的纺锤体方向 | 第26-29页 |
1.2.4 磷酸化与细胞不对称分裂 | 第29-32页 |
1.2.5 细胞周期和不对称分裂 | 第32-33页 |
1.2.6 转录因子时序调控神经干细胞的命运 | 第33-35页 |
1.2.7 不对称分裂的外因 | 第35页 |
1.3 果蝇神经干细胞是用于干细胞研究的特有模型 | 第35-37页 |
1.3.1 肠干细胞 | 第35-36页 |
1.3.2 生殖干细胞 | 第36-37页 |
1.4 果蝇神经干细胞是研究人类疾病的模型 | 第37-39页 |
1.5 未解决的问题 | 第39-40页 |
1.6 研究的目的和意义 | 第40-41页 |
第二章 实验材料和方法 | 第41-60页 |
2.1 分子生物学 | 第41-48页 |
2.1.1 大肠杆菌工程细胞株 | 第41页 |
2.1.2 表达质粒构建 | 第41-43页 |
2.1.3 大肠杆菌转化 | 第43-44页 |
2.1.4 质粒抽提 | 第44页 |
2.1.5 提取果蝇基因组DNA | 第44页 |
2.1.6 PCR鉴定果蝇基因型 | 第44-45页 |
2.1.7 dsRNA合成 | 第45-46页 |
2.1.8 RNA提取 | 第46-47页 |
2.1.9 半定量RT-PCR | 第47页 |
2.1.10 Mira基因定点突变 | 第47-48页 |
2.1.11 测序和序列分析 | 第48页 |
2.2 细胞培养 | 第48-50页 |
2.2.1 果蝇细胞培养 | 第48-49页 |
2.2.2 表达质粒转染S2细胞 | 第49-50页 |
2.2.3 dsRNA转染S2细胞 | 第50页 |
2.3 生化实验 | 第50-57页 |
2.3.1 溶液 | 第50-51页 |
2.3.2 免疫印迹(Western blot) | 第51-52页 |
2.3.3 大肠杆菌表达融合标签蛋白 | 第52-53页 |
2.3.4 体外激酶反应(in vitro kinase assay) | 第53-54页 |
2.3.5 免疫沉淀-质谱(IP-MS) | 第54页 |
2.3.6 免疫共沉淀(Co-IP) | 第54-55页 |
2.3.7 双向电泳免疫印迹(2D Western blot) | 第55页 |
2.3.8 免疫荧光染色(Immunofluorescence) | 第55-57页 |
2.3.9 使用的抗体 | 第57页 |
2.4 果蝇株系 | 第57-60页 |
2.4.1 果蝇培养 | 第57-58页 |
2.4.2 MARCM克隆 | 第58-59页 |
2.4.3 实时激光共聚焦显微镜(Time-lapes Confocal)观察 | 第59-60页 |
第三章 结果 | 第60-84页 |
3.1 Mira在果蝇幼虫大脑神经干细胞中的动态定位 | 第60-62页 |
3.2 激酶dWeel调控Mira在神经干细胞分裂早期的定位 | 第62-70页 |
3.2.1 dWeel激酶能结合Mira蛋白 | 第62-63页 |
3.2.2 dweel突变体中Mira在神经干细胞分裂早期的细胞定位异常 | 第63-66页 |
3.2.3 dWeel磷酸化Mira | 第66-67页 |
3.2.4 Mira Y487的磷酸化修饰能影响Mira在细胞中的定位 | 第67-70页 |
3.3 Phosphorysoyl Phosphatase Activator(PTPA)调控Mira在神经干细胞中的定位 | 第70-84页 |
3.3.1 Mira在ptpa突变体的神经干细胞中定位异常 | 第70-72页 |
3.3.2 PTPA能调控Mira的翻译后磷酸化修饰 | 第72-75页 |
3.3.3 Mira T591的磷酸化状态影响了Mira在神经干细胞中的定位 | 第75-77页 |
3.3.4 PTPA和PP4共同调控Mira在神经干细胞中的定位 | 第77-80页 |
3.3.5 strd突变体增强了ptpa突变体中Mira异常定位的表型 | 第80-84页 |
第四章 讨论 | 第84-94页 |
4.1 Mira在神经干细胞分裂周期的动态定位 | 第84-86页 |
4.2 dWeel磷酸化Mira Y487调控Mira在进入细胞分裂期时的细胞定位 | 第86-88页 |
4.3 PTPA介导去磷酸化T591促使Mira在神经干细胞分裂早期位移到细胞皮层 | 第88-89页 |
4.4 PTPA和PP4协同调控Mira在神经干细胞内的位移 | 第89-91页 |
4.5 Mira的逐步磷酸化修饰时序调控其在神经干细胞中的动态位移 | 第91-93页 |
4.6 论文的创新点 | 第93-94页 |
参考文献 | 第94-102页 |
附录 | 第102-104页 |
简历 | 第104-105页 |