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Miranda磷酸化调控果蝇神经干细胞不对称分裂的机制

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Miranda磷酸化调控果蝇神经干细胞不对称分裂的机制
论文目录
 
致谢第1-7页
摘要第7-9页
abstract第9-14页
第一章 文献综述第14-41页
  1.1 果蝇神经干细胞的发生和发育第15-18页
    1.1.1 果蝇神经干细胞的发生第15页
    1.1.2 果蝇神经干细胞的发生和发育第15-18页
  1.2 果蝇神经干细胞不对称分裂机制第18-35页
    1.2.1 蛋白复合体在神经干细胞内的极性分布第18-24页
    1.2.2 神经细胞命运决定因子的定位第24-26页
    1.2.3 正确的纺锤体方向第26-29页
    1.2.4 磷酸化与细胞不对称分裂第29-32页
    1.2.5 细胞周期和不对称分裂第32-33页
    1.2.6 转录因子时序调控神经干细胞的命运第33-35页
    1.2.7 不对称分裂的外因第35页
  1.3 果蝇神经干细胞是用于干细胞研究的特有模型第35-37页
    1.3.1 肠干细胞第35-36页
    1.3.2 生殖干细胞第36-37页
  1.4 果蝇神经干细胞是研究人类疾病的模型第37-39页
  1.5 未解决的问题第39-40页
  1.6 研究的目的和意义第40-41页
第二章 实验材料和方法第41-60页
  2.1 分子生物学第41-48页
    2.1.1 大肠杆菌工程细胞株第41页
    2.1.2 表达质粒构建第41-43页
    2.1.3 大肠杆菌转化第43-44页
    2.1.4 质粒抽提第44页
    2.1.5 提取果蝇基因组DNA第44页
    2.1.6 PCR鉴定果蝇基因型第44-45页
    2.1.7 dsRNA合成第45-46页
    2.1.8 RNA提取第46-47页
    2.1.9 半定量RT-PCR第47页
    2.1.10 Mira基因定点突变第47-48页
    2.1.11 测序和序列分析第48页
  2.2 细胞培养第48-50页
    2.2.1 果蝇细胞培养第48-49页
    2.2.2 表达质粒转染S2细胞第49-50页
    2.2.3 dsRNA转染S2细胞第50页
  2.3 生化实验第50-57页
    2.3.1 溶液第50-51页
    2.3.2 免疫印迹(Western blot)第51-52页
    2.3.3 大肠杆菌表达融合标签蛋白第52-53页
    2.3.4 体外激酶反应(in vitro kinase assay)第53-54页
    2.3.5 免疫沉淀-质谱(IP-MS)第54页
    2.3.6 免疫共沉淀(Co-IP)第54-55页
    2.3.7 双向电泳免疫印迹(2D Western blot)第55页
    2.3.8 免疫荧光染色(Immunofluorescence)第55-57页
    2.3.9 使用的抗体第57页
  2.4 果蝇株系第57-60页
    2.4.1 果蝇培养第57-58页
    2.4.2 MARCM克隆第58-59页
    2.4.3 实时激光共聚焦显微镜(Time-lapes Confocal)观察第59-60页
第三章 结果第60-84页
  3.1 Mira在果蝇幼虫大脑神经干细胞中的动态定位第60-62页
  3.2 激酶dWeel调控Mira在神经干细胞分裂早期的定位第62-70页
    3.2.1 dWeel激酶能结合Mira蛋白第62-63页
    3.2.2 dweel突变体中Mira在神经干细胞分裂早期的细胞定位异常第63-66页
    3.2.3 dWeel磷酸化Mira第66-67页
    3.2.4 Mira Y487的磷酸化修饰能影响Mira在细胞中的定位第67-70页
  3.3 Phosphorysoyl Phosphatase Activator(PTPA)调控Mira在神经干细胞中的定位第70-84页
    3.3.1 Mira在ptpa突变体的神经干细胞中定位异常第70-72页
    3.3.2 PTPA能调控Mira的翻译后磷酸化修饰第72-75页
    3.3.3 Mira T591的磷酸化状态影响了Mira在神经干细胞中的定位第75-77页
    3.3.4 PTPA和PP4共同调控Mira在神经干细胞中的定位第77-80页
    3.3.5 strd突变体增强了ptpa突变体中Mira异常定位的表型第80-84页
第四章 讨论第84-94页
  4.1 Mira在神经干细胞分裂周期的动态定位第84-86页
  4.2 dWeel磷酸化Mira Y487调控Mira在进入细胞分裂期时的细胞定位第86-88页
  4.3 PTPA介导去磷酸化T591促使Mira在神经干细胞分裂早期位移到细胞皮层第88-89页
  4.4 PTPA和PP4协同调控Mira在神经干细胞内的位移第89-91页
  4.5 Mira的逐步磷酸化修饰时序调控其在神经干细胞中的动态位移第91-93页
  4.6 论文的创新点第93-94页
参考文献第94-102页
附录第102-104页
简历第104-105页

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