论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 综述 | 第12-22页 |
| 1.1 引言 | 第12页 |
| 1.2 链霉菌丁酮内酯系统对次级代谢影响 | 第12-15页 |
| 1.3 链霉菌基因簇的挖掘策略 | 第15-18页 |
| 1.3.1 生物信息学模拟 | 第15-16页 |
| 1.3.2 体外重构酶反应体系 | 第16-17页 |
| 1.3.3 异源表达 | 第17页 |
| 1.3.4 途径特异性基因敲除或者过表达 | 第17-18页 |
| 1.3.5 多效调控基因 | 第18页 |
| 1.3.6 其他因素 | 第18页 |
| 1.4 角蒽酮类化合物 | 第18-21页 |
| 1.4.1 角蒽酮类化合物的生物合成 | 第19-20页 |
| 1.4.2 角蒽酮类化合物作用机制 | 第20-21页 |
| 1.5 本文立项依据 | 第21-22页 |
| 第二章 γ-丁酮内酯合成酶基因scgA敲除株的转录组学分析 | 第22-30页 |
| 2.1 引言 | 第22-23页 |
| 2.2 材料 | 第23页 |
| 2.2.1 菌株 | 第23页 |
| 2.2.2 培养基 | 第23页 |
| 2.3 方法 | 第23-24页 |
| 2.3.1 恰塔努加链霉菌发酵及RNA提取 | 第23页 |
| 2.3.2 芯片杂交 | 第23-24页 |
| 2.3.3 数据处理 | 第24页 |
| 2.4 结果 | 第24-29页 |
| 2.4.1 GBL合成酶基因scgA敲除对基因转录的影响 | 第24-26页 |
| 2.4.2 GBL合成酶基因scgA敲除对葡萄糖代谢的影响 | 第26-27页 |
| 2.4.3 GBL合成酶基因scgA敲除对其他碳源及氮磷代谢的影响 | 第27-28页 |
| 2.4.4 GBL合成酶基因scgA敲除对调控因子的影响 | 第28-29页 |
| 2.5 本章小结与讨论 | 第29-30页 |
| 第三章 γ-丁酮内酯受体同源蛋白SprA作用机制 | 第30-56页 |
| 3.1 引言 | 第30-31页 |
| 3.2 材料 | 第31-32页 |
| 3.2.1 菌株及质粒 | 第31-32页 |
| 3.2.2 培养基 | 第32页 |
| 3.2.3 引物 | 第32页 |
| 3.3 方法 | 第32-40页 |
| 3.3.1 分子克隆基本实验方法 | 第32-33页 |
| 3.3.2 S. chattanoogensis基因组提取 | 第33页 |
| 3.3.3 S. chattanoogensis发酵、生长曲线和纳他霉素测定 | 第33-34页 |
| 3.3.4 S. chattanoogensis ZJUX1(△sprA)构建 | 第34-36页 |
| 3.3.5 S. chattanoogensis ZJUX2(△sprA回补菌株)构建 | 第36页 |
| 3.3.6 SprA和ScgR蛋白纯化 | 第36页 |
| 3.3.7 凝胶迁移阻滞实验(EMSA) | 第36-37页 |
| 3.3.8 DNase I footprinting实验 | 第37-38页 |
| 3.3.9 RNA提取,荧光定量PCR(qRT-PCR)及5'RACE | 第38页 |
| 3.3.10 异源荧光素酶检测报告体系 | 第38-39页 |
| 3.3.11 扫描电镜 | 第39页 |
| 3.3.12 蛋白比对 | 第39-40页 |
| 3.4 结果 | 第40-53页 |
| 3.4.1 恰塔努加链霉菌GBL系统对基因sprA的转录具有正调控作用 | 第40-41页 |
| 3.4.2 SprA蛋白序列分析 | 第41-42页 |
| 3.4.3 SprA敲除菌株的构建与验证 | 第42-43页 |
| 3.4.4 GBL受体同源蛋白SprA对菌体形态分化的影响 | 第43-44页 |
| 3.4.5 GBL受体同源蛋白SprA对纳他霉素产量的影响 | 第44-46页 |
| 3.4.6 SprA具有自我调控作用 | 第46-49页 |
| 3.4.7 SprA对GBL合成酶基因scgA具有负调控作用 | 第49-51页 |
| 3.4.8 SprA和ScgR的相互作用 | 第51-53页 |
| 3.4.9 SprA和ScgR结合保守序列预测 | 第53页 |
| 3.5 本章小结与讨论 | 第53-56页 |
| 第四章 恰塔努加链霉菌恰塔霉素基因簇激活 | 第56-80页 |
| 4.1 引言 | 第56-57页 |
| 4.2 材料 | 第57-58页 |
| 4.2.1 菌株及质粒 | 第57页 |
| 4.2.2 培养基 | 第57页 |
| 4.2.3 引物 | 第57-58页 |
| 4.3 方法 | 第58-60页 |
| 4.3.1 途径特异性调控基因chaI过表达菌株构建 | 第58页 |
| 4.3.2 半定量PCR | 第58页 |
| 4.3.3 发酵及角蒽酮类化合物分离 | 第58-59页 |
| 4.3.4 chattamycin A、chattamycin B结构解析 | 第59页 |
| 4.3.5 chattamycin A、chattamycin B细胞活性实验 | 第59-60页 |
| 4.3.6 chattamycin A、chattamycin B抗菌活性实验 | 第60页 |
| 4.3.7 chattamycin基因簇序列 | 第60页 |
| 4.4 结果 | 第60-76页 |
| 4.4.1 GBL信号系统对恰塔霉素基因簇的调控作用 | 第60-61页 |
| 4.4.2 恰塔霉素基因簇生物信息学分 | 第61-62页 |
| 4.4.3 途径特异性调控蛋白ChaI序列分析 | 第62-64页 |
| 4.4.4 恰塔霉素基因簇激活 | 第64-66页 |
| 4.4.5 恰塔霉素基因簇产物分离、结构鉴定 | 第66-73页 |
| 4.4.6 恰塔霉素抗肿瘤细胞增殖活性和抗微生物活性 | 第73-74页 |
| 4.4.7 丁酮内酯受体对恰塔霉素产量的影响 | 第74-76页 |
| 4.5 本章小结与讨论 | 第76-80页 |
| 第五章 研究成果及展望 | 第80-81页 |
| 5.1 本文研究成果 | 第80页 |
| 5.2 展望 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-85页 |
| 附录 | 第85-106页 |
| 攻读博士期间的主要研究成果 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107页 |
