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Shewanella oneidensis鞭毛系统的二级调控及鞭毛突变株影响菌落形态的分子机制

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Shewanella oneidensis鞭毛系统的二级调控及鞭毛突变株影响菌落形态的分子机制
论文目录
 
致谢第1-10页
摘要第10-12页
Abstract第12-14页
1 绪论第14-30页
  1.1 细菌鞭毛的结构与组装第14-15页
  1.2 细菌鞭毛的调控第15-20页
  1.3 极端鞭毛定位和数量调控的分子机制第20-22页
  1.4 细菌不同菌落形态的形成机制第22-23页
  1.5 鞭毛的功能第23-25页
  1.6 本研究的背景、主要内容及意义第25-30页
2 S onedensis中FlrBC对鞭毛的调控及鞭毛丝蛋白表达对运动性的影响第30-51页
  2.1 材料与方法第32-36页
    2.1.1 菌株、质粒和培养条件第32页
    2.1.2 阅读框内缺失突变株的构建和回补菌株第32-34页
    2.1.3 生物信息学分析第34页
    2.1.4 S. oneidensis生长的测定和运动性检测第34页
    2.1.5 β-半乳糖苷酶活性实验第34-35页
    2.1.6 实时定量PCR(qRT-PCR)第35页
    2.1.7 鞭毛蛋白的纯化第35页
    2.1.8 免疫印记分析实验第35-36页
  2.2 结果与分析第36-47页
    2.2.1 flrC的缺失不会影响S. oneidensis的运动性第36-39页
    2.2.2 flrB和flrC的同时缺失对运动性的影响第39-40页
    2.2.3 flrBC操纵子受RpoN和FlrA调控第40-43页
    2.2.4 FlaB的过表达导致△flrBC的超级运动性表型第43-45页
    2.2.5 鞭毛丝蛋白FlaA和FlaB的比例决定运动性第45-47页
  2.3 讨论第47-51页
    2.3.1 S. oneidensis中FlrBC在鞭毛调控等级中作用机制的变异第47-49页
    2.3.2 运动性与鞭毛丝蛋白组分之间的关系第49-51页
3 FlrBC对S. oneidensis鞭毛数量和定位及其它方面的影响第51-75页
  3.1 材料与方法第53-57页
    3.1.1 菌株、质粒和培养条件第53页
    3.1.2 阅读框内缺失突变株、回补菌株、定点突变菌株的构建和生理特性的测定第53页
    3.1.3 透射电子显微镜观察(TEM)第53-55页
    3.1.4 实时定量PCR(qRT-PCR)第55页
    3.1.5 鞭毛蛋白的纯化第55页
    3.1.6 GFP融合蛋白的表达和荧光定量分析第55-56页
    3.1.7 细菌单杂交(B1H)实验第56页
    3.1.8 转座突变分析和插入位点的鉴定第56-57页
    3.1.9 接合实验第57页
  3.2 结果与分析第57-70页
    3.2.1 过量表达FlrC诱导侧生多鞭毛的表型第57-60页
    3.2.2 FlrC过表达引起的多鞭毛表型与flhG表达变化无关第60-62页
    3.2.3 FlrC可能以非磷酸化形式被激活第62-65页
    3.2.4 FlhF和FlrD对FlrC过表达时多鞭毛表型的影响第65-67页
    3.2.5 感受激酶SO4002对△flrBC运动性的影响第67-69页
    3.2.6 二元系统FlrBC对接合的影响第69-70页
  3.3 讨论第70-75页
    3.3.1 鞭毛定位的调控机制研究第70-71页
    3.3.2 二元系统调控蛋白在鞭毛运动性中的作用机制第71-73页
    3.3.3 鞭毛二元系统FlrBC在调控其他生理过程中的作用第73-75页
4 胞外蛋白在S. oneidensis无鞭毛突变体菌落形态转变的作用第75-90页
  4.1 材料与方法第76-78页
    4.1.1 菌株、质粒和培养条件第76页
    4.1.2 阅读框内缺失突变株、回补菌株和表型鉴定第76页
    4.1.3 转座子突变和插入位点鉴定第76页
    4.1.4 Tricine-SDS-PAGE、免疫印记杂交实验和高表达蛋白的测序鉴定第76-78页
    4.1.5 透射电子显微镜观察(TEM)第78页
    4.1.6 EPS和胞外蛋白的纯化和定量第78页
    4.1.7 序列分析第78页
  4.2 结果与分析第78-86页
    4.2.1 无鞭毛褶皱突变体的插入突变子的筛选第78-83页
    4.2.2 SO1072的过表达是无鞭毛菌株菌落形态转变的重要原因第83-84页
    4.2.3 SO1072的补偿表达作用第84-86页
    4.2.4 SO1072的表达可能受c-di-GMP介导第86页
  4.3 讨论第86-90页
5 论文总结第90-94页
  5.1 主要研究成果第90-91页
  5.2 创新之处第91-92页
  5.3 不足和展望第92-94页
参考文献第94-110页
附录第110-123页
作者简介第123页

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