论文目录 | |
致谢 | 第1-6页 |
摘要 | 第6-8页 |
Abstract | 第8-14页 |
符号和术语表 | 第14-15页 |
第一章 绪论 | 第15-40页 |
1.1 脂肪酶 | 第15-22页 |
1.1.1 概述 | 第15-16页 |
1.1.2 脂肪酶的一般结构和催化机理 | 第16-19页 |
1.1.3 脂肪酶对手性分子的立体识别 | 第19-22页 |
1.2 化学修饰 | 第22-28页 |
1.2.1 修饰的一般方法 | 第23-24页 |
1.2.2 化学修饰的研究进展 | 第24-26页 |
1.2.3 修饰蛋白质的表征 | 第26-28页 |
1.3 脂肪酶的分子动力学模拟 | 第28-30页 |
1.4 脂肪酶制备1,3-甘油二酯 | 第30-33页 |
1.5 脂肪酶的固定化 | 第33-37页 |
1.5.1 基于疏水材料的固定化 | 第33-35页 |
1.5.2 基于纳米材料的固定化 | 第35页 |
1.5.3 基于磁性材料的固定化 | 第35-36页 |
1.5.4 交联酶聚集体 | 第36-37页 |
1.6 本课题研究思路与研究内容 | 第37-40页 |
1.6.1 存在问题 | 第37-38页 |
1.6.2 研究思路 | 第38页 |
1.6.3 研究内容 | 第38-40页 |
第二章 脂肪酶对手性伯醇立体识别的新机理 | 第40-62页 |
2.1 前言 | 第40-41页 |
2.2 材料与方法 | 第41-51页 |
2.2.1 主要试剂 | 第41-42页 |
2.2.2 主要仪器 | 第42-43页 |
2.2.3 分析方法 | 第43-45页 |
2.2.3.1 酶活测定 | 第43-44页 |
2.2.3.2 对映体选择性的测定 | 第44-45页 |
2.2.4 手性伯醇酯的动力学拆分 | 第45-46页 |
2.2.5 对PcL氨基酸残基侧链的特异性化学修饰 | 第46-48页 |
2.2.6 蛋白质谱表征 | 第48-49页 |
2.2.7 分子模拟 | 第49-51页 |
2.2.7.1 受体蛋白(酶)的准备 | 第49页 |
2.2.7.2 配体小分子(底物)的准备 | 第49页 |
2.2.7.3 分子对接获得配体-受体复合物构象 | 第49-50页 |
2.2.7.4 建立配体小分子及修饰氨基酸残基的电荷信息以及力场参数 | 第50页 |
2.2.7.5 分子动力学初始化 | 第50-51页 |
2.2.7.6 分子动力学模拟 | 第51页 |
2.3. 结果与讨论 | 第51-61页 |
2.3.1 底物及酶结构对选择性的影响 | 第51-56页 |
2.3.1.1 配体研究:底物结构与对映体选择性的关系 | 第51-53页 |
2.3.1.2 受体研究:酶分子结构与对映体选择性的关系 | 第53-56页 |
2.3.2 酶-底物立体识别的分子模拟 | 第56-61页 |
2.3.2.1 对醇部分的立体识别 | 第56-59页 |
2.3.2.2 对酰基部分的立体识别 | 第59-61页 |
2.4. 本章小结 | 第61-62页 |
第三章 脂肪酶对手性酸的立体识别的新机理 | 第62-78页 |
3.1 前言 | 第62-63页 |
3.2 材料与方法 | 第63-68页 |
3.2.1 主要试剂 | 第63页 |
3.2.2 主要仪器 | 第63-64页 |
3.2.3 分析方法 | 第64-65页 |
3.2.4 手性酸酯的动力学拆分 | 第65-66页 |
3.2.5 分子动力学模拟 | 第66页 |
3.2.6 相互作用分析 | 第66页 |
3.2.7 酶与底物结合自由能的计算及对映体选择率的推算 | 第66-67页 |
3.2.8 对RmL氨基酸残基侧链的特异性化学修饰 | 第67页 |
3.2.9 蛋白质谱表征 | 第67-68页 |
3.3 结果与讨论 | 第68-77页 |
3.3.1 分子模拟确定决定选择性的结构域 | 第68-75页 |
3.3.1.1 RmL蛋白结构中与手性酸选择性相关的区域的确定 | 第68-73页 |
3.3.1.2 选择性相关位点的虚拟修饰 | 第73-75页 |
3.3.2 对手性酸识别机理的实验验证 | 第75-77页 |
3.4 本章小结 | 第77-78页 |
第四章 磁性多孔聚合物固定化脂肪酶 | 第78-94页 |
4.1 前言 | 第78页 |
4.2 材料与方法 | 第78-85页 |
4.2.1 主要试剂 | 第78-79页 |
4.2.2 主要仪器 | 第79-80页 |
4.2.3 模型反应及分析方法 | 第80-83页 |
4.2.3.1 各种甘油酯的分析方法 | 第80-81页 |
4.2.3.2 目标产物1,3-甘油二酯的酶法制备 | 第81-82页 |
4.2.3.3 脂肪酶的活力和区域选择性测定 | 第82-83页 |
4.2.3.4 脂肪酶的操作稳定性测定 | 第83页 |
4.2.3.5 脂肪酶的热稳定性测定 | 第83页 |
4.2.4 磁性多孔聚合物聚合物的制备 | 第83-84页 |
4.2.5 基于物理吸附固定化脂肪酶 | 第84-85页 |
4.2.6 材料表征 | 第85页 |
4.3 结果与讨论 | 第85-93页 |
4.3.1 商品化脂肪酶的筛选 | 第85-86页 |
4.3.2 材料表征 | 第86-88页 |
4.3.3 物理吸附固定化条件优化 | 第88-89页 |
4.3.4 固定化酶的活力 | 第89-91页 |
4.3.5 固定化酶的稳定性 | 第91-93页 |
4.4 本章小结 | 第93-94页 |
第五章 纳米磁性交联脂肪酶聚集体 | 第94-104页 |
5.1 前言 | 第94页 |
5.2 材料与方法 | 第94-97页 |
5.2.1 主要试剂 | 第94-95页 |
5.2.2 主要仪器 | 第95页 |
5.2.3 模型反应及酶学性质的检测 | 第95页 |
5.2.4 表面改性的磁性纳米颗粒制备 | 第95-96页 |
5.2.5 纳米磁性脂肪酶交联聚集体制备 | 第96页 |
5.2.6 材料表征 | 第96-97页 |
5.3 结果与讨论 | 第97-103页 |
5.3.1 材料表征 | 第97-98页 |
5.3.2 共价偶联和酶交联聚集体制备条件优化 | 第98-100页 |
5.3.3 纳米磁性脂肪酶交联聚集体的活力和稳定性 | 第100-101页 |
5.3.4 高级脂肪酸-1,3-甘油二酯的酶法制备 | 第101-103页 |
5.4 本章小结 | 第103-104页 |
第六章 结论与展望 | 第104-106页 |
6.1 结论 | 第104-105页 |
6.2 展望 | 第105-106页 |
参考文献 | 第106-115页 |
附录A部分化合物核磁表征图 | 第115-133页 |
附录B修饰蛋白的表征 | 第133-137页 |
作者简历 | 第137-138页 |
博士期间主要科研成果 | 第138页 |