论文目录 | |
| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 英文缩写 | 第9-13页 |
| 第1章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 胚胎干细胞研究 | 第13-17页 |
| 1.1.1 胚胎干细胞建系 | 第13-14页 |
| 1.1.2 多能性维持信号通路 | 第14-15页 |
| 1.1.3 多能性转录因子 | 第15-17页 |
| 1.2 mESCs 中 LIF 信号通路的研究进展 | 第17-19页 |
| 1.2.1 LIF/JAK/STAT3 信号通路 | 第17页 |
| 1.2.2 LIF/PI3K/AKT 信号通路 | 第17-18页 |
| 1.2.3 LIF/SHP2/MAPK 信号通路 | 第18-19页 |
| 1.3 诱导多能干细胞研究进展 | 第19-22页 |
| 1.4 转录因子 FOXM110 | 第22-25页 |
| 1.4.1 FOXM1 基因结构 | 第22-23页 |
| 1.4.2 FOXM1 的生物学功能 | 第23-25页 |
| 1.5 本课题的研究方案及目的 | 第25-27页 |
| 第2章 实验材料及方法 | 第27-47页 |
| 2.1 实验材料和仪器 | 第27-31页 |
| 2.1.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第29-30页 |
| 2.1.3 常用试剂及配方 | 第30-31页 |
| 2.2 细胞培养 | 第31-34页 |
| 2.2.1 小鼠胚胎成纤维细胞的提取和培养及饲养层细胞的制备 | 第31-33页 |
| 2.2.2 小鼠胚胎干细胞的培养 | 第33-34页 |
| 2.2.3 293T 细胞的培养 | 第34页 |
| 2.3 慢病毒制备 | 第34-36页 |
| 2.3.1 质粒的大量提取 | 第35-36页 |
| 2.3.2 293T 细胞的转染和慢病毒的包装及滴度测定 | 第36页 |
| 2.4 分析及检测方法 | 第36-45页 |
| 2.4.1 荧光定量 PCR | 第36-37页 |
| 2.4.2 蛋白免疫印迹（Western Blot，WB） | 第37-39页 |
| 2.4.3 染色质免疫共沉淀(ChromatinImmunoprecipitation,ChIP) | 第39-41页 |
| 2.4.4 凝胶迁移实验（Electrophoretic Mobility Shift Assay, EMSA） | 第41页 |
| 2.4.5 双荧光素酶报告基因检测 | 第41-42页 |
| 2.4.6 碱性磷酸酶染色（Alkaline phosphatase staining ，AP） | 第42-43页 |
| 2.4.7 免疫荧光染色（immunol fluorescence staining） | 第43页 |
| 2.4.8 畸胎瘤成瘤实验 | 第43-44页 |
| 2.4.9 苏木精伊红染色 ( hematoxylin-eosin staining，HE ) | 第44-45页 |
| 2.5 诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells, iPSCs) | 第45-47页 |
| 2.5.1 iPSCs 的诱导 | 第45页 |
| 2.5.2 iPSCs 克隆挑选及培养鉴定 | 第45-47页 |
| 第3章 实验结果及讨论 | 第47-78页 |
| 3.1 LIF 因子维持 mESC 中 Foxm1 的表达 | 第47-52页 |
| 3.1.1 小鼠胚胎干细胞无 LIF 因子培养多能性下降 | 第47-48页 |
| 3.1.2 小鼠胚胎干细胞无 LIF 因子培养 Foxm1 表达下降 | 第48-50页 |
| 3.1.3 LIF 因子对小鼠胚胎干细胞中 Foxm1 表达有上调作用 | 第50-52页 |
| 3.1.4 本节小结 | 第52页 |
| 3.2 小鼠胚胎干细胞中 FOXM1 转录受 Stat3 调控 | 第52-56页 |
| 3.2.1 LIF 信号通过 Stat3 通路上调 Foxm1 表达 | 第52-53页 |
| 3.2.2 ChIP 证实 Stat3 对 Foxm1 启动子有结合 | 第53-54页 |
| 3.2.3 EMSA 证实 Stat3 对 Foxm1 启动子结合位点有特异性结合 | 第54-56页 |
| 3.2.4 本节小结 | 第56页 |
| 3.3 小鼠胚胎干细胞中 Foxm1 敲除导致多能性丧失 | 第56-64页 |
| 3.3.1 Foxm1 特异性 siRNA 的筛选 | 第56-57页 |
| 3.3.2 Foxm1 干扰慢病毒的构建和鉴定 | 第57-59页 |
| 3.3.3 小鼠胚胎干细胞中 Foxm1 表达被干扰后多能性下降 | 第59-60页 |
| 3.3.4 小鼠胚胎干细胞中 Foxm1 表达被干扰导致多能性因子表达下调 | 第60-62页 |
| 3.3.5 小鼠胚胎干细胞中 Foxm1 表达被干扰后形成拟胚体能力下降 | 第62-63页 |
| 3.3.6 本节小结 | 第63-64页 |
| 3.4 无 LIF 和饲养层条件下 FOXM1 高表达能维持 mESC 多能性 | 第64-71页 |
| 3.4.1 FOXM1 高表达慢病毒的制备和鉴定 | 第64-65页 |
| 3.4.2 无 LIF 和饲养层条件下 FOXM1 高表达能维持 mESC 多能性表型 | 第65-66页 |
| 3.4.3 无 LIF 和饲养层条件下 FOXM1 高表达能维持 mESC 多能性因子表达 | 第66-69页 |
| 3.4.4 FOXM1 高表达 mESC 可无 LIF 和饲养层连续传代培养 | 第69-70页 |
| 3.4.5 FOXM1 高表达 mESC 细胞株具有三胚层分化能力 | 第70-71页 |
| 3.4.6 本节小结 | 第71页 |
| 3.5 小鼠诱导多能干细胞重编程过程中 Foxm1 的表达是必须的 | 第71-78页 |
| 3.5.1 iPSCs 重编程方法的建立 | 第71-73页 |
| 3.5.2 iPSCs 重编程过程中 Foxm1 不能替换 Yamanaka 因子 | 第73页 |
| 3.5.3 Foxm1 高表达对 iPSCs 诱导效率没有促进作用 | 第73-75页 |
| 3.5.4 iPSCs 诱导过程中 Foxm1 的敲除导致重编程失败 | 第75-76页 |
| 3.5.5 iPSCs 诱导过程中 Foxm1 被干扰后不能形成畸胎瘤 | 第76-77页 |
| 3.5.6 本节小结 | 第77-78页 |
| 结论 | 第78-81页 |
| 参考文献 | 第81-96页 |
| 附录A 攻读学位期间发表的论文目录 | 第96-97页 |
| 致谢 | 第97页 |
