论文目录 | |
| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-13页 |
| 第1章 文献综述 | 第13-41页 |
| 1.1 植物源重组蛋白的概况 | 第13-24页 |
| 1.1.1 单克隆抗体 | 第16-21页 |
| 1.1.2 疫苗 | 第21-24页 |
| 1.2 对重组蛋白表达量的优化 | 第24-29页 |
| 1.2.1 转录、mRNA 稳定性和翻译的调控 | 第25-26页 |
| 1.2.2 位置效应 | 第26-28页 |
| 1.2.3 重组蛋白稳定性 | 第28页 |
| 1.2.4 环境因素 | 第28-29页 |
| 1.3 重组糖蛋白的糖基化修饰 | 第29-34页 |
| 1.3.1 去除植物特异的糖基化修饰 | 第30-31页 |
| 1.3.2 引入哺乳动物糖基转移酶及糖基供体 | 第31页 |
| 1.3.3 调整糖基转移酶在细胞器中的位置 | 第31-32页 |
| 1.3.4 通过瞬时表达重建修饰通路 | 第32-34页 |
| 1.4 糖蛋白的内质网关联降解 | 第34-38页 |
| 1.4.1 哺乳动物细胞和酵母中的 ERAD | 第35-36页 |
| 1.4.2 植物中的 ERAD | 第36-38页 |
| 1.5 植物生物反应器的发展前景 | 第38-41页 |
| 第2章 抗 CD20 scFv-Fc 植物种子特异性表达载体的构建 | 第41-59页 |
| 2.1 序言 | 第41-43页 |
| 2.2 实验材料与设备 | 第43-44页 |
| 2.2.1 实验材料 | 第43页 |
| 2.2.2 实验设备 | 第43-44页 |
| 2.3 实验方法 | 第44-51页 |
| 2.3.1 2S2 和 Amy 信号肽编码序列、Ale-scFv-Fc 的基因序列合成 | 第44-46页 |
| 2.3.2 引物设计 | 第46-47页 |
| 2.3.3 2S2-scFv 和 Amy-scFv 的融合 PCR | 第47-48页 |
| 2.3.4 融合片段与 T1 载体的连接 | 第48页 |
| 2.3.5 大肠杆菌感受态细胞 DH5α的制备 | 第48-49页 |
| 2.3.6 重组质粒 T1-2S2-scFv 和 T1-Amy-scFv 的转化和筛选 | 第49页 |
| 2.3.7 重组质粒 T1-2S2-scFv-FcSEKDEL 的获得 | 第49-50页 |
| 2.3.8 重组质粒 pPhasBar-2S2-scFv-Fc、pPhasBar-Amy-scFv-Fc、pPhasBar-Ale-scFv-Fc、pPhasBar-2S2-scFv-FcSEKDEL 的获得 | 第50-51页 |
| 2.4 结果与分析 | 第51-56页 |
| 2.4.1 重组质粒 T1-2S2-scFv-Fc 和 T1-Amy-scFv-Fc 的构建 | 第51-52页 |
| 2.4.2 重组质粒 T1-2S2-scFv-FcSEKDEL 的构建 | 第52页 |
| 2.4.3 重组质粒 pPhasBar-2S2-scFv-Fc、pPhasBar--Amy-scFv-Fc、pPhasBar-Ale-scFv-Fc、pPhasBar-2S2-scFv-FcSEKDEL 的构建 | 第52-56页 |
| 2.5 讨论 | 第56-57页 |
| 2.6 小结 | 第57-59页 |
| 第3章 抗 CD20 scFv-Fc 的表达、纯化及抗肿瘤活性研究 | 第59-83页 |
| 3.1 序言 | 第59页 |
| 3.2 实验材料与设备 | 第59-62页 |
| 3.2.1 实验材料 | 第59-61页 |
| 3.2.2 实验设备 | 第61-62页 |
| 3.3 实验方法 | 第62-69页 |
| 3.3.1 农杆菌感受态的制备及冻融法转化 | 第62页 |
| 3.3.2 拟南芥的种植及浸染法转化 | 第62-63页 |
| 3.3.3 转基因拟南芥的筛选 | 第63-64页 |
| 3.3.4 转基因拟南芥的 SDS-PAGE 及 Western Blot 检测 | 第64页 |
| 3.3.5 重组蛋白表达量的夹心法 ELISA 及 BCA 检测 | 第64-65页 |
| 3.3.6 重组蛋白的纯化 | 第65-66页 |
| 3.3.7 重组蛋白的 N-糖基化分析 | 第66-67页 |
| 3.3.8 细胞培养基本操作 | 第67页 |
| 3.3.9 重组蛋白的 ADCC 能力鉴定 | 第67-68页 |
| 3.3.10 重组蛋白的 CDC 能力鉴定 | 第68-69页 |
| 3.4 结果与分析 | 第69-79页 |
| 3.4.1 转基因株系的获得 | 第69-72页 |
| 3.4.2 重组蛋白的表达鉴定 | 第72-75页 |
| 3.4.3 重组蛋白的纯化及 N-糖基结构研究 | 第75-77页 |
| 3.4.4 重组蛋白的 ADCC 和 CDC 活性研究 | 第77-79页 |
| 3.5 讨论 | 第79-81页 |
| 3.6 小结 | 第81-83页 |
| 第4章 抗 CD20 scFv-Fc 在拟南芥种子中所引起的内质网应激响应 | 第83-97页 |
| 4.1 序言 | 第83-84页 |
| 4.2 实验材料与设备 | 第84-85页 |
| 4.2.1 实验材料 | 第84页 |
| 4.2.2 实验设备 | 第84-85页 |
| 4.3 实验方法 | 第85-88页 |
| 4.3.1 植株的培养及处理 | 第85页 |
| 4.3.2 总 RNA 的提取及检测 | 第85页 |
| 4.3.3 总 RNA 样本的处理及 cDNA 第一链的合成 | 第85-87页 |
| 4.3.4 引物设计及 qRT-PCR | 第87-88页 |
| 4.4 结果与分析 | 第88-92页 |
| 4.4.1 总 RNA 的提取 | 第88-90页 |
| 4.4.2 不同转基因株系中 QC 相关基因的表达分析 | 第90-92页 |
| 4.5 讨论 | 第92-95页 |
| 4.6 小结 | 第95-97页 |
| 参考文献 | 第97-113页 |
| 附录一 溶液及抗生素配方 | 第113-117页 |
| 附录二 测序结果 | 第117-121页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文及取得的科研成果 | 第121-123页 |
| 致谢 | 第123页 |
