论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-13页 |
| 目录 | 第13-16页 |
| 缩写和符号 | 第16-17页 |
| 第一章 绪论 | 第17-37页 |
| 1.1 哺乳动物精子发生的生物学过程 | 第17-25页 |
| 1.1.1 哺乳动物睾丸的结构 | 第17-18页 |
| 1.1.2 精子发生（spermatogenesis） | 第18-20页 |
| 1.1.3 精子形成（spermiogenesis） | 第20-22页 |
| 1.1.4 精子的结构 | 第22-24页 |
| 1.1.5 精子中的 RNA 及潜在的功能 | 第24-25页 |
| 1.2 精子获能及顶体反应 | 第25-31页 |
| 1.2.1 精子获能 | 第25-28页 |
| 1.2.2 顶体反应 | 第28-29页 |
| 1.2.3 钙调蛋白在精子获能中的作用 | 第29-31页 |
| 1.3 基因敲除技术 | 第31-37页 |
| 1.3.1 传统基因敲除技术 | 第31-33页 |
| 1.3.2 TALEN 基因敲除技术 | 第33-37页 |
| 第二章 IQCF1 的克隆、原核表达和多克隆抗体制备 | 第37-63页 |
| 2.1 背景介绍 | 第37-38页 |
| 2.2 实验仪器和材料 | 第38-40页 |
| 2.3 试剂配制 | 第40-45页 |
| 2.4 实验方法 | 第45-55页 |
| 2.4.1 上游法纯化小鼠精子 | 第45-46页 |
| 2.4.2 组织/细胞 RNA 的提取及反转录 | 第46-47页 |
| 2.4.3 感受态细胞的制备 | 第47-48页 |
| 2.4.4 小鼠 Iqcf1 开放读码框的克隆 | 第48-49页 |
| 2.4.5 小鼠 Iqcf1 原核表达质粒的构建 | 第49页 |
| 2.4.6 IQCF1 在大肠杆菌中的诱导表达 | 第49-50页 |
| 2.4.7 IQCF1 融合蛋白的纯化 | 第50-51页 |
| 2.4.8 IQCF1 兔抗血清的制备 | 第51页 |
| 2.4.9 亲和纯化 IQCF1 多克隆抗体 | 第51-52页 |
| 2.4.10 SDS-PAGE 和 Western blotting | 第52-55页 |
| 2.5 实验结果 | 第55-60页 |
| 2.5.1 生物信息学分析 IQCF1 序列 | 第55-58页 |
| 2.5.2 原核表达 IQCF1 融合蛋白的纯化 | 第58-59页 |
| 2.5.3 IQCF1 抗体特异性检测 | 第59-60页 |
| 2.6 讨论 | 第60-63页 |
| 第三章 精子顶体蛋白 IQCF1 表达的特性 | 第63-93页 |
| 3.1 背景介绍 | 第63页 |
| 3.2 实验仪器和材料 | 第63-64页 |
| 3.3 试剂配制 | 第64-67页 |
| 3.4 实验方法 | 第67-74页 |
| 3.4.1 免疫组织(细胞)化学及免疫荧光 | 第67-69页 |
| 3.4.2 免疫电子显微镜 | 第69页 |
| 3.4.3 支持细胞的分离 | 第69页 |
| 3.4.4 人工隐睾手术 | 第69-70页 |
| 3.4.5 绿色荧光蛋白定位IQCF1 | 第70-73页 |
| 3.4.6 精子体外获能和诱导顶体反应 | 第73页 |
| 3.4.7 小鼠卵子和受精卵的收集 | 第73-74页 |
| 3.4.8 统计学分析方法 | 第74页 |
| 3.5 实验结果 | 第74-88页 |
| 3.5.1 小鼠睾丸中IQCF1定位于顶体 | 第74-78页 |
| 3.5.2 精子中IQCF1定位于顶体 | 第78-82页 |
| 3.5.3 体外培养细胞中IQCF1定位于细胞核 | 第82-83页 |
| 3.5.4 IQCF1在受精卵中的功能 | 第83-84页 |
| 3.5.5 小鼠睾丸IQCF1的表达量与生精能力呈正相关 | 第84-88页 |
| 3.6 讨论 | 第88-93页 |
| 第四章 IQCF1在雄性生殖中功能的研究 | 第93-117页 |
| 4.1 背景介绍 | 第93页 |
| 4.2 实验仪器和材料 | 第93-94页 |
| 4.3 试剂配制 | 第94-95页 |
| 4.4 实验方法 | 第95-102页 |
| 4.4.1 Iqcf1基因敲除小鼠基因型鉴定方法 | 第95-96页 |
| 4.4.2 小鼠精子数目和活力检测 | 第96-97页 |
| 4.4.3 小鼠精子顶体反应率检测 | 第97页 |
| 4.4.4 获能后小鼠精子酪氨酸磷酸化水平检测 | 第97-98页 |
| 4.4.5 Iqcf1基因敲除小鼠生殖能力检测 | 第98页 |
| 4.4.6 酵母双杂交 | 第98-100页 |
| 4.4.7 免疫共沉淀 | 第100-101页 |
| 4.4.8 免疫荧光共定位 | 第101-102页 |
| 4.5 实验结果 | 第102-113页 |
| 4.5.1 TALEN法制备Iqcf1基因敲除小鼠 | 第102-103页 |
| 4.5.2 F1代和F2代小鼠的基因型鉴定及IQCF1表达检测 | 第103-105页 |
| 4.5.3 Iqcf1~(-/-)雄鼠生殖能力显著低于野生型雄鼠 | 第105-106页 |
| 4.5.4 Iqcf1~(-/-)小鼠精子活力检测 | 第106-108页 |
| 4.5.5 Iqcf1~(-/-)小鼠精子顶体反应率检测 | 第108-109页 |
| 4.5.6 验证IQCF1与钙调蛋白存在相互作用 | 第109-111页 |
| 4.5.7 Iqcf1敲除后小鼠精子中钙调蛋白表达量显著下降 | 第111-112页 |
| 4.5.8 Iqcf1敲除后小鼠精子获能后酪氨酸磷酸化水平显著下降 | 第112-113页 |
| 4.6 讨论 | 第113-117页 |
| 第五章 全文总结 | 第117-119页 |
| 参考文献 | 第119-127页 |
| 致谢 | 第127-129页 |
| 攻读博士学位期间已发表或录用的论文 | 第129-130页 |
| 附件 | 第130页 |
