论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-13页 |
| 缩略词表 | 第13-15页 |
| 目录 | 第15-19页 |
| 第一章 研究背景 | 第19-60页 |
| 1.1 引言 | 第19页 |
| 1.2 哺乳动物精子发生过程及其相关基因研究 | 第19-27页 |
| 1.2.1 哺乳动物精子发生过程 | 第19-22页 |
| 1.2.2 哺乳动物精子发生相关基因 | 第22-27页 |
| 1.3 表观遗传调控因子polycomb抑制复合体1(PRC1) | 第27-39页 |
| 1.3.1 PRC1复合体的组成 | 第27-29页 |
| 1.3.2 PRC1复合体介导的基因转录抑制机制 | 第29-32页 |
| 1.3.3 PRC1复合体的招募机制 | 第32-36页 |
| 1.3.4 哺乳动物PCGF家族成员及其生物学功能 | 第36-39页 |
| 1.4 长链非编码RNA | 第39-51页 |
| 1.4.1 长链非编码RNA的概述 | 第39-42页 |
| 1.4.2 长链非编码RNA的起源 | 第42-43页 |
| 1.4.3 长链非编码RNA的生物学功能 | 第43-46页 |
| 1.4.4 长链非编码RNA的分子作用机制 | 第46-51页 |
| 1.5 哺乳动物精子发生的表观遗传学调控研究 | 第51-60页 |
| 1.5.1 DNA甲基化与精子发生 | 第51-53页 |
| 1.5.2 组蛋白修饰与精子发生 | 第53-56页 |
| 1.5.3 非编码RNA与精子发生 | 第56-60页 |
| 第二章 表观遗传调控复合体PRC1核心成员多梳蛋白PCGF6在精子发生过程中的功能研究 | 第60-123页 |
| 2.1 前言 | 第60-61页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第61-67页 |
| 2.2.1 实验动物 | 第61页 |
| 2.2.2 质粒载体与菌株 | 第61页 |
| 2.2.3 实验使用的细胞株 | 第61-62页 |
| 2.2.4 试剂 | 第62-65页 |
| 2.2.5 引物序列 | 第65-67页 |
| 2.3 实验方法 | 第67-92页 |
| 2.3.1 TRIzol法提取总RNA | 第67-68页 |
| 2.3.2 第一链cDNA的合成 | 第68-69页 |
| 2.3.3 Real-time定量PCR(qRT-PCR) | 第69-70页 |
| 2.3.4 总蛋白的提取及Western blot | 第70-73页 |
| 2.3.5 免疫荧光组织化学 | 第73-74页 |
| 2.3.6 基因克隆 | 第74-79页 |
| 2.3.7 表达载体的构建 | 第79-80页 |
| 2.3.8 shRNA干扰载体的构建 | 第80-81页 |
| 2.3.9 细胞培养 | 第81-83页 |
| 2.3.10 脂质体介导的细胞转染 | 第83页 |
| 2.3.11 慢病毒包装以及感染细胞 | 第83-85页 |
| 2.3.12 CCK-8检测细胞增殖试验 | 第85页 |
| 2.3.13 EdU检测细胞增殖试验 | 第85-86页 |
| 2.3.14 流式细胞仪检测细胞周期 | 第86页 |
| 2.3.15 流式细胞仪检测细胞DNA倍体 | 第86-87页 |
| 2.3.16 免疫共沉淀(Co-IP) | 第87-88页 |
| 2.3.17 基于双分子荧光互补(BiFC)的蛋白互作分析 | 第88-91页 |
| 2.3.18 利用双荧光素酶基因检测系统进行启动子活性分析 | 第91-92页 |
| 2.4 实验结果 | 第92-117页 |
| 2.4.1 PCGF6在小鼠睾丸组织中的表达情况 | 第92-95页 |
| 2.4.2 双标shRNA干扰慢病毒载体的改造 | 第95-98页 |
| 2.4.3 PCGF6基因shRNA干扰慢病毒载体的构建 | 第98-99页 |
| 2.4.4 PCGF6基因shRNA靶序列干扰效率的鉴定 | 第99-101页 |
| 2.4.5 shRNA载体的慢病毒包装 | 第101-102页 |
| 2.4.6 PCGF6基因稳定敲低GC-2 spd细胞株的建立 | 第102-103页 |
| 2.4.7 PCGF6基因敲低对GC-2 spd细胞增殖的影响 | 第103-104页 |
| 2.4.8 PCGF6基因敲低对GC-2 spd细胞周期的影响 | 第104-106页 |
| 2.4.9 PCGF6基因敲低对GC-2 spd体外分化成单倍体细胞的影响 | 第106-109页 |
| 2.4.10 PCGF6基因敲低对GC-2 spd细胞相关组蛋白修饰水平的影响 | 第109-111页 |
| 2.4.11 PCGF6在小鼠睾丸组织内互作蛋白的鉴定 | 第111-114页 |
| 2.4.12 PCGF6蛋白与HSPA2蛋白直接互作检测 | 第114-115页 |
| 2.4.13 PCGF6基因启动子活性调控研究 | 第115-117页 |
| 2.5 讨论 | 第117-122页 |
| 2.5.1 PCGF6负调控雄性生殖细胞的增殖 | 第117-118页 |
| 2.5.2 PCGF6可通过作用减数分裂参与雄性生殖细胞的分化 | 第118-119页 |
| 2.5.3 PCGF6参与雄性生殖细胞减数分裂过程的潜在表观遗传调控机制 | 第119-121页 |
| 2.5.4 PCGF6基因参与精子发生的模型假设 | 第121-122页 |
| 2.6 本章小结 | 第122-123页 |
| 第三章 小鼠出生后睾丸发育过程中长链非编码RNA表达谱分析 | 第123-145页 |
| 3.1 前言 | 第123页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第123-124页 |
| 3.2.1 实验动物 | 第123-124页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第124页 |
| 3.2.3 引物序列 | 第124页 |
| 3.3 实验方法 | 第124-127页 |
| 3.3.1 小鼠睾丸组织总RNA的提取和标记 | 第124-125页 |
| 3.3.2 LncRNA芯片表达谱分析 | 第125页 |
| 3.3.3 Real-time定量PCR(qRT-PCR) | 第125页 |
| 3.3.4 LncRNA的基因组环境分析 | 第125-126页 |
| 3.3.5 LncRNA基因组位置相关蛋白编码基因的GO功能富集分析 | 第126页 |
| 3.3.6 LncRNA启动子分析 | 第126页 |
| 3.3.7 LncRNA的进化保守性分析 | 第126-127页 |
| 3.4 实验结果 | 第127-142页 |
| 3.4.1 新生小鼠和成年小鼠睾丸组织lncRNAs和mRNAs表达谱概况 | 第127-128页 |
| 3.4.2 新生小鼠和成年小鼠睾丸组织中存在上千条差异表达lncRNAs | 第128-132页 |
| 3.4.3 qRT-PCR验证芯片结果 | 第132-133页 |
| 3.4.4 LncRNAs在小鼠出生后睾丸发育过程中的表达具有时序性 | 第133页 |
| 3.4.5 差异表达lncRNAs与蛋白编码基因的基因组位置关系 | 第133-137页 |
| 3.4.6 一些差异表达lncRNAs与microRNA重叠 | 第137-139页 |
| 3.4.7 LncRNA相关蛋白编码基因倾向于参与转录调控 | 第139-140页 |
| 3.4.8 大多数差异表达lncRNAs启动子具有表观遗传修饰标志 | 第140-141页 |
| 3.4.9 大多数差异表达lncRNAs含有进化保守元件 | 第141-142页 |
| 3.5 讨论 | 第142-144页 |
| 3.6 本章小结 | 第144-145页 |
| 第四章 全文总结 | 第145-147页 |
| 4.1 主要创新点 | 第145页 |
| 4.2 主要结论 | 第145-146页 |
| 4.3 研究展望 | 第146-147页 |
| 参考文献 | 第147-171页 |
| 附录Ⅰ 实验试剂配制方法 | 第171-175页 |
| 附录Ⅱ 双标shRNA慢病毒载pLVX-mRFP-IRES-Neo-shRNA2图谱及序列 | 第175-180页 |
| 附表(见光盘) | 第180-181页 |
| 致谢 | 第181-182页 |
| 攻读博士期间发表的学术论文 | 第182页 |
| 攻读博士期间参与的科研项目 | 第182页 |
