论文目录 | |
| 致谢 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-11页 |
| Abstract | 第11-20页 |
| 第一章 引言 | 第20-39页 |
| 第一节 细胞凋亡 | 第20-28页 |
| 一、程序性细胞死亡的主要类型 | 第20-22页 |
| 1. 细胞凋亡 | 第20页 |
| 2. 细胞自噬 | 第20-21页 |
| 3. 程序性坏死 | 第21-22页 |
| 二、细胞凋亡概述 | 第22-27页 |
| 1. 细胞凋亡的主要特征 | 第23-24页 |
| 2. 外源性细胞凋亡 | 第24-26页 |
| 3. 内源性细胞凋亡 | 第26页 |
| 4. 内质网介导的细胞凋亡 | 第26-27页 |
| 三、细胞凋亡的生理意义 | 第27-28页 |
| 第二节 内源性细胞凋亡 | 第28-36页 |
| 一、线虫细胞的内源性凋亡通路 | 第28-30页 |
| 二、果蝇细胞的内源性细胞凋亡通路 | 第30-32页 |
| 三、扁形动物细胞的内源性细胞凋亡通路 | 第32页 |
| 四、软体动物细胞的内源性细胞凋亡通路 | 第32-33页 |
| 五、Bcl-2 家族 | 第33-36页 |
| 第三节 电压依赖性阴离子通道蛋白(VDAC)2 | 第36-39页 |
| 一、VDAC概述 | 第36-37页 |
| 二、VDAC2的功能 | 第37-39页 |
| 第二章 长牡蛎内源性细胞凋亡信号通路的解析 | 第39-108页 |
| 第一节 实验材料 | 第39-48页 |
| 一、实验动物 | 第39页 |
| 二、菌种与病毒 | 第39页 |
| 三、细胞（系） | 第39页 |
| 四、抗体 | 第39-40页 |
| 五、载体 | 第40页 |
| 六、主要生物试剂 | 第40-42页 |
| 七、主要实验耗材及仪器设备 | 第42页 |
| 八、主要引物及siRNA序列信息 | 第42-48页 |
| 第二节 实验方法 | 第48-69页 |
| 一、病毒刺激、弧菌刺激、干露刺激和热休克刺激处理长牡蛎 | 第48-49页 |
| 二、牡蛎血淋巴细胞的原代培养 | 第49-50页 |
| 三、牡蛎血淋巴细胞的紫外照射、RNA干扰和抑制剂处理 | 第50页 |
| 四、细胞凋亡率的Annexin V/PI双染色检测法 | 第50-51页 |
| 五、凋亡酶caspase 3 和caspase 9 活性的检测 | 第51-52页 |
| 六、线粒体膜电位的JC-1 染料检测法 | 第52-53页 |
| 七、线粒体与胞浆的分离 | 第53页 |
| 八、样品蛋白质的提取及蛋白质免疫印迹（Western Blotting）实验 | 第53-55页 |
| 九、样品RNA提取及检测 | 第55-56页 |
| 十、cDNA第一条链的合成 | 第56页 |
| 十一、通过RACE技术获取目的基因全长序列 | 第56-58页 |
| 十二、基因序列分析 | 第58页 |
| 十三、实时荧光定量PCR | 第58-59页 |
| 十四、表达载体构建与质粒纯化 | 第59-60页 |
| 十五、酵母感受态细胞的制备及质粒转化 | 第60-63页 |
| 十六、酵母双杂交 | 第63页 |
| 十七、酵母死亡诱导实验 | 第63-64页 |
| 十八、哺乳动物细胞系的培养、瞬时转染及相关处理 | 第64-65页 |
| 十九、重组蛋白的亚细胞定位 | 第65-66页 |
| 二十、重组蛋白的免疫共沉淀 | 第66-68页 |
| 二十一、双荧光素酶报告基因检测 | 第68-69页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第69-103页 |
| 一、实验结果 | 第69-95页 |
| 1. 紫外照射诱导长牡蛎血淋巴细胞发生凋亡 | 第69-70页 |
| 2. 紫外照射改变长牡蛎细胞线粒体膜电位并诱导细胞色素C释放 | 第70-71页 |
| 3. 长牡蛎凋亡酶caspase 9 和caspase 3 能被紫外照射激活 | 第71-72页 |
| 4. 细胞色素C能激活长牡蛎caspase 9 和caspase 3 | 第72-74页 |
| 5. Z-LEHD-FMK能抑制长牡蛎caspase 3 活性 | 第74-75页 |
| 6. 长牡蛎Bcl-2 家族基因的克隆与序列分析 | 第75-77页 |
| 7. 长牡蛎Bcl-2 家族基因在不同组织、不同胁迫刺激下以及紫外照射后的表达模式分析 | 第77-80页 |
| 8. 长牡蛎Bcl-2 家族基因能调控酿酒酵母的生存和死亡 | 第80-81页 |
| 9. 长牡蛎Bcl-2 家族基因能调控HEK293T细胞的凋亡 | 第81-83页 |
| 10. CgBak基因下调引起长牡蛎血淋巴细胞凋亡率下降 | 第83-85页 |
| 11. CgBak和CgBax能在发生细胞凋亡时转位到线粒体 | 第85-87页 |
| 12. CgBak和CgBax能诱导长牡蛎线粒体释放细胞色素C | 第87-88页 |
| 13. 抗凋亡亚家族蛋白与促凋亡亚家族蛋白之间存在直接相互作用关系 | 第88-91页 |
| 14. Cgp53诱导长牡蛎血淋巴细胞发生凋亡 | 第91-93页 |
| 15. Cgp53调控长牡蛎Bcl-2 家族 | 第93-95页 |
| 二、讨论 | 第95-103页 |
| 第四节 结论与展望 | 第103-108页 |
| 一、结论 | 第103-104页 |
| 二、展望 | 第104-108页 |
| 1. 关于Cgp53对Bcl-2 家族调控机制的研究 | 第104-105页 |
| 2. 关于CgBcl-xL抗凋亡功能验证的研究 | 第105页 |
| 3. 关于长牡蛎Bcl-2 家族蛋白定位情况的研究 | 第105页 |
| 4. 关于BH3-only亚家族缺失对长牡蛎环境适应影响的研究 | 第105-106页 |
| 5. 关于其他长牡蛎Bcl-2 家族蛋白功能的研究 | 第106页 |
| 6. 关于Cgcaspase 9 调控机制的研究 | 第106-107页 |
| 7. 关于其他内源性凋亡调控因子的研究 | 第107页 |
| 8. 关于其他无脊椎动物中线粒体外膜通透性上升及细胞色素C释放过程的研究 | 第107-108页 |
| 第三章 长牡蛎CgVDAC2基因的克隆鉴定及其在细胞凋亡和宿主防御中的功能研究 | 第108-133页 |
| 第一节 实验材料 | 第108-110页 |
| 一、实验动物 | 第108页 |
| 二、菌种与病毒 | 第108页 |
| 三、细胞（系） | 第108页 |
| 四、抗体 | 第108页 |
| 五、载体 | 第108页 |
| 六、主要生物试剂 | 第108-109页 |
| 七、主要实验耗材及仪器设备 | 第109页 |
| 八、主要引物及siRNA序列信息 | 第109-110页 |
| 第二节 实验方法 | 第110-114页 |
| 一、病毒刺激处理长牡蛎及不同发育时期取样 | 第110-111页 |
| 二、牡蛎血淋巴细胞的原代培养 | 第111页 |
| 三、牡蛎血淋巴细胞的紫外照射和RNA干扰 | 第111页 |
| 四、细胞凋亡率的Annexin V/PI双染色检测法 | 第111-112页 |
| 五、凋亡酶caspase 3 活性的检测 | 第112页 |
| 六、样品蛋白质的提取及蛋白质免疫印迹（Western Blotting）实验 | 第112页 |
| 七、样品RNA提取及检测 | 第112页 |
| 八、cDNA第一条链的合成 | 第112页 |
| 九、通过RACE技术获取目的基因全长序列 | 第112页 |
| 十、基因序列分析 | 第112-113页 |
| 十一、实时荧光定量PCR | 第113页 |
| 十二、表达载体构建与质粒纯化 | 第113页 |
| 十三、酵母感受态细胞的制备及质粒转化 | 第113页 |
| 十四、酵母双杂交 | 第113页 |
| 十五、哺乳动物细胞系的培养及瞬时转染 | 第113页 |
| 十六、重组蛋白的亚细胞定位 | 第113-114页 |
| 十七、重组蛋白的免疫共沉淀 | 第114页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第114-130页 |
| 一、实验结果 | 第114-124页 |
| 1. 长牡蛎VDAC2基因的克隆与编码蛋白结构域分析 | 第114-116页 |
| 2. CgVDAC2蛋白的序列分析 | 第116-118页 |
| 3. CgVDAC2基因在不同发育时期、不同组织及病毒刺激下的表达模式 | 第118-120页 |
| 4. CgVDAC2蛋白定位于线粒体 | 第120页 |
| 5. CgVDAC2抑制紫外照射诱导的细胞凋亡 | 第120-122页 |
| 6. CgVDAC2抑制CgBak的促凋亡功能 | 第122-123页 |
| 7. CgVDAC2蛋白与CgBak蛋白间存在直接相互作用关系 | 第123-124页 |
| 二、讨论 | 第124-130页 |
| 第四节 结论与展望 | 第130-133页 |
| 一、结论 | 第130页 |
| 二、展望 | 第130-133页 |
| 1. 关于CgVDAC2基因表达受OsHV-1 病毒诱导上调机制的研究 | 第130-131页 |
| 2. 关于CgVDAC2在其他病原生物刺激下表达模式的研究 | 第131页 |
| 3. 关于CgVDAC2与其他凋亡调控蛋白互相作用关系的研究 | 第131页 |
| 4. 关于CgVDAC2在长牡蛎雄性生殖过程中的作用的研究 | 第131-133页 |
| 参考文献 | 第133-150页 |
| 缩略词表 | 第150-153页 |
| 作者简历 | 第153-154页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文与研究成果 | 第154页 |
