论文目录 | |
| 符号说明 | 第1-12页 |
| 中文摘要 | 第12-14页 |
| 英文摘要 | 第14-16页 |
| 1 前言 | 第16-37页 |
| 1.1 土壤盐渍化及其危害 | 第16-17页 |
| 1.2 植物耐盐机制 | 第17-23页 |
| 1.2.1 积累渗透调节物 | 第17页 |
| 1.2.2 活性氧清除机制 | 第17-18页 |
| 1.2.3 离子平衡 | 第18-19页 |
| 1.2.4 SOS(Salt-Overly-Sensitive)途径 | 第19-21页 |
| 1.2.5 Na~+/H~+交换蛋白与植物耐盐性 | 第21-23页 |
| 1.2.5.1 Na~+/H~+交换蛋白(NHX)的分类 | 第21-22页 |
| 1.2.5.2 Na~+/H~+交换蛋白的生化功能和调控 | 第22-23页 |
| 1.3 植物中的糖感知与糖信号 | 第23-35页 |
| 1.3.1 植物中的糖信号的产生 | 第24-26页 |
| 1.3.2 植物中的糖感知机制 | 第26-31页 |
| 1.3.2.1 葡萄糖感受器HXK | 第27-29页 |
| 1.3.2.2 二糖的感知 | 第29-30页 |
| 1.3.2.3 细胞表面受体与糖信号 | 第30-31页 |
| 1.3.3 植物中的糖信号转导 | 第31-33页 |
| 1.3.3.1 转录调控 | 第31-32页 |
| 1.3.3.2 蛋白激酶和蛋白磷酸酶在糖信号转导中的作用 | 第32-33页 |
| 1.3.4 糖信号与植物激素 | 第33-35页 |
| 1.3.4.1 糖信号与ABA信号 | 第33-35页 |
| 1.3.4.2 糖信号与乙烯信号 | 第35页 |
| 1.4 研究的目的与意义 | 第35-37页 |
| 2 材料与方法 | 第37-66页 |
| 2.1 试验材料 | 第37-41页 |
| 2.1.1 苹果材料 | 第37页 |
| 2.1.2 拟南芥及其生长条件 | 第37页 |
| 2.1.3 酵母及其生长条件 | 第37页 |
| 2.1.4 菌株 | 第37-38页 |
| 2.1.5 载体 | 第38页 |
| 2.1.6 引物 | 第38页 |
| 2.1.7 所用药品试剂 | 第38-39页 |
| 2.1.8 培养基 | 第39-41页 |
| 2.1.9 缓冲液配方 | 第41页 |
| 2.2 试验方法 | 第41-66页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第41-42页 |
| 2.2.2 RNA含量与纯度检测 | 第42页 |
| 2.2.3 基因组DNA的去除 | 第42-43页 |
| 2.2.4 基因的克隆 | 第43页 |
| 2.2.5 PCR产物回收 | 第43-44页 |
| 2.2.6 连接反应 | 第44页 |
| 2.2.7 大肠杆菌感受态的制备和转化 | 第44-45页 |
| 2.2.8 测序 | 第45页 |
| 2.2.9 质粒DNA的提取 | 第45-46页 |
| 2.2.10 质粒DNA的酶切反应 | 第46页 |
| 2.2.11 表达载体的构建 | 第46-49页 |
| 2.2.11.1 MdHXK1、MdNHX1过量表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 2.2.11.2 MdHXK1、MdNHX1瞬时沉默表达载体的构建 | 第47页 |
| 2.2.11.3 用于发根农杆菌侵染的pK7GWIWG2载体构建 | 第47-48页 |
| 2.2.11.4 启动子载体构建 | 第48页 |
| 2.2.11.5 原核表达载体的构建 | 第48-49页 |
| 2.2.11.6 酵母双杂交载体构建 | 第49页 |
| 2.2.12 农杆菌感受态细胞的制备与转化 | 第49-50页 |
| 2.2.13 植物材料的准备及转化 | 第50-52页 |
| 2.2.13.1 苹果王林愈伤组织的培养 | 第50页 |
| 2.2.13.2 苹果愈伤组织的转化 | 第50页 |
| 2.2.13.3 ‘Gala’苹果遗传转化 | 第50-51页 |
| 2.2.13.4 发根农杆菌MSU440侵染 | 第51-52页 |
| 2.2.14 酵母双杂 | 第52-53页 |
| 2.2.14.1 所用相关试剂及配制方法 | 第52页 |
| 2.2.14.2 酵母双杂交步骤 | 第52-53页 |
| 2.2.15 蛋白相关的试验技术 | 第53-56页 |
| 2.2.15.1 原核诱导蛋白 | 第53-54页 |
| 2.2.15.2 原核诱导蛋白纯化 | 第54-55页 |
| 2.2.15.3 Pull-Down | 第55页 |
| 2.2.15.4 聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE) | 第55-56页 |
| 2.2.16 植物总蛋白的提取 | 第56页 |
| 2.2.17 蛋白免疫印迹分析(Westernblotting) | 第56-57页 |
| 2.2.17.1 转膜 | 第56-57页 |
| 2.2.17.2 洗膜和显影 | 第57页 |
| 2.2.18 蛋白体外降解 | 第57-58页 |
| 2.2.19 Co-IP免疫共沉淀 | 第58-59页 |
| 2.2.20 蛋白磷酸化检测 | 第59-60页 |
| 2.2.20.1 离体蛋白磷酸化的鉴定(放射性32P同位素标记) | 第59页 |
| 2.2.20.2 体内蛋白磷酸化的检测(Pro-QDiamondPhosphoproteinGelStain) | 第59-60页 |
| 2.2.21 苹果原生质体的提取 | 第60-62页 |
| 2.2.21.1 原生质体的分离 | 第60页 |
| 2.2.21.2 PEG转化 | 第60-62页 |
| 2.2.22 Na~+/H~+交换活性检测 | 第62-63页 |
| 2.2.22.1 液泡膜蛋白的提取 | 第62页 |
| 2.2.22.2 测定Na~+/H~+交换活性 | 第62-63页 |
| 2.2.23 酵母突变体互补试验 | 第63页 |
| 2.2.24 脯氨酸含量测定 | 第63-64页 |
| 2.2.24.1 脯氨酸的提取 | 第63页 |
| 2.2.24.2 脯氨酸标准曲线 | 第63-64页 |
| 2.2.25 MDA含量测定 | 第64页 |
| 2.2.26 Na~+、K+离子含量测定 | 第64-66页 |
| 3 结果与分析 | 第66-93页 |
| 3.1 外源葡萄糖提高苹果苗的耐盐性 | 第66-68页 |
| 3.1.1 外源葡萄糖提高苹果苗的耐盐性 | 第66-67页 |
| 3.1.2 葡萄糖提高苹果苗耐盐性依赖于HXK | 第67-68页 |
| 3.2 葡萄糖通过MdHXK1提高苹果耐盐性 | 第68-71页 |
| 3.2.1 MdHXK1在转录水平和蛋白水平均受盐胁迫的诱导 | 第68-69页 |
| 3.2.2 反义抑制MdHXK1的表达降低苹果叶片的耐盐性 | 第69-70页 |
| 3.2.3 MdHXK1主要依赖其信号途径提高耐盐性 | 第70-71页 |
| 3.3 MdHXK1与MdNHX1互作 | 第71-74页 |
| 3.3.1 MdHXK1互作蛋白的筛选 | 第71-72页 |
| 3.3.2 MdHXK1与MdNHX1互作验证 | 第72-74页 |
| 3.4 MdNHX1的功能鉴定 | 第74-80页 |
| 3.4.1 MdNHX1基因的分子克隆 | 第74-75页 |
| 3.4.2 酵母突变体互补验证Na~+/H~+交换蛋白MdNHX1的功能 | 第75页 |
| 3.4.3 MdNHX1的亚细胞定位 | 第75-76页 |
| 3.4.4 MdNHX1基因的表达模式分析 | 第76-77页 |
| 3.4.5 过表达MdNHX1提高苹果愈伤的耐盐性 | 第77-78页 |
| 3.4.6 MdNHX1过表达苹果愈伤中的Na~+/H~+交换活性提高 | 第78-79页 |
| 3.4.7 异源表达MdNHX1提高拟南芥的耐盐性 | 第79-80页 |
| 3.5 MdHXK1在275位的丝氨酸磷酸化MdNHX1蛋白 | 第80-83页 |
| 3.6 MdHXK1影响MdNHX1的蛋白稳定性和转运活性 | 第83-86页 |
| 3.6.1 MdHXK1提高MdNHX1的蛋白稳定性 | 第83-84页 |
| 3.6.2 MdHXK1提高MdNHX1的转运活性 | 第84-85页 |
| 3.6.3 共转MdHXK1与MdNHX1提高酵母突变体的耐盐性 | 第85-86页 |
| 3.7 MdHXK1提高植物耐盐性部分依赖于MdNHX | 第86-93页 |
| 3.7.1 MdHXK1提高苹果愈伤耐盐性 | 第86-87页 |
| 3.7.2 过表达MdHXK1提高苹果植株的耐盐性 | 第87-89页 |
| 3.7.3 MdHXK1提高苹果苗的耐盐性部分依赖MdNHX | 第89-91页 |
| 3.7.4 反义抑制MdNHX1的表达增加了MdHXK1过表达植株叶片对盐的敏感性 | 第91-93页 |
| 4 讨论 | 第93-99页 |
| 4.1 葡萄糖信号通过HXK依赖途径提高耐盐性 | 第93-95页 |
| 4.2 MdHXK1部分通过MdNHX1参与植物耐盐性 | 第95-97页 |
| 4.3 MdNHX1在维持盐胁迫下细胞内离子稳态过程中起重要作用 | 第97-99页 |
| 5 结论 | 第99-100页 |
| 6 参考文献 | 第100-119页 |
| 7 附录 | 第119-123页 |
| 8 致谢 | 第123-124页 |
| 9 攻读学位期间发表论文情况 | 第124页 |
