论文目录 | |
| 摘要 | 第1-4页 |
| abstract | 第4页 |
| 第1章 前言 | 第10-37页 |
| 1.1 问题的提出 | 第10页 |
| 1.2 文献综述 | 第10-36页 |
| 1.2.1 脂肪肝 | 第10-19页 |
| 1.2.2 SREBP信号通路 | 第19-25页 |
| 1.2.3 COPⅡ囊泡运输系统 | 第25-32页 |
| 1.2.4 CIDE蛋白家族 | 第32-36页 |
| 1.3 本论文的研究目的及意义 | 第36页 |
| 1.4 论文研究方法 | 第36-37页 |
| 第2章 实验材料与方法 | 第37-48页 |
| 2.1 实验材料 | 第37-39页 |
| 2.1.1 细胞培养试剂 | 第37页 |
| 2.1.2 分子生化实验试剂 | 第37-38页 |
| 2.1.3 抗体 | 第38页 |
| 2.1.4 特殊试剂及缓冲液的制备 | 第38-39页 |
| 2.2 实验方法 | 第39-48页 |
| 2.2.1 动物饲养 | 第39页 |
| 2.2.2 动物组织的H/E染色和油红染色 | 第39页 |
| 2.2.3 原代肝脏细胞的分离 | 第39-40页 |
| 2.2.4 分离小鼠肝脏细胞质 | 第40页 |
| 2.2.5 分离小鼠肝脏Microsome | 第40页 |
| 2.2.6 体外重组的COPⅡ囊泡出芽实验 | 第40-41页 |
| 2.2.7 小鼠组织蛋白样品的提取 | 第41页 |
| 2.2.8 小鼠组织甘油三酯的提取及薄层层析(TLC)检测 | 第41页 |
| 2.2.9 细胞中甘油三酯的提取及检测 | 第41-42页 |
| 2.2.10 亚细胞器的分离 | 第42-43页 |
| 2.2.11 腺病毒的包装 | 第43页 |
| 2.2.12 腺相关病毒的包装 | 第43页 |
| 2.2.13 细胞的培养及处理 | 第41-44页 |
| 2.2.14 细胞的转染 | 第44页 |
| 2.2.15 BioID反应体系 | 第44页 |
| 2.2.16 免疫共沉淀 | 第44-45页 |
| 2.2.17 GST-pull down | 第45页 |
| 2.2.18 免疫荧光染色 | 第45-46页 |
| 2.2.19 CRISPR/Cas9 介导的基因敲除细胞系的构建 | 第46页 |
| 2.2.20 RNA的提取及实时荧光定量-PCR | 第46-48页 |
| 第3章 Cideb促进SREBP的剪切和成熟 | 第48-61页 |
| 3.1 缺失Cideb抑制SREBP的剪切和成熟 | 第48-56页 |
| 3.1.1 肝脏特异性敲低Cideb抑制SREBP的剪切和成熟 | 第49-50页 |
| 3.1.2 原代肝细胞中敲低Cideb抑制SREBP的剪切和成熟 | 第50-51页 |
| 3.1.3 缺失Cideb抑制不同代谢条件下的SREBP通路 | 第51-54页 |
| 3.1.4 Cideb的敲除抑制AML-12 细胞内的SREBP通路 | 第54-55页 |
| 3.1.5 缺失Cidea抑制乳腺组织中的SREBP通路 | 第55-56页 |
| 3.2 Cideb的表达促进SREBP的剪切和成熟 | 第56-60页 |
| 3.2.1 Cideb的表达恢复Cideb敲除小鼠肝脏中SREBP的剪切和成熟 | 第56-58页 |
| 3.2.2 Cideb的表达促进原代肝细胞里SREBP的剪切和成熟 | 第58页 |
| 3.2.3 Cidea和 Cidec的表达也能促进SREBP的剪切和成熟 | 第58-60页 |
| 3.3 讨论 | 第60页 |
| 3.4 小结 | 第60-61页 |
| 第4章 Cideb促进SREBP/SCAP从内质网到高尔基体的转运 | 第61-75页 |
| 4.1 SREBP成熟形式激活Cideb敲除小鼠肝脏中的SREBP通路 | 第62-64页 |
| 4.1.1 SREBP-1 成熟形式激活Cideb敲除小鼠肝脏中的脂肪酸合成基因 | 第62-63页 |
| 4.1.2 SREBP-2 成熟形式激活Cideb敲除小鼠肝脏中的胆固醇代谢基因 | 第63-64页 |
| 4.2 Cideb缺失降低高尔基体上SREBP和 SCAP的蛋白水平 | 第64-65页 |
| 4.3 Cideb促进SREBP/SCAP进入COPⅡ囊泡 | 第65-69页 |
| 4.3.1 体外重组的出芽体系的建立 | 第65-67页 |
| 4.3.2 敲低Cideb抑制SREBP/SCAP进入到COPⅡ囊泡 | 第67-68页 |
| 4.3.3 敲除Cideb抑制SREBP/SCAP进入到COPⅡ囊泡 | 第68-69页 |
| 4.4 Cideb促进SREBP/SCAP靠近COPⅡ囊泡 | 第69-73页 |
| 4.4.1 BioID反应体系的建立 | 第69-72页 |
| 4.4.2 敲低Cideb降低靠近COPⅡ囊泡形成位点的SCAP | 第72页 |
| 4.4.3 敲除Cideb降低靠近COPⅡ囊泡形成位点的SCAP | 第72-73页 |
| 4.5 讨论 | 第73-74页 |
| 4.6 小结 | 第74-75页 |
| 第5章 固醇调控Cideb与SCAP的相互作用 | 第75-88页 |
| 5.1 Cideb特异地与SCAP相互作用 | 第75-79页 |
| 5.1.1 Cideb与SCAP相互作用 | 第75-77页 |
| 5.1.2 SCAP的 416-800 区域介导了与Cideb的相互作用 | 第77-78页 |
| 5.1.3 Cideb与SCAP在内质网上共定位 | 第78-79页 |
| 5.2 固醇调控Cideb与SCAP的相互作用 | 第79-82页 |
| 5.3 Cideb降低SREBP对固醇浓度的敏感性 | 第82-87页 |
| 5.3.1 Cideb减轻固醇对SREBP剪切和成熟的抑制作用 | 第82-84页 |
| 5.3.2 Cideb增强SCAP的高尔基定位 | 第84-87页 |
| 5.4 讨论 | 第87页 |
| 5.5 小结 | 第87-88页 |
| 第6章Cideb通过结合Sec12 促进SREBP/SCAP的ERES定位 | 第88-100页 |
| 6.1 Cideb特异地结合Sec12 | 第88-92页 |
| 6.1.1 Cideb与Sec12 相互作用 | 第88-89页 |
| 6.1.2 Cideb的 118-165 区段介导了与Sec12 的相互作用 | 第89-90页 |
| 6.1.3 Cideb上第128位赖氨酸介导了Cideb与Sec12 的相互作用 | 第90-92页 |
| 6.2 Cideb-K128A丧失对SREBP通路的激活作用 | 第92-95页 |
| 6.2.1 Cideb-K128A不能促进SREBP通路的活性 | 第92-94页 |
| 6.2.2 Cideb-K128A不能促进SREBP/SCAP进入COPⅡ囊泡 | 第94-95页 |
| 6.3 Cideb促进SCAP的ERES定位 | 第95-99页 |
| 6.3.1 Cideb与SCAP共定位在ERES上 | 第95-96页 |
| 6.3.2 Cideb增强SCAP的ERES定位 | 第96-99页 |
| 6.4 讨论 | 第99页 |
| 6.5 小结 | 第99-100页 |
| 第7章Cideb缺失缓解饮食诱导的脂肪肝 | 第100-111页 |
| 7.1 Cideb缺失缓解饮食诱导的脂肪肝 | 第100-108页 |
| 7.1.1 Cideb缺失缓解饮食诱导的脂肪肝 | 第100-102页 |
| 7.1.2 Cideb缺失不影响脂肪及肌肉组织中的脂含量 | 第102-104页 |
| 7.1.3 Cideb缺失抑制饮食诱导的SREBP通路的活性 | 第104-108页 |
| 7.2 Cideb缺失减轻饮食诱导的肝损伤及炎症反应 | 第108-109页 |
| 7.3 讨论 | 第109-110页 |
| 7.4 小结 | 第110-111页 |
| 第8章 总结与展望 | 第111-118页 |
| 8.1 论文总结 | 第111-113页 |
| 8.2 讨论与展望 | 第113-118页 |
| 8.2.1 CIDE蛋白对SREBP通路的作用不依赖于其调控脂滴大小的功能 | 第113-115页 |
| 8.2.2 Cideb对其它脂代谢蛋白从内质网到高尔基体运输的影响 | 第115-116页 |
| 8.2.3 对Cideb功能多样性的思考 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第137页 |
