论文目录 | |
| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-18页 |
| 上篇 文献综述 | 第18-51页 |
| 第一章 植物与病原物的互作 | 第19-31页 |
| 1 植物与病原物互作的分子基础 | 第19-22页 |
| 2 植物识别病原相关模式分子PAMPs触发PTI | 第22-23页 |
| 3 病原菌效应蛋白effectors抑制PTI | 第23-25页 |
| 4 植物识别效应蛋白effectors触发ETI | 第25-27页 |
| 参考文献 | 第27-31页 |
| 第二章 病原相关模式分子研究进展 | 第31-51页 |
| 1 细菌中的病原相关模式分子(PAMP/MAMP) | 第35-39页 |
| 1.1 鞭毛蛋白(Flagellin,flg22)触发植物的免疫反应 | 第35-36页 |
| 1.2 延伸因子(Elongation factor Tu,EF-Tu)触发植物的免疫反应 | 第36-37页 |
| 1.3 肽聚糖(Peptidoglycan,PGN)触发植物的免疫反应 | 第37-38页 |
| 1.4 脂多糖(Lipopolysaccharides,LPS)触发植物的免疫反应 | 第38页 |
| 1.5 硫酸化的肤段(Ax21)触发植物的免疫反应 | 第38-39页 |
| 2 真菌和卵菌中的病原相关模式分子(PAMP/MAMP) | 第39-41页 |
| 2.1 几丁质(Chitin)以及β-葡聚糖(β-Glucan)触发植物的免疫反应 | 第39-40页 |
| 2.2 无毒基因Ave1的肽段(AVE1 Peptide)触发植物的免疫反应 | 第40-41页 |
| 2.3 诱导乙烯的木聚糖酶(Ethylene-inducing xylanase,EIX)触发植物的免疫反应 | 第41页 |
| 3 破坏相关的模式分子(DAMP) | 第41-44页 |
| 参考文献 | 第44-51页 |
| 下篇 研究内容 | 第51-141页 |
| 第一章 疫霉菌一个新病原相关模式分子PsXEG1的鉴定 | 第53-93页 |
| 1 材料与方法 | 第56-66页 |
| 1.1 供试菌株的保存 | 第56页 |
| 1.2 供试植物的培养 | 第56页 |
| 1.3 大豆疫霉胞外蛋白的色谱纯化 | 第56-58页 |
| 1.3.1 供试培养基 | 第56-57页 |
| 1.3.2 大豆疫霉P6497培养菌液的获得 | 第57页 |
| 1.3.3 大豆疫霉P6497外秘蛋白的沉淀及蛋白收集 | 第57页 |
| 1.3.4 蛋白溶液的缓冲液置换与浓缩 | 第57-58页 |
| 1.3.5 蛋白的液相色谱纯化 | 第58页 |
| 1.4 大豆疫霉基因的克隆与蛋白序列分析 | 第58-59页 |
| 1.4.1 DNA提取 | 第58页 |
| 1.4.2 基因的克隆及测序 | 第58-59页 |
| 1.4.3 PsXEG1蛋白保守结构分析 | 第59页 |
| 1.5 农杆菌介导的烟草和番茄瞬时转化 | 第59-61页 |
| 1.5.1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第59页 |
| 1.5.2 质粒电转农杆菌感受态细胞 | 第59-60页 |
| 1.5.3 烟草顺时转化 | 第60页 |
| 1.5.4 番茄顺时转化 | 第60-61页 |
| 1.6 目的基因在植物中瞬时表达蛋白的提取与检测 | 第61-63页 |
| 1.6.1 植物总蛋白的提取 | 第61页 |
| 1.6.2 蛋白的SDS-PAGE电泳和Western blot检测 | 第61-63页 |
| 1.7 PsXEG1蛋白的酵母表达纯化 | 第63页 |
| 1.8 PsXEG1蛋白的酶活性测定 | 第63-64页 |
| 1.8.1 试剂的配置 | 第63-64页 |
| 1.8.2 酶活性的测定 | 第64页 |
| 1.9 RNA的提取 | 第64-65页 |
| 1.10 Real-Time PCR分析 | 第65页 |
| 1.11 PsXEG1诱发抗病性测定 | 第65-66页 |
| 2 结果分析 | 第66-86页 |
| 2.1 诱发本氏烟细胞死亡的大豆疫霉外秘蛋白纯化 | 第66-67页 |
| 2.2 诱发本氏烟细胞死亡蛋白的质谱测定 | 第67-68页 |
| 2.3 PsXEG1在本氏烟上瞬时表达能够诱发细胞死亡 | 第68-69页 |
| 2.4 PsXEG1在本氏烟上通过瞬时表达诱发细胞死亡的能力需要信号肽 | 第69-70页 |
| 2.5 Pichia pastoris酵母胞外表达纯化的PsXEG1蛋白能够诱发本氏烟的细胞死亡 | 第70-71页 |
| 2.6 PsXEG1蛋白能够诱发番茄、辣椒和大豆的细胞死亡 | 第71-72页 |
| 2.7 PsXEG1具有木葡聚糖酶水解活性 | 第72-73页 |
| 2.8 PsXEG1诱发细胞死亡的能力不依赖其木葡聚糖酶水解活性 | 第73-74页 |
| 2.9 PsXEG1诱发细胞死亡的能力依赖于NbSerk3/Bak1 | 第74-77页 |
| 2.10 PsXEG1诱发过敏反应的能力不依赖于EIX(ethylene-inducing xylanase)的受体蛋白LeEIX2 | 第77-79页 |
| 2.11 PsXEG1蛋白诱发本氏烟对烟草疫霉的抗病性 | 第79-81页 |
| 2.12 PsXEG1同源蛋白在卵菌、真菌和细菌中广泛分布 | 第81-83页 |
| 2.13 PsXEG1同源蛋白激发子活性在卵菌和真菌中具有广泛性 | 第83-86页 |
| 3 讨论 | 第86-90页 |
| 参考文献 | 第90-93页 |
| 第二章 PsXEG1蛋白诱发植物免疫反应的功能域分析 | 第93-113页 |
| 1 材料与方法 | 第95-96页 |
| 1.1 供试菌株的保存 | 第95页 |
| 1.2 供试植物的培养 | 第95页 |
| 1.3 基因与蛋白序列的分析 | 第95页 |
| 1.4 Real-Time PCR分析 | 第95-96页 |
| 1.5 诱发抗病性测定 | 第96页 |
| 1.6 蛋白三维结构模型的构建 | 第96页 |
| 2 结果分析 | 第96-109页 |
| 2.1 PsXEG1蛋白删除突变对其诱发过敏反应的影响 | 第96-97页 |
| 2.2 PsXEG1在卵菌、真菌和细菌中同源蛋白序列之间的比对 | 第97-101页 |
| 2.3 PsXEG1蛋白N端保守肽段PsXEG1~(20-53) (PXN1)诱发本氏烟的活性氧爆发 | 第101-102页 |
| 2.4 PXN1诱发本氏烟防卫基因的表达 | 第102页 |
| 2.5 PXN1诱发本氏烟对烟草疫霉的抗病性 | 第102-103页 |
| 2.6 不能诱发过敏反应的PsXEG1同源蛋白Ps109281和Ps140301,N端区段替换成PXN1后能够诱发植物的过敏反应 | 第103-105页 |
| 2.7 PsXEG1蛋白的三维结构与Ps109281和Ps140301在N端存在差异 | 第105-106页 |
| 2.8 PsXEG1蛋白N端(PXN1)芳香族氨基酸对其诱发过敏反应的影响 | 第106-107页 |
| 2.9 PsXEG1蛋白N端(PXN1)亲水性氨基酸对其诱发过敏反应的影响 | 第107-109页 |
| 3 讨论 | 第109-111页 |
| 参考文献 | 第111-113页 |
| 第三章 PsXEG1在大豆疫霉侵染过程中的双重角色:致病毒力因子和病原相关模式分子 | 第113-141页 |
| 1 材料与方法 | 第116-120页 |
| 1.1 供试菌株保存与培养 | 第116页 |
| 1.2 供试植物的培养 | 第116页 |
| 1.3 基因的转录分析 | 第116-117页 |
| 1.3.1 RNA的提取 | 第116-117页 |
| 1.3.2 cDNA的制备 | 第117页 |
| 1.3.3 Real-Time PCR分析 | 第117页 |
| 1.4 大豆疫霉转化 | 第117-119页 |
| 1.4.1 大豆疫霉的培养以及转化用培养基的制备 | 第117页 |
| 1.4.2 PEG介导的大豆疫霉转化技术 | 第117-119页 |
| 1.4.3 转化子的筛选 | 第119页 |
| 1.5 农杆菌介导的烟草瞬时转化 | 第119页 |
| 1.6 基因枪验证RXLR效应分子对PsXEG1诱发过敏反应的抑制 | 第119-120页 |
| 1.7 大豆疫霉侵染大豆 | 第120页 |
| 1.8 大豆黄化苗防卫反应的测定 | 第120页 |
| 1.8.1 胼胝质测定 | 第120页 |
| 1.8.2 活性氧测定 | 第120页 |
| 1.8.3 诱发抗病性测定 | 第120页 |
| 2 结果分析 | 第120-134页 |
| 2.1 PsXEG1在大豆疫霉侵染初期上调表达 | 第120-121页 |
| 2.2 PsXEG1在大豆疫霉中沉默以及过表达突变体的获得 | 第121-122页 |
| 2.3 PsXEG1沉默和过表达不影响其同源基因的转录 | 第122-124页 |
| 2.4 PsXEG1沉默和过表达转化子的毒力均减弱 | 第124-125页 |
| 2.5 PsXEG1过表达转化子在侵染位点诱发活性氧的积累和胼胝质的沉积 | 第125-126页 |
| 2.6 PsXEG1蛋白诱发大豆黄化苗对大豆疫霉的抗病性 | 第126-128页 |
| 2.7 大豆疫霉的RXLR效应分子能够抑制PsXEG1在本氏烟上诱发的过敏反应 | 第128-129页 |
| 2.8 Avh52、Avh62、Avh94和Avh109具有和PsXEG1相似的转录模式 | 第129-131页 |
| 2.9 Avh52、Avh62、Avh94和Avh109在本氏烟上抑制PsXEG1诱发的活性氧积累 | 第131-132页 |
| 2.10 Avh52、Avh62、Avh94和Avh109在本氏烟上抑制PsXEG1诱发的防卫基因表达 | 第132-133页 |
| 2.11 Avh52、Avh62、Avh94和Avh109在大豆上抑制PsXEG1诱发的过敏反应 | 第133-134页 |
| 3 讨论 | 第134-137页 |
| 参考文献 | 第137-141页 |
| 附录 | 第141-151页 |
| 全文总结及创新点 | 第151-153页 |
| 攻读博士学位期间发表的研究论文 | 第153-155页 |
| 致谢 | 第155页 |
