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RAD51AP2在精子发生减数分裂性染色体重组中的功能研究

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RAD51AP2在精子发生减数分裂性染色体重组中的功能研究
论文目录
 
摘要第1-7页
ABSTRACT第7-14页
第1章 绪论第14-48页
  1.1 精子发生和减数分裂第14-20页
    1.1.1 精子发生第14-15页
    1.1.2 减数分裂第15-16页
    1.1.3 DNA双链断裂(DSBs)修复通路第16-18页
    1.1.4 减数分裂重组第18-20页
  1.2 修复蛋白第20-41页
    1.2.1 重组蛋白RAD51和DMC1第20-24页
    1.2.2 RAD51和DMC1的细胞学定位第24-25页
    1.2.3 RAD51的辅助蛋白第25-34页
    1.2.4 DMC1的辅助蛋白第34-41页
  1.3 哺乳动物性染色体及性染色体行为异常导致的疾病第41-44页
    1.3.1 X染色体第41-42页
    1.3.2 Y染色体第42页
    1.3.3 性染色体行为及其异常导致的疾病第42-44页
  1.4 超高分辨率显微镜在减数分裂重组研究中的应用第44-48页
第2章 实验材料与方法第48-71页
  2.1 实验材料第48-57页
    2.1.1 小鼠信息第48页
    2.1.2 细胞系及菌种信息第48页
    2.1.3 质粒载体信息第48-49页
    2.1.4 引物序列第49-51页
    2.1.5 抗体信息第51-52页
    2.1.6 试剂信息第52-55页
    2.1.7 实验相关溶液配方第55-57页
    2.1.8 实验仪器第57页
  2.2 实验方法第57-71页
    2.2.1 质粒载体构建第57-60页
    2.2.2 多克隆抗体制备第60页
    2.2.3 基因缺失小鼠和突变小鼠制备第60-63页
    2.2.4 减数分裂前期精母细胞铺展第63页
    2.2.5 荧光免疫染色第63-64页
    2.2.6 精母细胞中期染色体铺展第64页
    2.2.7 精母细胞滴片第64-65页
    2.2.8 荧光原位杂交(FISH)第65页
    2.2.9 睾丸组织固定和石蜡包埋第65-66页
    2.2.10 睾丸组织石蜡切片TUNEL检测第66页
    2.2.11 Hematoxylin-PAS染色第66-67页
    2.2.12 H&E (Hematoxylin-eosin)染色第67页
    2.2.13 睾丸组织冰冻切片荧光免疫染色第67-68页
    2.2.14 精子计数第68页
    2.2.15 生育力检测第68页
    2.2.16 Western blot检测第68-69页
    2.2.17 免疫共沉淀(Co-IP)第69-70页
    2.2.18 培养的精母细胞EdU标记及分析第70页
    2.2.19 统计学显著性分析第70-71页
第3章 实验结果及讨论第71-110页
  3.1 实验结果第71-106页
    3.1.1 RAD51AP2突变与患者精子发生异常第71-74页
    3.1.2 RAD51AP2在小鼠睾丸中特异表达第74-75页
    3.1.3 RAD51AP2定位到染色体轴上依赖Spo11产生的DSBs第75-77页
    3.1.4 RAD51AP2与重组蛋白RAD51和DMC1存在共定位第77-81页
    3.1.5 Rad51ap2缺失导致小鼠精子发生异常及生育力下降第81-87页
    3.1.6 Rad51ap2缺失导致高比例精母细胞出现XY分离第87-92页
    3.1.7 Rad51ap2缺失导致假常染色体区DSBs无法修复第92-97页
    3.1.8 Rad51ap2突变小鼠表型与纯合缺失小鼠一致第97-100页
    3.1.9 Rad51ap2复合杂合突变小鼠中RAD51AP2蛋白功能丧失第100-101页
    3.1.10 截短或突变形式的RAD51AP2蛋白均丧失与RAD51互作第101-106页
  3.2 讨论及总结第106-110页
    3.2.1 Rad51ap2是调控性染色体重组的关键基因第106-108页
    3.2.2 Rad51ap2为深入理解性染色体重组机制提供新思维第108-110页
参考文献第110-144页
附录 中英文对照及缩略词第144-145页
攻读博士期间的主要学习成果第145-146页
致谢第146-147页

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