论文目录 | |
| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 前言 | 第7-11页 |
| 实验材料与方法 | 第11-49页 |
| 1. 实验材料 | 第11-16页 |
| 1.1 脂肪组织特异性敲除SIRT6基因的小鼠模型 | 第11页 |
| 1.2 菌株和细胞系 | 第11页 |
| 1.3 质粒载体 | 第11-12页 |
| 1.4 工具酶及分子量标准 | 第12页 |
| 1.5 试剂盒 | 第12页 |
| 1.6 主要化学试剂(按试剂公司分列) | 第12-14页 |
| 1.7 主要仪器及设备 | 第14页 |
| 1.8 生物信息学软件及网络资源 | 第14页 |
| 1.9 分子生物学软件 | 第14页 |
| 1.10 引物序列 | 第14-16页 |
| 2. 实验方法 | 第16-49页 |
| 2.1 脂肪组织特异性敲除SIRT6小鼠模型的构建及基因型鉴定 | 第17页 |
| 2.2 动物饲养和组织处理 | 第17-18页 |
| 2.3 测定小鼠的体重及食物摄入量 | 第18页 |
| 2.4 测定小鼠的体脂肪和瘦肉的含量 | 第18页 |
| 2.5 测定小鼠各组织的重量百分比 | 第18页 |
| 2.6 葡萄糖耐受实验和胰岛素耐受实验 | 第18-19页 |
| 2.7 测定小鼠的能量消耗情况和静息代谢率 | 第19页 |
| 2.8 利用跑步机检测小鼠的运动能力和耐力 | 第19页 |
| 2.9 利用红外成像照相仪和小动物体温计监测小鼠体温 | 第19-20页 |
| 2.10 诱导小鼠的白色脂肪组织发生棕色化 | 第20页 |
| 2.11 组织化学切片制备 | 第20页 |
| 2.12 小鼠生化、生理指标的测定 | 第20页 |
| 2.13 质粒载体的构建 | 第20-24页 |
| 2.14 细胞培养 | 第24-26页 |
| 2.15 细胞的瞬时转染 | 第26-28页 |
| 2.16 双荧光素酶报告实验测定启动子活性 | 第28-29页 |
| 2.17 脂肪来源的间充质干细胞(SVF)的分离及培养 | 第29-31页 |
| 2.18 细胞的油红O染色 | 第31-32页 |
| 2.19 原代脂肪细胞能量代谢的测定 | 第32页 |
| 2.20 总RNA提取及cDNA合成 | 第32-34页 |
| 2.21 Real-Time PCR实验 | 第34-35页 |
| 2.22 细胞蛋白质的分离制备 | 第35-37页 |
| 2.23 蛋白质印记实验(Western Blot) | 第37-42页 |
| 2.24 染色质免疫共沉淀实验(ChIP) | 第42-45页 |
| 2.25 蛋白质免疫共沉淀 | 第45页 |
| 2.26 重组腺病毒的构建 | 第45-46页 |
| 2.27 两次氯化铯密度梯度离心纯化重组腺病毒及滴度测定 | 第46-48页 |
| 2.28 统计分析 | 第48-49页 |
| 实验结果 | 第49-77页 |
| 1. SIRT6在肌肉组织中通过增强AMPK的活性调节机体能量平衡和代谢稳态 | 第49-61页 |
| 1.1 肌肉组织特异性敲除SIRT6的小鼠模型的构建与验证 | 第49-50页 |
| 1.2 肌肉组织特异性敲除SIRT6的小鼠形态学表现正常 | 第50-52页 |
| 1.3 SIRT6~(M-/-)的小鼠出现糖代谢异常、胰岛素敏感性降低等代谢紊乱 | 第52-54页 |
| 1.4 肌肉组织特异性敲除SIRT6的小鼠机体能量消耗显著降低 | 第54-55页 |
| 1.5 肌肉组织特异性敲除SIRT6的小鼠运动能力减弱 | 第55-57页 |
| 1.6 肌肉组织特异性敲除SIRT6导致AMPK活性减弱,且下游基因表达降低 | 第57-59页 |
| 1.7 过表达SIRT6的C2C12骨骼肌细胞中AMPK活性和氧化能力升高 | 第59-61页 |
| 1.8 SIRT6在骨骼肌细胞中调节代谢过程的机制模型 | 第61页 |
| 2. SIRT6在棕色脂肪和米色脂肪中调控机体的产热和能量代谢 | 第61-77页 |
| 2.1 脂肪组织中SIRT6的表达受多种刺激调控 | 第61-63页 |
| 2.2 脂肪组织中SIRT6的缺失导致小鼠出现肥胖、胰岛素抵抗和脂肪肝等症状 | 第63-66页 |
| 2.3 脂肪组织中SIRT6的缺失导致了机体能量输出减少和棕色脂肪产热功能减弱 | 第66-70页 |
| 2.4 SIRT6在维持棕色脂肪细胞特性和功能方面发挥重要作用 | 第70-72页 |
| 2.5 SIRT6对冷刺激和β肾上腺素激动剂刺激的白色脂肪棕色化过程有重要作用 | 第72-74页 |
| 2.6 SIRT6在脂肪细胞中的缺失导致结合在PGC1α启动子区的磷酸化ATF2减少,从而导致PGC1α和其下游基因表达减少 | 第74-77页 |
| 讨论 | 第77-83页 |
| 1. 关于SIRT6在肌肉组织中的特异性作用 | 第77-79页 |
| 2. 关于SIRT6在脂肪组织中的特异性作用 | 第79-83页 |
| 小结 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 综述 | 第88-98页 |
| 参考文献 | 第96-98页 |
| 附录 | 第98-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 作者简介 | 第104-106页 |
