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非特异性脂转移蛋白NtLTP4作为正调控因子参与烟草对非生物和生物胁迫的响应

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非特异性脂转移蛋白NtLTP4作为正调控因子参与烟草对非生物和生物胁迫的响应
论文目录
 
中文摘要第11-13页
Abstract第13-17页
1 引言第17-37页
  1.1 植物应对环境胁迫的分子机制第17-24页
    1.1.1 生物胁迫响应机制第17-21页
      1.1.1.1 植物固有免疫机制第17-20页
      1.1.1.2 植物系统获得性免疫机制第20-21页
    1.1.2 非生物胁迫响应机制第21-24页
      1.1.2.1 干旱胁迫响应机制第21-22页
      1.1.2.2 盐胁迫响应机制第22-24页
  1.2 非特异性脂转移蛋白家族第24-25页
    1.2.1 非特异性脂转移蛋白家族的研究进展第24-25页
    1.2.2 非特异性脂转移蛋白的结构第25页
  1.3 非特异性脂转移蛋白的生物学功能第25-29页
    1.3.1 非特异性脂转移蛋白活性第25-26页
    1.3.2 非特异性脂转移蛋白参与生物胁迫响应第26-28页
    1.3.3 非特异性脂转移蛋白参与非生物胁迫响应第28-29页
    1.3.4 非特异性脂转移蛋白参与多种代谢过程第29页
  1.4 MAPK级联信号通路第29-30页
    1.4.1 植物体内的MAPK级联途径第29-30页
  1.5 MAPK级联信号通路的生物学功能第30-36页
    1.5.1 MAPK在生物胁迫中的作用第30-32页
    1.5.2 MAPKs在非生物胁迫中的作用第32-34页
    1.5.3 MAPK在激素信号中的作用第34-35页
    1.5.4 MAPK调控植物的生长发育第35-36页
  1.6 本研究的目的与意义第36-37页
2 材料与方法第37-66页
  2.1 实验材料第37-41页
    2.1.1 植物材料第37页
    2.1.2 菌株与质粒第37页
    2.1.3 各种生化试剂第37页
    2.1.4 生物信息学相关网站第37-38页
    2.1.5 实验设计所用引物第38-41页
  2.2 实验方法第41-66页
    2.2.1 诱导表达模式分析第41页
    2.2.2 植物总RNA的提取第41-42页
    2.2.3 cDNA的合成第42页
    2.2.4 CTAB法提取植物基因组第42-43页
    2.2.5 转录水平检测第43-44页
      2.2.5.1 半定量RT-PCR(SemiquantitativeRT-PCR)第43页
      2.2.5.2 实时荧光定量PCR(Real-timequantitativePCR,qRT-PCR)第43-44页
    2.2.6 载体构建第44-48页
      2.2.6.1 目的基因PCR扩增第44-45页
      2.2.6.2 PCR扩增片段的回收第45页
      2.2.6.3 目的基因连接克隆载体第45-46页
      2.2.6.4 大肠杆菌感受态细胞的制备第46页
      2.2.6.5 大肠杆菌感受态细胞的转化过程第46页
      2.2.6.6 菌液PCR鉴定第46-47页
      2.2.6.7 质粒DNA的微量提取第47页
      2.2.6.8 酶切鉴定和回收第47-48页
      2.2.6.9 表达载体的构建第48页
    2.2.7 表达载体的农杆菌转化第48-49页
      2.2.7.1 根癌农杆菌GV3101和LBA4404感受态细胞的制备第48-49页
      2.2.7.2 冻融法转化农杆菌第49页
      2.2.7.3 电转法转化农杆菌第49页
    2.2.8 亚细胞定位分析第49-51页
      2.2.8.1 瞬时转化本生烟第49-50页
      2.2.8.2 瞬时转化洋葱表皮细胞第50页
      2.2.8.3 双光子共聚焦显微镜操作流程第50-51页
    2.2.9 农杆菌介导的叶盘法转化普通烟第51-52页
    2.2.10 转基因烟草鉴定第52页
    2.2.11 转基因烟草的非生物胁迫处理第52-53页
    2.2.12 转基因烟草的生物胁迫处理第53页
    2.2.13 植物体内离子含量的测定第53-54页
      2.2.13.1 Na~+探针荧光染色方法第53-54页
      2.2.13.2 火焰原子吸收法第54页
    2.2.14 组织化学染色方法第54-55页
    2.2.15 生理活性物质检测第55页
    2.2.16 气孔开度检测第55-56页
    2.2.17 酵母感受态细胞的制备与转化第56-57页
      2.2.17.1 醋酸锂(LiAc)法制备酵母感受态细胞第56页
      2.2.17.2 酵母感受态转化方法第56-57页
    2.2.18 酵母双杂筛选烟草cDNA文库第57-59页
      2.2.18.1 Matting法融合文库宿主菌和诱饵菌株第57-58页
      2.2.18.2 筛选互作蛋白第58页
      2.2.18.3 酵母DNA的提取第58-59页
    2.2.19 免疫共沉淀(co-IP)第59-64页
      2.2.19.1 蛋白提取第59-61页
      2.2.19.2 试剂配制第61-62页
      2.2.19.3 蛋白质SDS-PAGE凝胶电泳第62-63页
      2.2.19.4 湿法蛋白转移第63-64页
      2.2.19.5 免疫反应及化学发光法检测蛋白含量第64页
    2.2.20 双分子荧光互补实验(BIFC)和荧光素酶互补实验(LCI)第64-66页
3 结果与分析第66-92页
  3.1 NtLTP4响应多种非生物和生物胁迫第66-67页
  3.2 NtLTP4是一种分泌小蛋白,并定位于细胞外基质第67-69页
  3.3 过表达NtLTP4提高了转基因烟草植株对非生物胁迫的抗性第69-72页
    3.3.1 NtLTP4RNAi株系的获得第69页
    3.3.2 NtLTP4正调控盐胁迫和干旱胁迫第69-72页
  3.4 NtLTP4增强酵母菌株对盐胁迫和干旱胁迫的耐受性第72-73页
  3.5 NtLTP4能有效维持植物体内的Na~+稳态第73-76页
    3.5.1 NtLTP4抑制植物体过度积累Na~+第73-75页
    3.5.2 NtLTP4通过调控HKT1和NHX1提高对Na~+的清除第75-76页
  3.6 NtLTP4过表达植株提高了对青枯菌的抗性第76-81页
    3.6.1 NtLTP4降低青枯菌的发病率第76页
    3.6.2 NtLTP4通过增强抗病相关基因的表达提高对青枯菌的抗性第76-77页
    3.6.3 NtLTP4能降低植物细胞的过氧化现象第77-80页
    3.6.4 NtLTP4调控气孔开度第80-81页
  3.7 NtLTP4与WIPK互作第81-84页
  3.8 WIPK在植物的抗病防御过程中起正调控作用第84-85页
  3.9 NtLTP4位于WIPK下游,并与其协同参与抗病防御第85-89页
    3.9.1 NtLTP4位于WIPK信号下游第85-88页
    3.9.2 WIPK维持了NtLTP4的蛋白稳定性第88-89页
  3.10 NPK1-NtMEK2-WIPK-NtLTP4信号通路参与植物的抗病防御过程第89-92页
4 讨论第92-97页
5 结论第97-98页
参考文献第98-115页
致谢第115-116页
攻读学位期间发表论文情况第116页

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