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宇佐美曲霉木聚糖酶AusXyn10A的克隆表达及耐热性的改造研究

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分类:教育论文网→生物科学论文→分子生物学论文基因工程(遗传工程)论文
宇佐美曲霉木聚糖酶AusXyn10A的克隆表达及耐热性的改造研究
论文目录
 
摘要第1-5页
Abstract第5-7页
符号、变量、缩略词第7-8页
目录第8-13页
第一章 绪论第13-31页
  · 木聚糖及其降解酶系第13-14页
  · 木聚糖酶第14-16页
    · 木聚糖酶的定义第14页
    · 木聚糖酶的分类第14-15页
    · 木聚糖酶的结构域第15-16页
  · 木聚糖酶的克隆、表达及酶学特性分析第16-22页
    · 木聚糖酶基因的克隆及分析第16-17页
    · 木聚糖酶的异源表达第17页
    · 木聚糖酶的酶学性质第17-19页
    · 木聚糖酶的空间结构第19-21页
    · 木聚糖酶的催化机制第21-22页
  · 木聚糖酶的应用第22-24页
    · 饲料工业第22-23页
    · 造纸工业第23页
    · 低聚木糖的生产第23页
    · 能源工业第23-24页
    · 其它工业第24页
    · 木聚糖酶工业应用的限制第24页
  · 木聚糖酶热稳定性的研究进展第24-29页
    · 影响木聚糖酶热稳定性的因素第24-27页
    · GH 10 家族木聚糖酶热稳定性的分子改造第27-29页
  · 论文的立题依据及主要研究内容第29-31页
    · 立题依据和研究意义第29页
    · 论文的主要研究内容第29-31页
第二章 木聚糖酶基因 Ausxyn10A 的克隆及序列分析第31-45页
  · 引言第31页
  · 材料与方法第31-37页
    · 菌株和试剂盒第31页
    · 培养基及相关试剂第31页
    · 引物设计及合成第31-32页
    · RNA 及基因组 DNA 的提取第32页
    · Ausxyn10A cDNA 序列的克隆第32-34页
    · Ausxyn10A DNA 序列的克隆第34-36页
    · 重组克隆质粒的构建、转化及鉴定第36-37页
    · AusXyn10A 基因序列及其推测氨基酸序列的分析第37页
  · 结果与讨论第37-43页
    · Ausxyn10A 完整 cDNA 序列的克隆第37-38页
    · Ausxyn10A DNA 序列的克隆第38-39页
    · Ausxyn10A 基因序列的分析第39页
    · AusXyn10A 氨基酸序列的分析第39-43页
    · Ausxyn10A 与 GH 11 家族木聚糖酶 XynI 序列的比对分析第43页
  · 本章小结第43-45页
第三章 木聚糖酶基因 Ausxyn10A 在 P.pastoris 中的表达第45-66页
  · 引言第45页
  · 材料与方法第45-51页
    · 菌种和试剂第45-46页
    · 主要溶液与培养基配制第46页
    · 引物的设计与合成第46页
    · 天然 N 端表达质粒 pPIC9KM的构建第46-47页
    · 成熟肽基因的克隆及重组表达质粒的构建第47-48页
    · 重组毕赤酵母的构建、筛选与表达第48-49页
    · 表达产物的分析第49页
    · 重组子的发酵条件优化第49-50页
    · 重组木聚糖酶的分离纯化第50页
    · 酶学性质测定第50-51页
    · AusXyn10A 水解条件优化第51页
  · 结果与讨论第51-65页
    · pPIC9KM质粒的构建第51-54页
    · 成熟肽基因 Ausxyn10A 的克隆第54-55页
    · pPIC9KM-Ausxyn10A 的构建第55页
    · GS115/Ausxyn10A 的构建、筛选及表达第55-56页
    · GS115/Ausxyn10A 诱导表达条件优化第56-59页
    · reAusXyn10A 的分离纯化第59-61页
    · reAusXyn10A 酶学性质的分析第61-62页
    · 玉米芯木聚糖的酶解条件优化第62-65页
  · 本章小结第65-66页
第四章 N/C 端片段替换对木聚糖酶 AusXyn10A 热稳定性的影响第66-87页
  · 引言第66-67页
  · 材料与方法第67-71页
    · 菌种和试剂第67页
    · 主要溶液与培养基配制第67页
    · 相关分析软件第67页
    · 耐热木聚糖酶查找第67页
    · 同源建模与分子动力学模拟第67页
    · C 端片段替换杂合酶 AusXynCRC1 基因的构建第67-68页
    · C 端片段替换杂合酶 AusXynCRC2 基因的构建第68-69页
    · N 端片段替换杂合酶 AusXynCRN1 基因的构建第69-70页
    · N 端片段替换杂合酶 AusXynCRN2 基因的构建第70页
    · 重组表达质粒的构建第70页
    · 毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达第70页
    · 表达产物的鉴定与分析第70-71页
    · 重组酶的分离纯化第71页
    · 酶学性质测定第71页
  · 结果与讨论第71-84页
    · C 端片段替换第71-72页
    · N 端片段替换第72-75页
    · 杂合酶基因的构建第75-77页
    · 重组表达质粒的构建第77-78页
    · 毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达第78-79页
    · 重组木聚糖酶的分离纯化第79-80页
    · 酶学性质的分析第80-83页
    · 热稳定性变化的机理解析第83-84页
  · 本章小结第84-87页
第五章 二硫键的添加对木聚糖酶 AusXyn10A 热稳定性的影响第87-98页
  · 引言第87页
  · 材料与方法第87-90页
    · 菌种和试剂第87页
    · 主要溶液与培养基配制第87-88页
    · 相关分析软件第88页
    · AusXyn10A 中二硫键的理性引入第88页
    · 引物设计第88页
    · 突变酶 D7C/G42C 基因的构建第88-89页
    · 突变酶 S246C/A297C 基因的构建第89页
    · 重组表达质粒的构建第89-90页
    · 毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达第90页
    · 表达产物的鉴定与分析第90页
    · 重组酶的分离纯化第90页
    · 酶学性质测定第90页
    · 游离半胱氨酸测定第90页
  · 结果与讨论第90-97页
    · 二硫键的设计第90-91页
    · 突变酶 D7C/G42C 基因的构建第91-92页
    · 突变酶 S246C/A297C 基因的构建第92-93页
    · 重组表达质粒的构建第93页
    · 毕赤酵母重组子的构建、筛选及表达第93-94页
    · 重组木聚糖酶的分离纯化第94-95页
    · 酶学性质的分析第95-97页
  · 本章小结第97-98页
第六章 木聚糖酶 AusXyn10A 热稳定性的半理性设计第98-119页
  · 引言第98页
  · 材料与方法第98-103页
    · 菌种和试剂第98页
    · 主要溶液与培养基配制第98页
    · 相关分析软件第98-99页
    · AusXyn10A 在大肠杆菌中的表达第99-100页
    · 分子动力学模拟及 B-factor 值计算第100页
    · 拟突变位点的分析与选择第100页
    · 突变酶基因的构建第100-102页
    · 重组表达质粒的构建第102页
    · 表达产物的鉴定与分析第102-103页
    · 酶学性质测定第103页
    · 同源建模及三维结构比对第103页
    · 耐热突变子的组合第103页
  · 结果与讨论第103-117页
    · AusXyn10A 在大肠杆菌中的表达及酶学性质分析第103-106页
    · B-factor 值计算结果分析及拟突变位点的选择第106-108页
    · 突变基因的构建及转化第108-109页
    · 重组子表达及筛选第109页
    · S278 突变子的筛选及热稳定性分析第109-111页
    · S280 突变子的筛选及热稳定性分析第111-113页
    · R59 突变子的筛选及热稳定性分析第113-114页
    · 突变酶的热稳定性变化机理分析第114-116页
    · 耐热突变子的组合第116-117页
  · 本章小结第117-119页
主要结论与展望第119-122页
  主要结论第119-121页
  展望第121-122页
论文主要创新点第122-123页
致谢第123-124页
参考文献第124-132页
附录: 作者在攻读博士学位期间发表的论文第132页

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