论文目录 | |
中文摘要 | 第1-10
页 |
英文摘要 | 第10-14
页 |
前言 | 第14-21
页 |
第一部分 质粒DNA的扩增、提取和纯化 | 第21-34
页 |
1 仪器与试药 | 第22-25
页 |
· 商品试剂盒与主要试剂 | 第22
页 |
· 细菌培养基 | 第22
页 |
· 主要溶液的配制 | 第22-24
页 |
· 菌株和质粒 | 第24
页 |
· 实验仪器 | 第24-25
页 |
2 实验方法与结果 | 第25-29
页 |
· 质粒DNA的扩增 | 第25-26
页 |
· 质粒DNA的提取和纯化 | 第26-27
页 |
· 质粒DNA的产量 | 第27-28
页 |
· 质粒DNA的纯度分析 | 第28-29
页 |
3 小结和讨论 | 第29-34
页 |
· 基因治疗对质粒载体的要求 | 第29-30
页 |
· 大规模分离纯化质粒DNA的关键操作 | 第30-31
页 |
· 质粒DNA的分光光度法测定 | 第31
页 |
· 基因治疗用质粒DNA的质量评价指标 | 第31-34
页 |
第二部分 载基因纳米脂质体制备工艺的研究 | 第34-58
页 |
1 仪器和试剂 | 第35
页 |
· 主要试剂 | 第35
页 |
· 实验仪器 | 第35
页 |
2 实验方法与结果 | 第35-53
页 |
· 质粒DNA含量测定方法的建立 | 第35-38
页 |
· 载基因纳米脂质体的制备 | 第38-53
页 |
3 小结和讨论 | 第53-58
页 |
· 脂质体基因传递系统 | 第53
页 |
· 荧光分光光度法测定DNA的含量 | 第53-54
页 |
· 载基因纳米脂质体的制备方法 | 第54-58
页 |
第三部分 载基因纳米脂质体体外细胞学试验研究 | 第58-85
页 |
1 仪器与试剂 | 第58-61
页 |
· 试剂盒与主要试剂 | 第58-59
页 |
· 细胞株 | 第59
页 |
· 细胞培养基及主要溶液的配制 | 第59-60
页 |
· 实验仪器 | 第60-61
页 |
2 实验方法 | 第61-67
页 |
· 细胞复苏 | 第61
页 |
· 细胞传代 | 第61
页 |
· 细胞转染 | 第61-62
页 |
· X-gal染色观察pORF-LacZ的转染效果 | 第62
页 |
· pORF-LacZ的转染率测定 | 第62-64
页 |
· pEYFP-C1-P27转染效果的观察 | 第64-65
页 |
· pEYFP-C1-p27转染率的测定 | 第65
页 |
· 空白纳米脂质体的细胞毒性研究 | 第65
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞的生长抑制试验 | 第65-66
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞细胞周期的影响 | 第66
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第66
页 |
· 统计学分析 | 第66-67
页 |
3 实验结果 | 第67-78
页 |
· β-半乳糖苷酶在肿瘤细胞中的表达 | 第67-70
页 |
· EYFP在肿瘤细胞中的表达 | 第70-72
页 |
· 空白脂质体的细胞毒性评价 | 第72-73
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞的生长抑制作用 | 第73-74
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞细胞周期的影响 | 第74
页 |
· p27-DNLs对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第74-78
页 |
4 小结和讨论 | 第78-85
页 |
· 报告基因 | 第78-79
页 |
· DNLs能够介导报告基因在肿瘤细胞中表达 | 第79-81
页 |
· BCA法测定蛋白的原理 | 第81
页 |
· 四唑盐(MTT)比色法 | 第81-82
页 |
· 空白脂质体对细胞无明显毒性 | 第82
页 |
· p27-DNLs可以明显抑制肿瘤细胞的生长 | 第82-85
页 |
第四部分 载基因纳米脂质体冻干粉针剂的研究 | 第85-98
页 |
1 仪器和试剂 | 第85-86
页 |
· 主要仪器 | 第85-86
页 |
· 主要试剂 | 第86
页 |
2 方法与结果 | 第86-95
页 |
· DNLS冻干针剂的处方及制备工艺研究 | 第87-90
页 |
· DNLs冻干粉针剂质量评价 | 第90-95
页 |
3 小结与讨论 | 第95-98
页 |
· 冷冻干燥后的DNLs | 第95
页 |
· 冷冻干燥技术 | 第95-96
页 |
· 冻干保护剂的作用 | 第96
页 |
· DNLs冻干粉针剂中DNA的生物活性 | 第96-98
页 |
第五部分 p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂对肺转移肿瘤小鼠的治疗实验研究 | 第98-127
页 |
1 仪器与试药 | 第99-101
页 |
· 实验设备 | 第99-100
页 |
· 主要试剂 | 第100
页 |
· 实验动物 | 第100-101
页 |
· 细胞株 | 第101
页 |
2 实验方法与结果 | 第101-109
页 |
· pEYFP-C1-p27-DNLs冻干粉针剂在小鼠体内的表达分布研究 | 第101
页 |
· p27-LPDs冻干粉针剂的制备 | 第101-102
页 |
· 小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第102
页 |
· 预试 | 第102-103
页 |
· 给药 | 第103-106
页 |
· 荷瘤小鼠的治疗效果观察 | 第106
页 |
· 抗结肠癌肺转移作用观察 | 第106
页 |
· 组织学及病理学观察 | 第106-107
页 |
· p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂体内抗肿瘤作用的初步机理探讨 | 第107-108
页 |
· 统计学分析 | 第108-109
页 |
3 实验结果 | 第109-119
页 |
· EYFP在小鼠体内的表达分布 | 第109-111
页 |
· p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂可以抑制结肠癌肺转移及肿瘤的生长 | 第111-116
页 |
· p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂可以延长荷瘤小鼠的生存周期 | 第116-117
页 |
· 免疫组化检测肺组织中p27~(kip1)的表达 | 第117
页 |
· p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂联合小剂量顺铂副作用的观察 | 第117-119
页 |
4 小结和讨论 | 第119-127
页 |
· DNLs可以介导外源基因经静脉注射在小鼠体内表达 | 第119-120
页 |
· 小鼠肺转移肿瘤模型的建立 | 第120
页 |
· p27~(kip1)体内基因治疗 | 第120-121
页 |
· p27-DNLs冻干粉针剂及p27-LPDs冻干粉针剂联合小剂量顺铂治疗小鼠肺转移肿瘤 | 第121-123
页 |
· 免疫组织化学检测目的蛋白在小鼠体内的表达 | 第123-127
页 |
结论 | 第127-129
页 |
综述 | 第129-147
页 |
致谢 | 第147-148
页 |
作者简介 | 第148-150
页 |