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O-GlcNAc水解酶OGA在溃疡性结肠炎中的作用和机制研究

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O-GlcNAc水解酶OGA在溃疡性结肠炎中的作用和机制研究
论文目录
 
缩略语表第1-10页
摘要第10-13页
ABSTRACT第13-16页
前言第16-17页
文献回顾第17-29页
第一部分 炎症性肠病第17-20页
1.概述第17页
2.影响IBD发病率的因素第17-20页
  2.1 遗传因素影响IBD的发生发展第17-18页
  2.2 环境暴露因素在IBD的发生发展中有重要作用第18-19页
  2.3 肠道微菌群与IBD的关系密切第19页
  2.4 卫生基础设施影响IBD的发病率第19-20页
第二部分 O-GLCNAC糖基化修饰第20-29页
1 概述第20-21页
  1.1 O-GlcNAc糖基化修饰是蛋白翻译后修饰的一种重要形式第20页
  1.2 O-GlcNAc糖基化修饰由唯一的一对酶OGT和OGA调控第20-21页
2.O-GlcNAc的主要功能第21-24页
  2.1 O-GlcNAc参与转录调控第21-22页
  2.2 O-GlcNAc对表观遗传的调控第22-23页
  2.3 O-GlcNAc动态调控细胞信号传导第23-24页
3.O-GlcNAc与炎症相关疾病第24-27页
  3.1 O-GlcNAc通过NFκB通路影响炎症第25-26页
    3.1.1 O-GlcNAc修饰增强NFκB的转录活性第25-26页
    3.1.2 O-GlcNAcylation参与NFκB活性的负调节剂第26页
  3.2 O-GlcNAc对免疫细胞的影响第26-27页
4.OGA、OGT和O-GlcNAc在炎症性肠病中的作用和机制尚不明确第27-29页
第一部分 人溃疡性结肠炎样本中OGA、OGT和O-GLCNAC蛋白表达水平观察第29-39页
1 样本和材料第29-31页
  1.1 样本来源第29页
  1.2 主要试剂和药物第29-30页
  1.3 主要仪器和器材第30-31页
2 方法第31-36页
  2.1 样本收集第31-32页
    2.1.1 病例选择第31-32页
    2.1.2 知情同意第32页
    2.1.3 样本采集与处理第32页
  2.2 UC组织蛋白印迹实验(Western Blot,WB)第32-34页
    2.2.1 提取UC组织总蛋白第32-33页
    2.2.2 BCA法蛋白定量第33页
    2.2.3 蛋白质聚丙烯酰胺凝胶电泳第33-34页
  2.3 免疫组织化学第34页
  2.4 实时定量聚合酶链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)第34-36页
    2.4.1 组织RNA的提取第34-35页
    2.4.2 RT-PCR第35-36页
    2.4.3 qRT-PCR第36页
3 结果第36-38页
  3.1 UC组织蛋白印迹、免疫组化和mRNA水平实验结果第36-38页
4.讨论第38-39页
第二部分 构建OGA肠上皮特异敲除和过表达小鼠模型第39-51页
1 材料第39-40页
  1.1 实验动物第39-40页
    1.1.1 小鼠来源第39-40页
    1.1.2 饲养条件第40页
  1.2 主要试剂第40页
  1.3 主要仪器及器材第40页
2 方法第40-45页
  2.1 采用Cre/Loxp系统分别构建OGA肠上皮特异敲除和过表达小鼠第40-43页
    2.1.1 通过基因改造和筛选获得Oga~(flox-neo/+)小鼠第40-42页
    2.1.2 OGA肠上皮特异敲除小鼠的构建第42-43页
    2.1.3 OGA肠上皮过表达小鼠的构建第43页
  2.2 小鼠琼脂糖电泳基因型鉴定第43-45页
    2.2.1 鼠尾DNA提取第43页
    2.2.2 鼠尾DNA聚合酶链式反应(PCR)第43-44页
    2.2.3 琼脂糖凝胶电泳及基因型鉴定第44-45页
  2.3 组织标本采集第45页
    2.3.1 组织固定第45页
    2.3.2 组织RNA Later固定和液氮保存第45页
  2.4 组织蛋白印迹实验(Western Blot,WB)和组织免疫组织化学第45页
    2.4.1 小鼠组织总蛋白提取第45页
    2.4.2 免疫组织化学第45页
3 结果第45-50页
  3.1 OGA-IKO和OGA-IKI小鼠基因型鉴定结果第45-47页
    3.1.1 OGA-IKO小鼠基因型鉴定结果第45-46页
    3.1.2 OGA-IKI小鼠基因型鉴定结果第46-47页
  3.2 OGA-IKO和OGA-IKI小鼠模型验证第47-50页
    3.2.1 OGA-IKO小鼠验证第47-49页
    3.2.2 OGA-IK1小鼠验证第49-50页
4.讨论第50-51页
第三部分 OGA肠上皮特异敲除在DSS诱导的结肠炎中发挥保护作用第51-56页
1 材料第51-52页
  1.1 实验动物第51页
  1.2 主要试剂及药物第51页
  1.3 主要仪器及器材第51-52页
2 方法第52-53页
  2.1 小鼠分组第52页
  2.2 葡聚糖硫酸钠诱导小鼠小鼠结肠炎及表型观察第52页
    2.2.1 DSS溶液配制第52页
    2.2.2 小鼠结肠炎造模方法第52页
  2.3 损伤和炎症程度的评估第52-53页
  2.4 免疫组化和Western blot第53页
  2.5 数据处理第53页
3 结果第53-56页
  3.1 OGA肠上皮特异敲除后对DSS敏感性下降第53-54页
  3.2 OGA肠上皮特异敲除后结肠组织炎症及病理学改变减轻第54-56页
4.讨论第56页
第四部分 OGA敲减和过表达细胞系的建立第56-60页
1.材料第56-57页
  1.1 实验细胞和转染病毒第56-57页
  1.2 主要试剂及药物第57页
  1.3 主要仪器及器材第57页
2 方法第57-59页
  2.1 试剂的配制第57页
细胞培养基的配制第57页
  2.2 细胞培养第57-58页
    2.2.1 细胞复苏第57-58页
    2.2.2 细胞传代第58页
    2.2.3 细胞冻存第58页
  2.3 细胞病毒转染第58页
  2.4 OGA敲减细胞系和OGA过表达细胞系验证第58-59页
    2.4.1 细胞总蛋白提取第58-59页
    2.4.2 Western Blot验证细胞OGA敲减/过表达效率第59页
3.结果第59-60页
  3.1 OGA敲除/过表达细胞系验证第59-60页
4.讨论第60页
第五部分 OGA敲减通过促进细胞凋亡并影响内质网功能减轻炎症反应第60-65页
1.材料第60-61页
  1.1 实验细胞第60页
  1.2 主要试剂及药物第60-61页
  1.3 主要仪器及器材第61页
2 方法第61页
  2.1 OGA敲减细胞系细胞周期和凋亡的检测第61页
    2.1.1 样本制备第61页
    2.1.2 凋亡和周期的检测第61页
  2.2 细胞和小鼠结肠组织透射电镜检测第61页
  2.3 数据处理第61页
3.结果第61-63页
  3.1 OGA敲除后促进细胞凋亡第61-62页
  3.2 OGA敲除后促进细胞内质网增生并影响内质网应激相关蛋白表达第62-63页
    3.2.1 OGA敲减促进内质网增生第62-63页
    3.2.2 OGA敲减引起内质网应激相关蛋白改变第63页
4 讨论第63-65页
第六部分 OGA肠上皮特异敲除改变肠道菌群减轻DSS诱导的结肠炎症反应第65-71页
1 材料第65页
  1.1 实验动物第65页
  1.2 主要试剂及药物第65页
  1.3 主要仪器及器材第65页
2 方法第65-66页
  2.1 小鼠分组第65页
  2.2 样本采集及送检第65页
  2.3 16SrDNA测序第65-66页
3 结果第66-70页
  3.1 OGA肠上皮敲除后小鼠肠道菌群的多样性增加第66-67页
  3.2 绘制物种丰度柱状图第67-69页
  3.3 OGA肠上皮敲除后抗炎菌群丰度增加促炎菌群丰度减少第69-70页
4 讨论第70-71页
小结第71-73页
参考文献第73-85页
个人简历和研究成果第85-86页
致谢第86页

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