论文目录 | |
摘要 | 第11-13页 |
Abstract | 第13-14页 |
第一章 前言 | 第14-34页 |
1 孤儿核受体Nur77 | 第14-22页 |
1.1 Nu77概述 | 第14页 |
1.2 Nur77的结构 | 第14-15页 |
1.3 Nur77的调控方式 | 第15-17页 |
1.3.1 通过基因转录方式调控 | 第15-17页 |
1.3.2 通过蛋白相互作用方式调控 | 第17页 |
1.3.3 通过Nur77亚细胞定位方式调控 | 第17页 |
1.4 Nur77的蛋白修饰 | 第17-20页 |
1.4.1 Nur77的磷酸化修饰 | 第18-19页 |
1.4.2 Nur77的其他类型的蛋白修饰 | 第19-20页 |
1.5 Nur77的生物学功能 | 第20-22页 |
1.5.1 Nur77与细胞凋亡 | 第20页 |
1.5.2 Nur77与细胞代谢 | 第20-21页 |
1.5.3 Nur77与细胞自噬 | 第21-22页 |
2 ERK1/2信号通路 | 第22-32页 |
2.1 ERK1/2概述 | 第22页 |
2.2 ERK1/2信号通路 | 第22-23页 |
2.3 ERK1/2信号通路的调控方式 | 第23-30页 |
2.3.1 信号的持续时间与强度 | 第24-26页 |
2.3.2 支架蛋白 | 第26-28页 |
2.3.3 亚细胞定位 | 第28页 |
2.3.4 ERK级联各层相互影响以及与其他信号通路的共同调控 | 第28-29页 |
2.3.5 ERK级联各层激酶亚型 | 第29-30页 |
2.4 ERK1/2信号通路的生物学功能 | 第30-32页 |
2.4.1 ERK1/2参与细胞增殖和分化 | 第30页 |
2.4.2 ERK1/2信号通路参与细胞迁移 | 第30页 |
2.4.3 ERK1/2信号通路参与细胞凋亡 | 第30-31页 |
2.4.4 ERK1/2信号通路参与溶酶体介导的细胞死亡与细胞自噬 | 第31-32页 |
2.4.5 ERK1/2信号通路与细胞衰老 | 第32页 |
2.4.6 ERK1/2信号通路与ROS | 第32页 |
3 研究目的及意义 | 第32-34页 |
第二章 材料与方法 | 第34-52页 |
1 实验材料 | 第34-37页 |
1.1 主要试剂和药品 | 第34-35页 |
1.2 主要仪器 | 第35-36页 |
1.3 细胞株 | 第36-37页 |
1.4 实验小鼠 | 第37页 |
1.5 质粒载体及菌株 | 第37页 |
2 实验方法 | 第37-52页 |
2.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第37-38页 |
2.2 质粒转化 | 第38页 |
2.3 质粒提取 | 第38-39页 |
2.3.1 小规模质粒提取-碱裂解法 | 第38-39页 |
2.3.2 小提中量质粒提取 | 第39页 |
2.4 质粒的构建 | 第39-40页 |
2.5 细胞培养 | 第40-41页 |
2.6 细胞转染 | 第41-42页 |
2.6.1 磷酸钙转染法 | 第41页 |
2.6.2 Entranster~(TM)-D-4000转染 | 第41页 |
2.6.3 慢病毒感染 | 第41-42页 |
2.7 His标签融合蛋白的表达与纯化 | 第42页 |
2.8 蛋白提取和Western Blotting | 第42-44页 |
2.9 免疫沉淀 | 第44页 |
2.10 不完全体外磷酸化 | 第44-45页 |
2.11 线粒体分离 | 第45-46页 |
2.12 细胞免疫荧光观察 | 第46页 |
2.13 荧光素酶活性检测 | 第46-47页 |
2.14 流式细胞术测定细胞存活率 | 第47-48页 |
2.15 细胞总ROS和线粒体ROS检测 | 第48页 |
2.16 NADP~+/NADPH检测 | 第48-49页 |
2.17 GSSG/GSH检测 | 第49-50页 |
2.18 细胞内ATP含量测定 | 第50页 |
2.19 小鼠模型 | 第50-51页 |
2.19.1 小鼠肺转移模型 | 第50-51页 |
2.19.2 小鼠CTC (Circulating Tumor Cell)模型 | 第51页 |
2.20 HE染色 | 第51-52页 |
第三章 结果与分析 | 第52-80页 |
3.1 Nur77对无糖刺激引发的黑色素瘤细胞死亡具有保护作用 | 第52-57页 |
3.1.1 敲低Nur77增强黑色素瘤细胞对无糖刺激的敏感性 | 第52-54页 |
3.1.2 Nur77对黑色素瘤细胞应对无谷氨酰胺/血清刺激无作用 | 第54-57页 |
3.2 Nur77在无糖刺激条件下的应答机制 | 第57-62页 |
3.2.1 Nur77增加细胞内的还原力 | 第57-59页 |
3.2.2 Nur77降低细胞内的ROS | 第59-61页 |
3.2.3 Nur77提高细胞内ATP水平 | 第61-62页 |
3.3 Nur77在无糖刺激条件下的调控方式 | 第62-76页 |
3.3.1 Nur77不依赖转录激活能力调控黑色素瘤细胞在无糖刺激条件下的应激 | 第62-63页 |
3.3.2 无糖刺激诱导Nur77磷酸化 | 第63-71页 |
3.3.2.1 无糖刺激激活MAPK信号通路中蛋白激酶ERK | 第64-66页 |
3.3.2.2 无糖条件下ERK2磷酸化Nur77 | 第66-69页 |
3.3.2.3 ERK2磷酸化Nur77的S237 | 第69-71页 |
3.3.3 无糖刺激诱导Nur77的亚细胞定位 | 第71-76页 |
3.3.3.1 无糖刺激诱导Nur77定位线粒体 | 第71-73页 |
3.3.3.2 ERK2磷酸化Nur77是其进入线粒体的前提条件 | 第73-76页 |
3.4 无糖条件下Nur77磷酸化并定位线粒体进而保护黑色素瘤细胞 | 第76-77页 |
3.5 Nur77在黑色素瘤中的生物学功能 | 第77-80页 |
第四章 讨论与展望 | 第80-82页 |
参考文献 | 第82-92页 |
致谢 | 第92页 |