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无糖刺激条件下核受体Nur77发生磷酸化促进黑色素瘤细胞存活

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无糖刺激条件下核受体Nur77发生磷酸化促进黑色素瘤细胞存活
论文目录
 
摘要第11-13页
Abstract第13-14页
第一章 前言第14-34页
1 孤儿核受体Nur77第14-22页
  1.1 Nu77概述第14页
  1.2 Nur77的结构第14-15页
  1.3 Nur77的调控方式第15-17页
    1.3.1 通过基因转录方式调控第15-17页
    1.3.2 通过蛋白相互作用方式调控第17页
    1.3.3 通过Nur77亚细胞定位方式调控第17页
  1.4 Nur77的蛋白修饰第17-20页
    1.4.1 Nur77的磷酸化修饰第18-19页
    1.4.2 Nur77的其他类型的蛋白修饰第19-20页
  1.5 Nur77的生物学功能第20-22页
    1.5.1 Nur77与细胞凋亡第20页
    1.5.2 Nur77与细胞代谢第20-21页
    1.5.3 Nur77与细胞自噬第21-22页
2 ERK1/2信号通路第22-32页
  2.1 ERK1/2概述第22页
  2.2 ERK1/2信号通路第22-23页
  2.3 ERK1/2信号通路的调控方式第23-30页
    2.3.1 信号的持续时间与强度第24-26页
    2.3.2 支架蛋白第26-28页
    2.3.3 亚细胞定位第28页
    2.3.4 ERK级联各层相互影响以及与其他信号通路的共同调控第28-29页
    2.3.5 ERK级联各层激酶亚型第29-30页
  2.4 ERK1/2信号通路的生物学功能第30-32页
    2.4.1 ERK1/2参与细胞增殖和分化第30页
    2.4.2 ERK1/2信号通路参与细胞迁移第30页
    2.4.3 ERK1/2信号通路参与细胞凋亡第30-31页
    2.4.4 ERK1/2信号通路参与溶酶体介导的细胞死亡与细胞自噬第31-32页
    2.4.5 ERK1/2信号通路与细胞衰老第32页
    2.4.6 ERK1/2信号通路与ROS第32页
3 研究目的及意义第32-34页
第二章 材料与方法第34-52页
1 实验材料第34-37页
  1.1 主要试剂和药品第34-35页
  1.2 主要仪器第35-36页
  1.3 细胞株第36-37页
  1.4 实验小鼠第37页
  1.5 质粒载体及菌株第37页
2 实验方法第37-52页
  2.1 大肠杆菌感受态的制备第37-38页
  2.2 质粒转化第38页
  2.3 质粒提取第38-39页
    2.3.1 小规模质粒提取-碱裂解法第38-39页
    2.3.2 小提中量质粒提取第39页
  2.4 质粒的构建第39-40页
  2.5 细胞培养第40-41页
  2.6 细胞转染第41-42页
    2.6.1 磷酸钙转染法第41页
    2.6.2 Entranster~(TM)-D-4000转染第41页
    2.6.3 慢病毒感染第41-42页
  2.7 His标签融合蛋白的表达与纯化第42页
  2.8 蛋白提取和Western Blotting第42-44页
  2.9 免疫沉淀第44页
  2.10 不完全体外磷酸化第44-45页
  2.11 线粒体分离第45-46页
  2.12 细胞免疫荧光观察第46页
  2.13 荧光素酶活性检测第46-47页
  2.14 流式细胞术测定细胞存活率第47-48页
  2.15 细胞总ROS和线粒体ROS检测第48页
  2.16 NADP~+/NADPH检测第48-49页
  2.17 GSSG/GSH检测第49-50页
  2.18 细胞内ATP含量测定第50页
  2.19 小鼠模型第50-51页
    2.19.1 小鼠肺转移模型第50-51页
    2.19.2 小鼠CTC (Circulating Tumor Cell)模型第51页
  2.20 HE染色第51-52页
第三章 结果与分析第52-80页
  3.1 Nur77对无糖刺激引发的黑色素瘤细胞死亡具有保护作用第52-57页
    3.1.1 敲低Nur77增强黑色素瘤细胞对无糖刺激的敏感性第52-54页
    3.1.2 Nur77对黑色素瘤细胞应对无谷氨酰胺/血清刺激无作用第54-57页
  3.2 Nur77在无糖刺激条件下的应答机制第57-62页
    3.2.1 Nur77增加细胞内的还原力第57-59页
    3.2.2 Nur77降低细胞内的ROS第59-61页
    3.2.3 Nur77提高细胞内ATP水平第61-62页
  3.3 Nur77在无糖刺激条件下的调控方式第62-76页
    3.3.1 Nur77不依赖转录激活能力调控黑色素瘤细胞在无糖刺激条件下的应激第62-63页
    3.3.2 无糖刺激诱导Nur77磷酸化第63-71页
      3.3.2.1 无糖刺激激活MAPK信号通路中蛋白激酶ERK第64-66页
      3.3.2.2 无糖条件下ERK2磷酸化Nur77第66-69页
      3.3.2.3 ERK2磷酸化Nur77的S237第69-71页
    3.3.3 无糖刺激诱导Nur77的亚细胞定位第71-76页
      3.3.3.1 无糖刺激诱导Nur77定位线粒体第71-73页
      3.3.3.2 ERK2磷酸化Nur77是其进入线粒体的前提条件第73-76页
  3.4 无糖条件下Nur77磷酸化并定位线粒体进而保护黑色素瘤细胞第76-77页
  3.5 Nur77在黑色素瘤中的生物学功能第77-80页
第四章 讨论与展望第80-82页
参考文献第82-92页
致谢第92页

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