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终极腐霉果胶裂解酶基因原核表达及致病性检测
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终极腐霉果胶裂解酶基因原核表达及致病性检测
论文目录
 
中文摘要第1-6页
Abstract第6-8页
目录第8-12页
第一章 前言第12-25页
　　1 番茄茎基腐病及腐霉病害第12-20页
　　　　· 番茄茎基腐病的危害及其主要症状第12-13页
　　　　· 番茄茎基腐病的病原研究第13页
　　　　· 番茄茎基腐病的传播途径及其发病规律第13页
　　　　· 番茄茎基腐病害防治第13-14页
　　　　· 腐霉病害的防治第14-16页
　　　　· 腐霉致病机制研究进展第16-20页
　　　　　　· 水解酶类第16-17页
　　　　　　· 信号转导因子第17页
　　　　　　· 机械作用第17-18页
　　　　　　· 生长代谢物质第18页
　　　　　　· 毒素第18-20页
　　2 果胶裂解酶研究进展第20-21页
　　　　· 果胶及果胶酶第20页
　　　　· 果胶裂解酶第20-21页
　　　　· 果胶裂解酶的作用机理第21页
　　3 原核表达系统第21-23页
　　　　· 大肠杆菌第21-22页
　　　　· 原核表达载体上的重要原件第22-23页
　　　　· 大肠杆菌表达载体的种类第23页
　　4 本研究的目的意义第23-25页
第二章 终极腐霉鉴定及果胶裂解酶酶活检测第25-32页
　　1 材料与方法第25-28页
　　　　· 菌株第25页
　　　　· 试剂第25页
　　　　· 引物第25页
　　　　· 仪器设备第25-26页
　　　　· 培养基及溶液第26页
　　　　· 菌体培养和保存第26-27页
　　　　· CTAB 法提取 Pythium ultimum 基因组 DNA第27页
　　　　· Pythium ultimum ITS 序列扩增第27页
　　　　· 目的片段回收第27-28页
　　　　· 果胶裂解酶粗酶制备第28页
　　　　· 果胶裂解酶酶活测定第28页
　　2 结果分析第28-31页
　　　　· 终极腐霉形态鉴定第28-29页
　　　　· 终极腐霉 ITS 序列鉴定第29-30页
　　　　· 果胶裂解酶酶活测定第30页
　　　　　　· 标准曲线与酶活第30页
　　　　· 菌丝干重第30-31页
　　3 小结与讨论第31-32页
第三章 终极腐霉果胶裂解酶基因原核表达第32-44页
　　1 材料与方法第32-38页
　　　　· 菌株和质粒第32页
　　　　· 试剂第32页
　　　　· 仪器第32-33页
　　　　· 培养基及溶液配制第33-34页
　　　　· 菌体培养和保存第34页
　　　　· CTAB 法提取终极腐霉基因组 DNA第34页
　　　　· 碱裂解法提取质粒第34-35页
　　　　· 目的基因选择及引物设计第35页
　　　　· 果胶裂解酶基因序列克隆第35页
　　　　· 果胶裂解酶基因表达序列扩增第35-36页
　　　　· 目的基因连接转化第36页
　　　　· 阳性转化子鉴定第36-37页
　　　　· 果胶裂解酶诱导表达第37页
　　　　· 直接法裂解细胞提取蛋白第37页
　　　　· SDS-PAGE 凝胶的制备第37-38页
　　　　· 诱导蛋白检测：第38页
　　2 结果分析第38-44页
　　　　· 果胶裂解酶基因克隆第38-39页
　　　　· 信号肽分析第39页
　　　　· 表达序列扩增第39-40页
　　　　· 果胶裂解酶基因转化及阳性转化子鉴定第40-41页
　　　　· 重组子转化第41-42页
　　　　· 果胶裂解酶 PAGE第42页
　　　　· 小结与讨论第42-44页
第四章 终极腐霉致病性分析第44-49页
　　1 材料与方法第44-46页
　　　　· 菌株第44页
　　　　· 试剂第44页
　　　　· 实验仪器第44页
　　　　· 培养基及溶液第44页
　　　　· RNA 的提取第44-45页
　　　　· 反转录第45页
　　　　· Real Time-PCR第45-46页
　　2 结果分析第46-48页
　　　　· 接菌结果第46-47页
　　　　· 荧光定量分析结果第47-48页
　　3 小结与讨论第48-49页
第五章 终极腐霉果胶裂解酶基因敲除载体的构建第49-57页
　　1 材料与方法第49-53页
　　　　· 菌种和载体第49页
　　　　· 酶和生化试剂第49页
　　　　· 实验仪器第49页
　　　　· 培养基及溶液配制第49页
　　　　· 菌体培养及保存第49页
　　　　· CTAB 法小量提取终极腐霉基因组 DNA第49页
　　　　· 载体质粒提取第49页
　　　　· 目的基因选择及引物设计第49-50页
　　　　· 果胶裂解酶左右臂扩增第50-51页
　　　　· 克隆载体连接第51页
　　　　· 目的基因克隆转化第51页
　　　　· 果胶裂解酶基因敲除载体的构建第51-53页
　　2 结果分析第53-56页
　　　　· 终极腐霉潮霉素 B 筛选浓度第53-54页
　　　　· P. ultimum 果胶裂解酶基因及上下游序列的克隆第54-56页
　　3 小结与讨论第56-57页
第六章 结论第57-58页
参考文献第58-63页
作者简介第63-64页
致谢第64页

本篇论文共64页，点击这进入下载页面。
 
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