论文目录 | |
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 英文缩略词表 | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-24页 |
| 1.1 鸡传染性支气管炎病概述 | 第12-13页 |
| 1.1.1 病原学 | 第12-13页 |
| 1.2 鸡传染性支气管炎病毒基因组结构 | 第13-14页 |
| 1.2.1 S糖蛋白 | 第13页 |
| 1.2.2 非结构性基因3a、3b、5a、5b蛋白质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 膜蛋白 | 第14页 |
| 1.2.4 核衣壳蛋白 | 第14页 |
| 1.2.5 小包膜蛋白 | 第14页 |
| 1.3 鸡传染性支气管炎病毒疫苗的研究进展 | 第14-17页 |
| 1.3.1 弱毒疫苗 | 第14-15页 |
| 1.3.2 灭活疫苗 | 第15页 |
| 1.3.3 重组疫苗 | 第15-16页 |
| 1.3.4 质粒DNA疫苗 | 第16-17页 |
| 1.3.5 反向基因疫苗 | 第17页 |
| 1.4 黏膜免疫系统 | 第17-18页 |
| 1.5 乳酸菌作为外源基因表达载体的研究进展 | 第18-19页 |
| 1.6 乳酸菌作为口服疫苗呈递载体的应用 | 第19-21页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第21-24页 |
| 2 截短的IBVS1基因原核表达与纯化 | 第24-38页 |
| 2.1 材料 | 第24-25页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24-25页 |
| 2.2 方法 | 第25-31页 |
| 2.2.1 引物设计与合成 | 第25页 |
| 2.2.2 IBVH120病毒增殖 | 第25-26页 |
| 2.2.3 IBVH120病毒RNA的提取 | 第26页 |
| 2.2.4 RT-PCR获取目的基因 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组pMD18-T-S1载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.6 重组pQE-30-S1载体的构建 | 第28-30页 |
| 2.2.7 重组载体的原核表达 | 第30页 |
| 2.2.8 重组蛋白的纯化 | 第30页 |
| 2.2.9 重组蛋白的Westernblot鉴定 | 第30-31页 |
| 2.3 结果 | 第31-36页 |
| 2.3.1 目的基因的扩增结果 | 第31页 |
| 2.3.2 pMD18-T-S1重组质粒的鉴定 | 第31-32页 |
| 2.3.3 重组质粒pQE-S1的鉴定结果 | 第32-33页 |
| 2.3.4 最佳诱导条件的确定结果 | 第33-34页 |
| 2.3.5 可溶性分析结果 | 第34-35页 |
| 2.3.6 重组蛋白的Westernblot鉴定结果 | 第35-36页 |
| 2.4 讨论 | 第36-38页 |
| 3 重组pLA-S1干酪乳杆菌的构建 | 第38-52页 |
| 3.1 材料 | 第38-39页 |
| 3.1.1 菌株、质粒 | 第38页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第38-39页 |
| 3.2 方法 | 第39-42页 |
| 3.2.1 pLA-S1重组质粒的构建 | 第39-40页 |
| 3.2.2 重组质粒pLA-S1的鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.3 重组pLA-S1干酪乳杆菌的构建 | 第41-42页 |
| 3.3 结果 | 第42-48页 |
| 3.3.1 重组大肠杆菌pLA-S1的PCR鉴定结果 | 第42-43页 |
| 3.3.2 重组大肠杆菌pLA-S1的酶切鉴定结果 | 第43页 |
| 3.3.3 重组pLA-S1/E.coli的Westernblot分析 | 第43-44页 |
| 3.3.4 重组pLA-S1/L.casei的PCR鉴定结果 | 第44页 |
| 3.3.5 重组干酪乳杆菌的Westernblot鉴定结果 | 第44-45页 |
| 3.3.6 重组干酪乳杆菌的间接免疫荧光鉴定结果 | 第45-46页 |
| 3.3.7 重组干酪乳杆菌的流式细胞术鉴定结果 | 第46-47页 |
| 3.3.8 重组干酪乳杆菌的激光共聚焦鉴定结果 | 第47-48页 |
| 3.4 讨论 | 第48-52页 |
| 4 pLA-S1重组干酪乳杆菌的免疫原性分析 | 第52-64页 |
| 4.1 材料 | 第52-53页 |
| 4.1.1 实验动物 | 第52页 |
| 4.1.2 菌株与毒株 | 第52页 |
| 4.1.3 主要试剂 | 第52页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第52-53页 |
| 4.2 方法 | 第53-55页 |
| 4.2.1 ID50的检测 | 第53页 |
| 4.2.2 免疫途径和免疫剂量的试验 | 第53-54页 |
| 4.2.3 免疫次数的试验 | 第54页 |
| 4.2.4 免疫用重组干酪乳杆菌pLA-S1/L.casei菌悬液的制备 | 第54页 |
| 4.2.5 MTT法检测脾脏T淋巴细胞的增值 | 第54页 |
| 4.2.6 样品的采集 | 第54-55页 |
| 4.2.7 间接ELISA方法检测血清中IgG和粪便各黏膜中的sIgA | 第55页 |
| 4.2.8 攻毒保护性试验 | 第55页 |
| 4.2.9 统计分析 | 第55页 |
| 4.3 结果 | 第55-62页 |
| 4.3.1 半数感染量(ID_(50))的测定结果 | 第55-56页 |
| 4.3.2 免疫途径的确定 | 第56-58页 |
| 4.3.3 免疫次数及免疫剂量的试验 | 第58-60页 |
| 4.3.4 脾淋巴细胞增殖试验结果 | 第60-61页 |
| 4.3.5 攻毒试验结果 | 第61-62页 |
| 4.4 讨论 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-78页 |
| 致谢 | 第78-80页 |
| 个人简介 | 第80页 |
