论文目录 | |
| 摘要 | 第2-4页 |
| Summary | 第4-6页 |
| 缩略语表 | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-20页 |
| 前言 | 第11页 |
| 1.1 植物细胞信号转导 | 第11-12页 |
| 1.2 蛋白激酶 | 第12页 |
| 1.3 植物促分裂原活化蛋白激酶级联途径 | 第12-15页 |
| 1.3.1 植物MAPK级联途径的组成 | 第12-13页 |
| 1.3.2 植物的MAPKKK | 第13-14页 |
| 1.3.3 植物的MAPKK | 第14页 |
| 1.3.4 植物的MAPK | 第14页 |
| 1.3.5 植物MAPK级联反应的研究现状 | 第14-15页 |
| 1.4 RNA干扰 | 第15-16页 |
| 1.5 Gateway技术的作用机制 | 第16-18页 |
| 1.6 研究内容及目的意义 | 第18-19页 |
| 1.7 技术路线 | 第19-20页 |
| 第二章 马铃薯MAPKK基因家族的筛选 | 第20-32页 |
| 2.1 材料与方法 | 第20页 |
| 2.1.1 工具酶和试剂盒 | 第20页 |
| 2.1.2 植物材料及其实验处理 | 第20页 |
| 2.2 马铃薯StMAPKK基因的鉴定 | 第20-23页 |
| 2.2.1 StMAPKK基因的筛选 | 第20-21页 |
| 2.2.2 序列比对和相关系统进化树的构建 | 第21页 |
| 2.2.3 启动子序列中顺式元件分析 | 第21页 |
| 2.2.4 马铃薯StMAPKK表达谱的qRT-RCR分析 | 第21-23页 |
| 2.3 结果与分析 | 第23-29页 |
| 2.3.1 马铃薯中StMAPKK家族成员的鉴定 | 第23页 |
| 2.3.2 多序列比对及系统发育分析 | 第23-26页 |
| 2.3.3 StMAPKKs在马铃薯基因组的分布和结构分析 | 第26-27页 |
| 2.3.4 StMAPKKs启动子序列中的顺式作用元件 | 第27-29页 |
| 2.4 StMAPKKs表达量分析 | 第29-31页 |
| 2.5 讨论 | 第31-32页 |
| 第三章 马铃薯St MAPKK1基因的克隆及其遗传转化 | 第32-46页 |
| 3.1 材料与方法 | 第32-33页 |
| 3.1.1 实验材料 | 第32页 |
| 3.1.2 载体与菌体 | 第32页 |
| 3.1.3 试剂与工具酶 | 第32页 |
| 3.1.4 培养基的类型 | 第32页 |
| 3.1.5 StMAPKK1引物的设计与合成 | 第32-33页 |
| 3.2 马铃薯StMAPKK1基因的克隆 | 第33-35页 |
| 3.2.1 马铃薯StMAPKK1基因的PCR扩增 | 第33页 |
| 3.2.2 PCR产物的回收 | 第33页 |
| 3.2.3 TA连接 | 第33-34页 |
| 3.2.4 大肠杆菌的制备 | 第34-35页 |
| 3.2.5 连接产物的转化 | 第35页 |
| 3.2.6 阳性克隆的测序及序列分析 | 第35页 |
| 3.3 StMAPKK1基因表达载体的构建 | 第35-36页 |
| 3.4 马铃薯的遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.4.1 农杆菌感受态的制备 | 第36页 |
| 3.4.2 农杆菌介导的马铃薯遗传转化 | 第36-37页 |
| 3.5 转基因植株的检测NPTⅡ | 第37页 |
| 3.6 结果与分析 | 第37-44页 |
| 3.6.1 StMAPKK1生物信息学分析与克隆 | 第37-40页 |
| 3.6.2 马铃薯StMAPKK1基因的克隆 | 第40-41页 |
| 3.6.3 表达载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.6.4 农杆菌介导的马铃薯块茎遗传转化 | 第42-43页 |
| 3.6.5 转基因植株的PCR检测 | 第43页 |
| 3.6.6 转基因植株StMAPKK1基因表达量分析 | 第43-44页 |
| 3.7 讨论 | 第44-46页 |
| 第四章 Gateway技术构建马铃薯StMAPKK1基因RNA的干扰表达载体 | 第46-55页 |
| 4.1 材料与方法 | 第46页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第46页 |
| 4.1.2 载体与菌体 | 第46页 |
| 4.1.3 试验的试剂 | 第46页 |
| 4.1.4 培养基的类型 | 第46页 |
| 4.1.5 Gateway-St MAPKK1引物的设计与合成 | 第46页 |
| 4.2 马铃薯Gateway-St MAPKK1干扰片段的克隆 | 第46-48页 |
| 4.2.1 马铃薯Gateway-St MAPKK1干扰片段的PCR扩增 | 第46-47页 |
| 4.2.2 PCR 产物的纯化 | 第47页 |
| 4.2.3 目的片段与T载体连接 | 第47页 |
| 4.2.4 连接产物的转化 | 第47页 |
| 4.2.5 阳性克隆的测序及序列分析 | 第47-48页 |
| 4.3 Gateway-StMAPKK1干扰片段入门载体的构建 | 第48-49页 |
| 4.3.1 线性化克隆载体 | 第48页 |
| 4.3.2 BP反应 | 第48页 |
| 4.3.3 热激法转化大肠杆菌感受态 | 第48-49页 |
| 4.4 植物表达载体的构建（LR反应） | 第49页 |
| 4.5 马铃薯Gateway-StMAPKK1基因的遗传转化 | 第49页 |
| 4.6 结果与分析 | 第49-54页 |
| 4.6.1 马铃薯Gateway-St MAPKK1基因的克隆 | 第49-50页 |
| 4.6.2 BP反应构建入门载体pDONR221-StMAPKK1 | 第50-51页 |
| 4.6.3 LR反应构建植物表达载体 | 第51页 |
| 4.6.4 农杆菌介导的马铃薯块茎遗传转化 | 第51-52页 |
| 4.6.5 转基因植株的PCR检测 | 第52-53页 |
| 4.6.6 转基因植株Gateway-StMAPKK1基因表达量分析 | 第53-54页 |
| 4.7 讨论 | 第54-55页 |
| 第五章 结论与展望 | 第55-57页 |
| 5.1 结论 | 第55-56页 |
| 5.2 创新点 | 第56页 |
| 5.3 展望 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-63页 |
| 附录 1 Trizol 法提取马铃薯 RNA | 第63-64页 |
| 附录 2 cDNA 第一链的合成 | 第64-65页 |
| 附录 3 培养基配制 | 第65-66页 |
| 附录 4 抗生素和激素的配制 | 第66-67页 |
| 附录 5 DNA 切胶回收 | 第67-68页 |
| 附录 6 质粒提取 | 第68-69页 |
| 附录 7 植物基因组 DNA 提取 | 第69-70页 |
| 附录 8 农杆菌感受态的制备 | 第70-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73-74页 |
