论文目录 | |
| 摘要 | 第2-4页 |
| ABSTRACT | 第4-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-21页 |
| 1.1 棉花简介及生产概况 | 第11-12页 |
| 1.2 黄萎病对棉花的影响 | 第12-13页 |
| 1.3 棉花黄萎病抗病研究进展 | 第13-14页 |
| 1.3.1 传统防控方法 | 第13页 |
| 1.3.2 棉花抗黄萎病材料的筛选方法 | 第13-14页 |
| 1.4 植物防御反应机制 | 第14-16页 |
| 1.5 茉莉酸信号通路的研究 | 第16-18页 |
| 1.5.1 茉莉酸的生物合成 | 第16页 |
| 1.5.2 茉莉酸信号通路的研究进展 | 第16-18页 |
| 1.5.3 茉莉酸类化合物信号通路的研究进展 | 第18页 |
| 1.6 茉莉酸在植物抗病中的作用 | 第18-19页 |
| 1.7 病毒诱导基因沉默技术简介 | 第19-20页 |
| 1.8 本研究的目的及意义 | 第20-21页 |
| 第二章 实验材料和方法 | 第21-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第21页 |
| 2.1.2 菌株与载体 | 第21页 |
| 2.1.3 酶与试剂 | 第21页 |
| 2.1.4 常用溶液及抗生素的配制 | 第21-22页 |
| 2.1.5 培养基的配制 | 第22-23页 |
| 2.1.6 VIGS重悬液的配制 | 第23-24页 |
| 2.1.7 模版与引物 | 第24页 |
| 2.1.7.1 模版的获得 | 第24页 |
| 2.1.7.2 引物的合成 | 第24页 |
| 2.1.8 仪器与设备 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-42页 |
| 2.2.1 GhCOI1和GhMYC2基因的克隆 | 第25-34页 |
| 2.2.1.1 棉花材料的获得 | 第25页 |
| 2.2.1.2 棉花总RNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.1.3 cDNA第一链的合成 | 第26-27页 |
| 2.2.1.4 棉花基因的扩增 | 第27页 |
| 2.2.1.5 目的片段与载体的连接及其测序分析 | 第27-34页 |
| 2.2.2 COI1和MYC2蛋白的同源性序列分析 | 第34页 |
| 2.2.3 COI1和MYC2蛋白的进化树分析 | 第34页 |
| 2.2.4 农杆菌介导的GhCOI1和GhMYC2的VIGS | 第34-36页 |
| 2.2.4.1 农杆菌GV3101感受态细胞的制备 | 第34-35页 |
| 2.2.4.2 重组载体转化农杆菌GV3101感受态细胞 | 第35-36页 |
| 2.2.4.3 农杆菌菌落PCR检测 | 第36页 |
| 2.2.5 棉花VIGS体系的建立 | 第36-37页 |
| 2.2.5.1 摇菌 | 第36页 |
| 2.2.5.2 扩大培养 | 第36-37页 |
| 2.2.5.3 菌体的重悬与OD值的测定 | 第37页 |
| 2.2.5.4 VIGS棉花幼苗的获得 | 第37页 |
| 2.2.5.5 接菌与培养 | 第37页 |
| 2.2.6 VIGS植株的RT-PCR与qPCR检测 | 第37-39页 |
| 2.2.6.1 VIGS棉花植株RNA的获得 | 第37-38页 |
| 2.2.6.2 VIGS棉花cDNA的获得 | 第38页 |
| 2.2.6.3 VIGS棉花沉默基因的检测 | 第38-39页 |
| 2.2.7 大丽轮枝菌V991的侵染与检测 | 第39-42页 |
| 2.2.7.1 大丽轮枝菌V991的培养 | 第39页 |
| 2.2.7.2 大丽轮枝菌V991浓度的测定 | 第39-40页 |
| 2.2.7.3 大丽轮枝菌V991的接种 | 第40页 |
| 2.2.7.4 棉花染病后的表型统计 | 第40-42页 |
| 第三章 结果与分析 | 第42-57页 |
| 3.1 棉花GhCOI1的抗病性分析 | 第42-49页 |
| 3.1.1 GhCOI1总RNA的获得及cDNA的合成 | 第42页 |
| 3.1.2 棉花GhCOI1基因克隆及序列分析 | 第42-45页 |
| 3.1.2.1 GhCOI1基因的克隆 | 第42-43页 |
| 3.1.2.2 序列分析 | 第43页 |
| 3.1.2.3 棉花GhCOI1同源性分析 | 第43-45页 |
| 3.1.3 棉花GhCOI1的组织表达分析 | 第45页 |
| 3.1.4 大丽轮枝菌V991对棉花GhCOI1的诱导表达分析 | 第45-46页 |
| 3.1.5 棉花GhCOI1病毒诱导基因沉默载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.1.5.1 GhCOI1基因片段的获得 | 第46-47页 |
| 3.1.5.2 VIGS载体的构建与工程菌的获得 | 第47页 |
| 3.1.6 GhCOI1沉默植株的获得 | 第47-48页 |
| 3.1.7 GhCOI1沉默植株对大丽轮枝菌V991抗性反应 | 第48-49页 |
| 3.2 棉花GhMYC2的抗病性分析 | 第49-57页 |
| 3.2.1 棉花GhMYC2基因克隆及序列分析 | 第49-52页 |
| 3.2.1.1 目的基因的克隆 | 第49-50页 |
| 3.2.1.2 序列分析 | 第50-51页 |
| 3.2.1.3 棉花GhMYC2同源性分析 | 第51-52页 |
| 3.2.2 棉花GhMYC2的组织表达分析 | 第52-53页 |
| 3.2.3 大丽轮枝菌V991对棉花GhMYC2诱导表达分析 | 第53-54页 |
| 3.2.4 棉花GhMYC2病毒诱导基因沉默载体的构建 | 第54-55页 |
| 3.2.4.1 GhMYC2基因片段的获得 | 第54页 |
| 3.2.4.2 VIGS载体的构建与工程菌的获得 | 第54-55页 |
| 3.2.5 GhMYC2沉默植株的获得 | 第55-56页 |
| 3.2.6 V991对棉花GhMYC2沉默植株的表型与发病情况 | 第56-57页 |
| 第四章 讨论 | 第57-59页 |
| 第五章 结论 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66-67页 |
| 司怀军导师简介 | 第67-68页 |
| 吴家和导师简介 | 第68-69页 |
