论文目录 | |
| 摘要 | 第2-4页 |
| Abstract | 第4-7页 |
| 英文缩写词 | 第7-10页 |
| 1 前言 | 第10-13页 |
| 2 材料与方法 | 第13-29页 |
| 2.1 主要设备 | 第13页 |
| 2.2 试剂与用品 | 第13-16页 |
| 2.2.1 试剂 | 第13-14页 |
| 2.2.2 主要试验用品耗材 | 第14页 |
| 2.2.3 试验用品的清洗与消毒 | 第14-15页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第15-16页 |
| 2.3 仔猪和细胞模型 | 第16-17页 |
| 2.4 试验方法 | 第17-28页 |
| 2.4.1 猪EAAT3 cDNA序列的克隆 | 第17-20页 |
| 2.4.2 猪EAAT3过表达载体的构建 | 第20-22页 |
| 2.4.3 猪EAAT3 RNA干扰序列的设计与合成 | 第22页 |
| 2.4.4 肠上皮细胞系IPEC-J2的培养 | 第22页 |
| 2.4.5 转染 | 第22-24页 |
| 2.4.6 细胞免疫荧光染色 | 第24页 |
| 2.4.7 荧光定量PCR检测各基因mRNA表达丰度 | 第24-26页 |
| 2.4.8 细胞增殖的检测 | 第26页 |
| 2.4.9 游离氨基酸的测定 | 第26-27页 |
| 2.4.10 Western blot检测目的蛋白 | 第27-28页 |
| 2.5 数据处理 | 第28-29页 |
| 3 结果与分析 | 第29-38页 |
| 3.1 猪EAAT3 cDNA的克隆与过表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 3.1.1 猪肠道总RNA制备 | 第29页 |
| 3.1.2 猪EAAT3 cDNA的获取与载体构建 | 第29-30页 |
| 3.2 EAAT3-pcDNA3.1+稳定转染IPEC-J2细胞系的筛选 | 第30页 |
| 3.3 EAAT3在IPEC-J2细胞中过表达的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3.1 细胞免疫荧光染色 | 第30页 |
| 3.3.2 转染前后EAAT3的表达情况 | 第30-31页 |
| 3.4 EAAT3在IPEC-J2细胞中RNA干扰的获取 | 第31-34页 |
| 3.5 EAAT3对IPEC-J2细胞中氨基酸转运的影响 | 第34页 |
| 3.6 EAAT3对IPEC-J2细胞增殖的影响 | 第34-35页 |
| 3.7 EAAT3对m TOR信号通路关键蛋白的影响 | 第35-36页 |
| 3.8 EAAT3对ATF4/xCT途径的影响 | 第36-38页 |
| 4 讨论 | 第38-42页 |
| 4.1 EAAT3在IPEC-J2细胞中的过表达和RNA干扰 | 第38-39页 |
| 4.2 EAAT3激活mTOR信号通路促进细胞增殖 | 第39-40页 |
| 4.3 EAAT3通过mTOR/ATF4/xCT途径调控氨基酸转运 | 第40-42页 |
| 5 结论 | 第42-43页 |
| 致谢 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-48页 |
| 附录A EAAT3-pcDNA3.1+测序图谱（sequenced by M13F） | 第48-50页 |
| 附录B EAAT3-pc DNA3.1+测序图谱（sequenced by M13R） | 第50-52页 |
| 附录C | 第52页 |
