论文目录 | |
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-8页 |
| 1 引言 | 第8-18页 |
| 1.1 剑麻概述 | 第8页 |
| 1.2 剑麻斑马纹病 | 第8-9页 |
| 1.3 剑麻斑马纹病病原鉴定 | 第9页 |
| 1.4 植物遗传转化技术 | 第9-11页 |
| 1.5 影响农杆菌介导遗传转化的因素 | 第11-13页 |
| 1.5.1 预培养 | 第11-12页 |
| 1.5.2 菌液浓度和侵染时间 | 第12页 |
| 1.5.3 乙酰丁香酮的浓度 | 第12页 |
| 1.5.4 共培养条件 | 第12-13页 |
| 1.5.5 抗生素的使用 | 第13页 |
| 1.6 转基因技术在麻类中的应用 | 第13-14页 |
| 1.6.1 转基因技术在剑麻上的应用 | 第13页 |
| 1.6.2 转基因技术在亚麻中应用 | 第13页 |
| 1.6.3 转基因技术在红麻中应用 | 第13-14页 |
| 1.6.4 转基因技术在苎麻中应用 | 第14页 |
| 1.6.5 转基因技术在黄麻中应用 | 第14页 |
| 1.7 抗烟草疫霉基因的研究 | 第14-15页 |
| 1.7.1 Hevein-like基因 | 第14页 |
| 1.7.2 抗坏血酸过氧化物酶(Ascorbate Peroxidase,以下简写为APX) | 第14-15页 |
| 1.8 Hrs203J启动子的研究 | 第15页 |
| 1.9 研究目的意义及内容、技术路线 | 第15-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-32页 |
| 2.1 试验材料 | 第18-20页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第18页 |
| 2.1.2 酶和生化试剂 | 第18-19页 |
| 2.1.3 实验仪器 | 第19页 |
| 2.1.4 常用培养基、抗生素和激素的配制 | 第19-20页 |
| 2.2 植物表达载体pCAMIBA1300-Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS转化农杆菌 | 第20-27页 |
| 2.2.1 表达载体pCAMIBA1300-Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS的构建 | 第21-25页 |
| 2.2.2 表达载体pCAMIBA1300-Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS转化农杆菌 | 第25-27页 |
| 2.3 农杆菌介导的剑麻遗传转化 | 第27-28页 |
| 2.3.1 剑麻愈伤对PPT的抗性研究 | 第27页 |
| 2.3.2 不同脱敏抗生素对农杆菌(EHA105)抑制效果比较 | 第27页 |
| 2.3.3 不同脱敏抗生素对剑麻愈伤的影响 | 第27-28页 |
| 2.3.4 剑麻的遗传转化体系的优化 | 第28页 |
| 2.3.5 Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS对剑麻的遗传转化 | 第28页 |
| 2.4 剑麻转化植株的分子检测 | 第28-30页 |
| 2.4.1 剑麻转化植株的PCR检测 | 第28-29页 |
| 2.4.2 转化植株目的基因的反转录PCR检测 | 第29-30页 |
| 2.5 烟草疫霉菌的分离与鉴定 | 第30-32页 |
| 2.5.1 病叶片的采集及病原菌培养 | 第30-31页 |
| 2.5.2 病原菌DNA的提取 | 第31页 |
| 2.5.3 rDNA-ITS PCR扩增及克隆测序 | 第31页 |
| 2.5.4 rDNA-ITS PCR序列分析 | 第31-32页 |
| 2.5.5 烟草疫霉菌致病力的鉴定 | 第32页 |
| 2.6 转基因剑麻植株的抗病性鉴定 | 第32页 |
| 3 结果与分析 | 第32-45页 |
| 3.1 植物表达载pCAMIBA1300-Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS的构建 | 第32-35页 |
| 3.1.1 目的基因引物合成 | 第32-33页 |
| 3.1.2 H1和A2片段的基因产物的回收 | 第33页 |
| 3.1.3 重组载体的构建及鉴定 | 第33-35页 |
| 3.1.4 植物表达载体pCAMIBA1300-Hr203J-Hevein-NOS-Hr203J-APX-NOS转化农杆菌 | 第35页 |
| 3.2 剑麻遗传转化体系的优化 | 第35-38页 |
| 3.2.1 剑麻愈伤对PPT抗性的研究 | 第35-36页 |
| 3.2.2 不同脱敏抗生素对农杆菌EHA105抑制效果比较 | 第36页 |
| 3.2.3 不同抗生素对剑麻愈伤的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.4 农杆菌介导转化剑麻影响因素 | 第37-38页 |
| 3.3 转基因的剑麻苗的检测 | 第38-41页 |
| 3.3.1 转基因植株PCR验证 | 第39-40页 |
| 3.3.2 阳性转化植株的RT-PCR检测 | 第40-41页 |
| 3.4 烟草疫霉菌的分离与鉴定 | 第41-43页 |
| 3.4.1 烟草疫霉菌分离培养并提取DNA | 第41页 |
| 3.4.2 病原菌DNA的提取及rDNA-ITS PCR | 第41页 |
| 3.4.3 rDNA-ITS PCR序列分析 | 第41-42页 |
| 3.4.4 疫霉菌株致病力鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5 转基因剑麻植株的抗病性鉴定 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-47页 |
| 4.1 关于农杆菌介导的遗传转化体系的优化 | 第45页 |
| 4.2 关于剑麻斑马纹病菌鉴定与致病力的研究 | 第45-47页 |
| 5 结论 | 第47-48页 |
| 6 后续研究计划 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-55页 |
| 缩略语表 | 第55-56页 |
| 附录 | 第56-57页 |
| 硕士期间科研成果简介 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58页 |
