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融合蛋白CTP-SOD在毕赤酵母中的表达、纯化及抗氧化能力
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融合蛋白CTP-SOD在毕赤酵母中的表达、纯化及抗氧化能力
论文目录
 
摘要第1-7 页
Abstract第7-9 页
第1章 文献综述第9-19 页
　　· 氧自由基和超氧化物歧化酶第9-11 页
　　　　· 氧自由基的产生和危害第9-10 页
　　　　· 超氧化物歧化酶第10-11 页
　　· 蛋白转导肽研究进展第11-16 页
　　　　· 蛋白转导域第11-12 页
　　　　· TAT转运机制研究进展第12-15 页
　　　　· 应用及前景第15-16 页
　　· 巴斯德毕赤酵母表达系统第16-19 页
第2章 绪论第19-21 页
　　· 研究目的与意义第19 页
　　· 研究内容第19-21 页
第3章 实验材料及仪器第21-23 页
　　· 实验材料第21-22 页
　　　　· 菌株和质粒第21 页
　　　　· 主要试剂第21 页
　　　　· 引物及测序第21 页
　　　　· 主要试剂第21-22 页
　　　　· 其他第22 页
　　· 主要仪器第22-23 页
第4章 实验方法第23-39 页
　　· 取材及样品处理第23 页
　　· 总RNA提取及反转录第23-24 页
　　　　· 总RNA提取第23 页
　　　　· RNA完整性鉴定第23-24 页
　　　　· 浓度测定第24 页
　　· RT-PCR扩增CTP-SOD基因第24-25 页
　　　　· 引物设计第24 页
　　　　· cDNA第一条链的合成第24-25 页
　　　　· CTP-SOD基因扩增第25 页
　　· 重组质粒CTP-SOD/pPIC9K的构建第25-26 页
　　　　· 小量制备pPIC9K质粒第25-26 页
　　　　· 质粒和基因的酶切与连接第26 页
　　· CTP-SOD/pPIC9K大肠杆菌克隆菌株的构建第26-28 页
　　　　· 感受态E.coli Top10细胞的制备第26-27 页
　　　　· 重组质粒转化E.coli Top10第27 页
　　　　· 菌落PCR鉴定阳性克隆第27-28 页
　　　　· DNA测序鉴定重组质粒第28 页
　　· CTP-SOD毕赤赤酵母表达菌株的构建第28-31 页
　　　　· 大量制备CTP-SOD/pPIC9K质粒第28-29 页
　　　　· CTP-SOD/pPIC9K质粒线性化第29 页
　　　　· 毕赤酵母GS115感受态细胞制备第29-30 页
　　　　· 电击法转化酵母细胞第30 页
　　　　· 菌落PCR鉴定阳性重组子第30 页
　　　　· 小量表达筛选可表达克隆第30-31 页
　　　　· 诱导时间与表达量关系的确定第31 页
　　· Western blotting分析第31-33 页
　　　　· 试剂配制第31-32 页
　　　　· 转膜第32 页
　　　　· 膜的封闭和抗体孵育第32-33 页
　　　　· 增强化学发光法(ECL)显色第33 页
　　· 重组蛋白的制备第33-35 页
　　　　· 三角瓶大量发酵第33 页
　　　　· 蛋白盐析第33 页
　　　　· 透析除盐及纯化第33-34 页
　　　　· 比活测定第34-35 页
　　· 重组蛋白的抗氧化能力第35-39 页
　　　　· 试剂的配制第36 页
　　　　· HeLa细胞培养第36-37 页
　　　　· HeLa细胞氧化损伤模型建立第37-38 页
　　　　· CTP-SOD对氧化胁迫下细胞的保护作用第38-39 页
第5章 实验结果与讨论第39-48 页
　　· 人总RNA提取第39 页
　　· CTP-SOD基因扩增第39 页
　　· CTP-SOD基因和pPIC9K质粒的双酶切第39-40 页
　　· CTP-SOD/pPIC9K重组质粒构建第40-42 页
　　· CTP-SOD酵母工程菌的构建第42-43 页
　　　　· 菌落PCR鉴定P.pastoris阳性重组子第42 页
　　　　· SDS-PAGE筛选可表达重组P.pastoris菌株第42-43 页
　　　　· 诱导时间和表达量关系的确定第43 页
　　· 蛋白盐析条件第43-44 页
　　· 蛋白纯化及Western blotting鉴定第44-45 页
　　· CTP-SOD对氧化胁迫下细胞的保护作用第45-46 页
　　· 讨论第46-48 页
参考文献第48-54 页
致谢第54-55 页
在学期间发表论文第55页

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